标准解读

《NY/T 574-2002 地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法》是一项针对地方流行性牛白血病检测的标准，该标准详细规定了利用琼脂凝胶免疫扩散技术对牛白血病进行诊断的方法。根据此标准，实验主要分为几个关键步骤：准备抗原、制备琼脂板、打孔加样以及观察结果。

首先，在抗原的准备上，需要使用纯化的牛白血病病毒作为阳性对照抗原，并且还需要有阴性对照以确保实验准确性。这些抗原应该按照特定的比例稀释后备用。

接着是琼脂板的制备过程。通常情况下，会采用一定浓度的琼脂溶液倒入平皿中冷却固化形成薄层琼脂平板。为了保证实验效果，所使用的琼脂需经过严格的质量控制，确保其透明度良好且无污染。

然后，在已固化的琼脂板上按照预定模式打孔，将待测样品与对照品分别加入到对应的孔内。这一步骤要求操作者具备较高的技术水平，以避免因加样不当而影响最终结果。

最后，将处理好的琼脂板置于恒温条件下培养一段时间（一般为24-48小时），之后通过肉眼或借助放大镜等工具观察各孔之间是否形成了清晰可见的沉淀线来判断样本是否含有牛白血病病毒特异性抗体。如果在测试样本与阳性对照抗原之间出现明显的白色沉淀带，则表明该样本中含有针对牛白血病病毒的抗体；反之则为阴性反应。

整个过程中需要注意保持实验室环境清洁、避免交叉污染，并严格按照标准操作规程执行每一步骤，从而确保检测结果的有效性和可靠性。


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  • 被代替
  • 已被新标准代替
  • 2002-08-27 颁布
  • 2002-12-01 实施
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文档简介

ICS11.220NYB41中华人民共和国农业行业标准NY/T574一2002地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法Agargelimmunodiffusiontestforenzooticbovineleukosis2002-08-27发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布

NY/T574-2002地方流行性牛白血病（enzooticbovineleukosis,简称EBL)是由牛白血病病毒引起牛的淋巴样细胞恶性增生，进行性恶病质变化和全身淋巴结肿大为特征的一种慢性、进行性、接触传染性肿瘤病。被世界动物卫生组织WorldOrganizationforAnimalHealth（英），OfficeInternationaldesEpizooties（法），○IE列为B类疾病，我国农业部把该病列为二类动物疫病。本标准规定的琼脂凝胶免疫扩散(AGID),是根据OIE《诊断试验和疫苗标准手册》2000年版)和我因实际情况制定的，是国际贸易指定的诊断方法。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准起草人：刘焕章、辛九庆。

NY/T574-2002地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验方法1范围本标准规定了地方流行性牛白血病琼脂凝胶免疫扩散试验诊断技术要求。本标准适用于地方流行性牛白血病的诊断、检疫和流行病学调查。2琼脂凝胶免疫扩散试验2.1材料准备2.1.1打孔器(内径5mm)，琼脂糖(试剂级）2.1.2抗原;标准阳性血清、阴性血清。2.2操作方法2.2.1琼脂精凝胶板制备在磷酸缓冲液(0.05mol/LpH7.2)100ml.中加人琼脂糖(试剂级)1.0g.加氯化钠分析试剂8.5g.10%硫柳汞(试剂级)1ml.。将上述各种成分混合，加热充分溶解.超热加到平血中注意不要产生气泡。每个平血内加琼脂糖溶液15ml.～17ml.(直径9cm）,胶板厚度为2mm。待凝固后把平血倒贸，放在4（冰箱中保存10d。2.2.2打孔2.2.2.1孔型图案的准备：在坐标纸上面好7孔型(见图1）,孔径5mm,孔距3mm。图1琼脂精凝胶板打孔示意图2.2.2.2把图案放在琼脂板平皿下，用打孔器按图型准确位置打孔孔内琼脂用针头小心挑出，勿破坏周围琼脂，将平血底部在酒精灯上路烤封底。2.2.3滴加抗原和血清七孔型中央孔加抗原（Ag),1、3、5孔加标准阳性血消,2、4、6孔分别加三份被检血清。各孔一次加满,以不溢出为准,平血加盖后放在湿盒中，于室温(20℃以上)作用,24h和48h各检查一次，检查时用斜射强光，背景要暗。2.3结果判定2.3.1阳性:标准阳性血清与抗原孔之间有两条沉淀线。靠抗原孔的是gpa对乙醚敏感的囊膜蛋白）抗体沉淀线，靠血清孔为Pa抗乙醚的核蛋白)抗体沉淀线。抗原孔和被检血清孔之间出现一条清晰的沉淀线·并与标

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