微波辅助热水浸提法提取香菇多糖

绥化学院本科毕业设计（论文）微波辅助热水浸提法提取香菇多糖的研究学生姓名：李斌 学 号： 200850334专 业： 食品科学与工程年 级： 2008级一班指导教师： 王广慧副教授SuihuaUniversityGraduationPaperHotWaterExtractLentinanbyMicrowaveAidedStudentnameStudentnumberStudentnameStudentnumberMajorSupervisingteacher200850334FoodSscienceandEngineeringWangGuanghuiSuihuaUniversity香菇是世界第二大食用菌，也是我国特产之一，在民间素有“山珍”之称，营养丰富。香菇多糖是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，具有抗肿瘤、调节免疫、抗病毒、防感染等生物活性。近年来关于香菇多糖的提取研究很多，如热水浸提法、稀酸浸提法、稀碱浸提法、酶法提取及超声法等。1991年，Pare等提出了微波提取的机理，有报道使用该技术提取香菇多糖获得了成功，证明该方法能够节省大量能耗和时间。本文以香菇多糖为研究对象，采用单因素实验对香菇多糖的微波提取工艺进行了研究，比较了料液比、微波功率和辐射时间对多糖提取率的影响，并得到了微波法提取香菇多糖的最佳工艺条件为：料液比1:60m乙、微波功率800W，辐射时间6min，通过实验结果发现，微波法具有节能、省时、操作便利和提取率高等特点。关键词：香菇多糖；微波；提取AbstractAroundtheworldmushroomisthesecondbiggestediblefungus.Itisalsooneofspecialtyinourcountry.Itisknownas“Mountaindelicacies"sayincivilandrichinnutrition.Lentinanistheseparateandpurifiedglucanfrommushroom.Lentinanhaveanticancer,regulateimmune,antivirus,preventinfectionbiologicalactivity.Inrecentyears,theresearchaboutlentinanextractisalot.Suchashotwaterextraction,diluteacidextraction,dilutealkaliextraction,enzymaticmethodandtheultrasonicmethod.In1991,Pareputforwardthemechanismofmicrowaveextraction.Accordingtothereportheusethetechnologytoextractlentinansucceeded.Itprovethemethodcansavealotofenergyandtime.Thispapertakinglentinanastheresearchobject,usingthesinglefactorexperimenttoresearchthelentinanmicrowaveextractiontechnologyandtheExtractionyieldundertheinfluenceofdifferentliquidratio,powerofmicrowaveandradiationtime.ObtainsTheResult,theBesttechnologicalconditions:Iquidratio1:60mL,Powerofmicrowave800W,Radiationtime6m仍.Throughtheexperimentalresults,microwavemethodisaenergy-saving,time-saving,operationconvenienceandhighextractionyieldmethod.Keyword:Microwave;Microwave;ExtractionTOC\o"1-5"\h\z摘要 I\o"CurrentDocument"Abstract II\o"CurrentDocument"第1章绪论 1\o"CurrentDocument"第1节 香菇及香菇多糖的概述 1\o"CurrentDocument"第2节香菇多糖中主要化学成分 