遗传学综合设计实验

物理因素对细菌遗传效应的遗传分析

——紫外诱变与筛选组长：夏波林组员：张至玮、马丽娟、高润东实验目的了解物理因素对遗传物质的影响；熟悉紫外线诱变的原理和方法；掌握微生物的紫外线诱变技术。DNA对紫外线（UV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。紫外线引起DNA结构变化的形式有DNA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。因为生物体中具有对损伤DNA的修复机制。经过UV照射，可以通过光复活和暗修复（切除修复）完成修复。为避免修复，获得更多的突变菌种，诱变处理后的实验操作在红光下进行。枯草芽孢杆菌式G＋菌，在增殖过程中能力产生大量的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等胞外酶的能力。但不同菌株产酶量不同。仪器、试剂与材料实验菌种：枯草芽孢杆菌实验试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、碘液实验仪器：超净工作台、微波炉、高压灭菌锅、恒温培养箱、鼓风干燥箱、磁力搅拌器、培养皿、离心管、酒精灯、涂布棒、移液器、接种环、紫外线灯（15W）、玻璃棒、pH试纸等实验步骤紫外灯：15W，28.7cm，稳定30min。处理强度：以时间为变量30s、60s、120s、240s处理方法：PlanA、PlanB涂布量：0.2ml6＊106cfu/ml第一天（诱变处理PlanA）稀释之后再处理预实验第二天（诱变处理PlanB）第三天编号编号一一对应达到预期目标，计算致死率。第三天第四天数据测量与统计对照正突变负突变负突变正突变初筛复筛实验结果表1致死率

6*1023*1036*1031.5*10430s0.450.80\难以计数60s0.990.98\0.99120s0.98\0.990.99240s1\1.001.00实验结果编号123456789101112平均值H/mm0.600.601.001.001.001.001.000.500.701.101.000.90

C/mm0.100.100.200.200.200.200.200.100.100.200.200.20

H/C6.006.005.005.005.005.005.005.007.005.505.004.505.33表2正突变初筛结果本组初筛大致选出了80个菌落，经过计算H/C，我们将统计的菌落数据分为正突变、负突变、对照三组，每组12个数据。实验结果编号123456789101112平均值H/mm1.001.401.501.701.801.401.101.401.301.401.401.50

C/mm0.300.400.400.500.500.400.300.400.400.400.400.40

H/C3.333.503.753.753.603.503.673.503.253.503.503.753.55表3对照组初筛结果实验结果编号123456789101112均值H/mm0.600.700.800.700.701.001.000.700.800.801.101.10

C/mm0.300.300.300.300.300.400.400.300.300.300.400.40

H/C2.002.342.672.342.342.502.502.342.672.672.752.752.49表4负突变初筛结果T检验Sig<0.05具有显著性差异初筛发生了正突变。表5正突变初筛结果检验T检验Sig<0.05具有显著性差异初筛发生了负突变。表6负突变初筛结果检验实验结果编号123456789101112平均值H/C13.002.752.754.003.803.403.503.803.804.004.673.20

24.003.752.754.673.603.754.335.004.004.003.503.50

33.253.503.003.405.334.504.334.334.253.753.503.75

平均值3.423.332.834.024.243.884.054.374.023.923.893.483.79表7正突变复筛结果本组对初筛选出的36个菌落进行复筛，经过一天的培养，从数据中大致可以看出H/C的值均有朝向对照组变化的趋势，即出现了回复突变。实验结果编号123456789101112平均值H/C13.333.002.703.333.333.333.253.503.253.203.503.75

23.753.504.003.753.753.753.003.003.003.253.503.50

33.203.503.503.403.603.503.803.753.753.753.754.33

平均值3.433.333.403.493.563.533.353.423.333.403.583.863.47表8对照组复筛结果实验结果编号123456789101112平均值H/C13.501.253.002.832.432.432.803.003.003.203.003.20

23.003.002.602.573.502.433.503.203.003.003.203.40

33.253.753.753.203.203.203.003.202.803.503.753.50

平均值3.252.673.122.873.042.693.103.132.933.233.323.373.06表9负突变复筛结果T检验Sig<0.05，复筛结果和对照组依然具有显著性差异复筛之后依然存在着正突变效应。表10正突变复筛与对照组T检验T检验Sig<0.05，复筛结果和对照组依然具有显著性差异复筛之后依然存在着负突变效应。表11负突变复筛与对照组T检验T检验Sig<0.05初筛和复筛结果具有显著性差异从数据可以看出，复筛发生了回复突变。表12初筛和复筛正突变结果T检验T检验Sig<0.05初筛和复筛结果具有显著性差异从数据可以看出，复筛发生了回复突变。表13初筛和复筛负突变结果T检验T检验Sig>0.05，对照