3\o"CurrentDocument"第3节香菇多糖提取方法研究 4\o"CurrentDocument"第4节香菇多糖生物活性及应用 7\o"CurrentDocument"第5节 本课题研究目的及意义 9\o"CurrentDocument"第2章微波辅助热水浸提法提取香菇多糖的研究 9\o"CurrentDocument"第1节试验材料与设备 9\o"CurrentDocument"第2节试验方法 10\o"CurrentDocument"第3节试验结果分析 10\o"CurrentDocument"结论 12\o"CurrentDocument"参考文献 12致谢 第1章绪论第1节香菇及香菇多糖的概述香菇素有“山珍之王”之称，是高蛋白、低脂肪的营养保健食品。我国历代医学家对香菇均有著名论述。通过现代医学和营养学不断深入研究，香菇的药用价值也不断被发掘。香菇中麦角甾醇含量很高，对防治佝偻病有效；香菇多糖（住1,3葡聚糖）能增强细胞免疫能力，从而抑制癌细胞的生长；香菇含有六大酶类的40多种酶，可以纠正人体酶缺乏症；香菇中的脂肪所含脂肪酸，对人体降低血脂有益。1.1香菇产业香菇是仅次于双孢蘑菇的世界第二大食用菌，长期以来香菇生长在段木上，从播种到采头潮菇一般需要8〜12个月。20世纪70年代早期出现了人造菇木栽培法，采用木屑在可灭菌的塑料袋中栽培香菇，从而缩短栽培周期并提高了产量。这种栽培模式在可控环境中进行，并可实现周年生产。但与传统栽培模式相比，却需要较高的能源成本。20世纪70年代世界最大的香菇生产国是日本，其次是中国和韩国。1974年全球香菇产量估计在143,000t，其中日本占总产量的94.5%，中国占5.3%，韩国占0.2%。1987年，中国香菇产量达178,800t，第一次超过日本。从此，中国成为世界香菇的主产国。1990年是中国食用菌生产的历史转折点，中国食用菌产量第一次超过1,000,000t，其中香菇产量为230，000t。1991年中国香菇产量占世界香菇总产量的60.5%，1997年达85.1%。从1985〜1995年十年香菇产量的比较可以发现，中国香菇产量增加了1,060%，现在中国已成为世界最大的香菇生产、出口和消费国。[1]由于香菇的食用和药用价值，香菇已成为世界上发展速度最快的菇类。经过过去十年，在科学研究的推动下香菇产业快速发展，香菇产业大展宏图的时代已经到来。尽管目前香菇被认为是世界第二大类食用菌，但是可以预测香菇不久将会成为世界第一大菇类。1.2香菇多糖产业香菇多糖（Lentina简称LNT）是从伞菌科香菇属的天然香菇子实体中提取得到的一种叩〜1,3葡聚糖）⑵它是一类具有调节人体生理机能、增强免疫力、预防和治疗多种慢性疾病作用的物质，尤其是它具有显著的、独特的抗肿瘤活性。70年代初，Shida等用三氯醋酸浸提、甲醇等沉淀从香菇中提取得到三种。〜葡聚糖水溶性多糖，首次报道了香菇中含有抗肿瘤的活性物质，并认为一种分子量在16000的香菇多糖也具有抗肿瘤活性。80年代以来，香菇多糖的研究更为深入，香菇多糖的提取由子实体发展到从深层发酵香菇菌丝体，对香菇多糖的研究大量转向药理和临床实验，结果表明香菇多糖具有广泛的抗肿瘤作用此外，香菇多糖还是治疗各种肝炎，特别是慢性迁移肝炎的良好药物。⑶目前，香菇多糖是市场上常见的医药和保健用品。随着分子生物学的发展和香菇多糖研究的不断深入，科学家们已经开始在基因水平探讨香菇多糖生物活性的机制。多糖生物活性与结构问的关系的研究还落后于核酸与蛋白质的研究。目前主要集中在香菇中。一（1—3）—D—葡聚糖的研究上，其他多糖组分与生物活性之间的关系还有待进一步的明确。目前多糖的提取率普遍不高，提高香菇多糖的提取率已成为多糖产品开发需要解决的一个关键问题。不仅可以考虑将多种提取手段结合起来优化提取工艺，还可以通过遗传育种、基因重组、物种诱变等手段选育出高产多糖的香菇菌株，提高香菇的多糖含量，以增加多糖的提取率，降低生产成本。今后对lentinan和其他活性类多糖的研究主要着重于3个方面：（1）多糖生物活性的生理机制的探索。虽然研究和发表的文章很多，但其机理还没有完全搞清楚，需要作进一步的探究；（2）多糖构效关系的研究。多糖是一种承载着巨大构相变量的生物大分子，可以传递细胞之间海量的生物信息，要完全阐明这个关系，单凭生物学的手段是远远不够的，只有通过物理、计算机、数学、化学等综合手段的应用，才能获得突破性的进展和成果，这也必将对21世纪生命科学产生巨大的影响；（3）研究通过化学手段对多糖分子进行改性，使其具有更多的生物活性或者强化已有的生物活性，能够更广泛地应用于临床。囹第2节香菇中主要化学成分香菇是一种高强白、低脂肪的无毒健康食品。据分析，干香菇食用部分占72%,每100g食用部分中含水13g、脂肪1.8g、碳水化合物54g、粗纤维7.8&、灰分4、钙124mg、磷415mg、铁25.3mg、维生索B10.07mg、维生素B21.13mg。鲜香菇除含水85%〜90%外，固形物中含粗蛋白19.9%，粗脂肪4%，可溶性无氮物质67%，粗纤维7%，灰分3%。⑸另外，十香菇的水浸出物中含亮氨酸、缬氨酸、天门冬氨酸等氨基酸和天门冬素、胆碱、腺嘌吟及微量三甲胺；碳水化合物中以半纤维素居多，主要成分是甘露醇、海藻糖和菌糖、葡萄糖、戊聚糖、糖原、甲基戊聚糖等；脂肪主要是不饱和的脂肪酸如亚油酸等。2.1香菇多糖香菇多糖(简称LNT)是从真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。它有很多种，分子式为(C6H10O5)n，分子量从16000到上百万不等，且分子量达不到4万的基本没有活性。LNT具有1-3—0—D—葡萄精糖链，在主链中葡萄糖的C6位上含有支点(每5个D—葡萄糖有2个支点)，其侧链是由0—D—(一6)和0—D—(1-3)链相连的D—葡萄糖聚合体组成，在侧链中也含有少数内部0—D—(1-6)链。此外，抗肿瘤LNT的主体旋光结构十分重要，LNT的二级或三级结构比一级结构更具免疫活性的观点已成为共识。另外，LNT还有D—葡萄糖、D—半乳糖、D—甘露醇、L—阿拉伯糖及D一木糖等成分。2.2香菇嘌吟香菇嘌吟也叫香菇素、香菇太生，分子式为：C9H1lN504,分子量为：253,化学名：2(R)，3(R)一二羟基一4—(9一腺嘌吟)丁酸。另外，香菇嘌吟主要有4种空间异构体，天然香菇嘌吟即为其中之一。2.3核酸香菇中核酸包括环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、环磷酸胞苷，其孢子提取物双链核糖核酸具有明显药理作用。2.4氨基酸、微量矿质元素及多种酶香菇中含有18种氨基酸，其中7种属人体需氯基酸，故常食香菇，可吸收人体所需的营养，提高机体免疫力，对促进人体健康起着积极的作用。⑹香菇也含有丰富微量元素，其中钙、镁等含量较其他元素高。［7］此外，香菇里还含有30多种酶，有利于人体新陈代谢，可预防人体因缺酶引起的各种疾病，是补充人体酶缺乏的独特食品。2.5维生素香菇中含多种维生素，如维生素D2、B1、B2、B12、C、PP（尼克酸）。其中香菇中含大量的麦角甾醇（又称维生素D原），其含量为128个国际单位，经紫外线照射变为维生素D2,含量增到1000个国际单位香菇作为维生素D2的供给源，占有重要的地位，所以香菇是抗佝偻病的重要食物之一。2.6其他成分香菇的香味成分主要是香菇酸分解生成的香菇精，其鲜味成分是一类水溶性物质，主要成分是5—GMP、5—AMP、5’一UMP等核酸构成成分。㈤第3节香菇中多糖的提取方法研究3.1香菇中多糖的提取方法香菇中多糖的提取方法有很多，其中包括：热水浸提法、烯酸（碱）浸提法、酶解法、微波法、超声波提取法、深层发酵培养提取法。3.1.1热水浸提法这低提取液的固形物含量，不利于以后的分离且加重了工业生产中的后续工艺，一是最早采用的一种传统方法：香菇多糖溶于水热水浸提时，香菇组织细胞膨破裂，多糖成分浸出。热水浸提香菇多糖，浸提时的料液比、温度、时问pH、醇析时的乙醇添加倍数及提取次数是影响多糖得率的主要因素。对料液比而言，若加水太少，提取不彻底；加水太多，容易降般为1:20左右。对温度来说，随着提取温度的升高，粗多糖得率逐渐升高，在80%—95%时达到高峰，再提高度时，粗多糖得率升高趋势趋于平缓，考虑到高温会破坏多糖的结构，影响其生物活性，同时高温提取对工业化生产的设备要求更严格。而对醇析时提取液的乙醇浓度来说。随着其逐渐升高。多糖得率亦逐渐增加。但乙醇浓度达到75%后再继续添加乙醇。对粗多糖得率的影响不大。所以提取液的乙醇浓度最好不超过75%。[9]3.1.2稀酸（碱）浸提法从香菇中提取多糖的提取剂有：酸液、碱液、酶及热水等，提取剂为酸（碱）时，即所谓的酸（碱）提取法。该法提取香菇多糖也受多方面因素的影响：酸（碱）溶液的浓度、作用时间等、一般情况下。0.4mol/L的HC1溶液在40°C—60。。范围内，多糖得率较高。需注意，香菇多糖的提取应避免在强酸、强碱溶液中进行，否则极易造成香菇多糖中糖苷键断裂及构象变化而形成较多单糖，影响多糖得率，因此香菇多糖较少采用此法提取。[10]3.1.3酶解法香菇细胞壁主要由纤维素、果胶等组成，细胞膜主要由蛋白质和磷脂组成，因此我们可以用具有专一性和高效性的酶，如纤维素酶、果胶酶、蛋白酶等来提取香菇多糖。酶解法就是指在浸提的过程中加入相应的酶来水解纤维素、果胶、蛋质分子等，以使多糖从细胞中分离出来。此环节影响多糖得率的主要因素有：酶用量、酶作用时间、作用温度和pH。酶的用量太少，不能彻底水解香菇细胞壁中的纤维素、果胶和细胞膜中的蛋白质，从而不能使多糖从细胞里更好的分离出来，降低多糖提取率；酶太多，多糖量增加趋势趋于平缓，而造成原料的浪费酶制的作用时间也要适宜，过短，酶不能充分水解纤维素、果胶、蛋白质等，使得多糖得率降低；过长，多糖的量不会继续增加，同时浪费时间，造成生产上的不必要浪费。众所周知，温度和DpH值会极大的影响酶的活性，高温、过酸、过碱，都会使酶失去活性，这些都不利于酶活性的发挥。除以上因素外，酶的类别和向预处理液加入不同酶的先后顺序也会影响香菇多糖的得率。一般情况下，复合酶解法是一种较好的提取法，很有发展前景。［11］3.1.4微波法提取香菇多糖微波提取法是一种新型提取法，由于溶剂及细胞液吸收微波能，微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁内部时，细胞内部温度升高压力增大，当压力超过细胞的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的多糖就从细胞中释放出来。［12］在微波法提取多糖的实验中，影响多糖提取率的主要因素有：微波功率、提取时间以及提取次数等。随着微波功率的提高，加热速度增大，分子运动速度加快，渗透、扩散及溶解速度加快；同时，高功率的微波引起细胞内部的结构变化，加速香姑多糖由外层细胞转移到溶液中。所以，随着提取功率的升高香菇多糖的得率升高，当功率超过40%时，多糖增加趋势趋于平缓；当功率达到60%左右时，多糖部分会被碳化。［13］微波提取香菇多糖的操作还是比较简单，最主要是该法节能，省时，而且得率高，比较符合现代化工业生产新趋势，具有广阔的发展前景。但目前该工艺距大规模工业生产还有很大差距，缺乏可靠的工业生产数据，且微波对多糖的化学结构、生物活性、药理特性的影响还有待进一步进行深入的研究。3.1.5超声波提取法香菇多糖的超声波提取是利用超声波的空化作用分散破坏植物组织，加速植物多糖成分的浸出提取；另外超声波产生的机械振动、乳化和击碎效应等也能加速多糖成分的扩散释放并充分与溶剂混合，提高香菇多糖的得率。另外，超声波破碎过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应发生，被浸提的多糖的结构和性质不会发生变化。所以用超声波提取香菇多糖可大大地缩短提取时间，减少料液比和降低提取液的粘度，而提取液粘度的降低有利于超滤分离时降低浓差极化的影响，从而提高多糖得率。Ml3.1.6深层发酵培养提取法目前，香菇多糖主要从香菇子实体中提取。人工培养香菇子实体，生产周期长达半年以上，而深层培养发酵法获得香菇菌丝体和香菇多糖，生产周期将缩短至一周左右;一般从鲜香菇中提取多糖，得率为6.9%左右，从十香菇中提取多糖，得率是6.72%左右，差异不大；而香菇菌丝体的多糖得率却明显高于香菇子实体，达7.3%左右。因此在工业生产中，此法很具竞争优势。其发酵工艺及主要提取过程：香菇保藏菌种一斜面母钟一摇瓶菌种一种子罐培养液一发酵液一［上清液(胞外多糖)［菌丝体(胞内多糖)多糖的后续提取工艺同一般方法，只是胞外多糖提取时，其浓缩液要进行透析处理，其他各步骤基本相同。总之，该法生产周期大为缩短，在市场竞争中占据很大优势，符合现代工业生产方式。香菇发酵较细菌，放线菌，酵母菌发酵时间长，极易感染杂菌，因此，工艺全过程的无菌控制是深层发酵培养成败的关键。［15］第4节香菇多糖的活性及应用香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的。一(1—3)—D一葡聚糖，主链由0—(1—3)连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由0—(1—6)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。研究表明香菇的活性多糖成分0—(1—3)—D—葡聚糖对抑制异源的、同源的、甚至是遗传性的肿瘤都有效。4.1香菇多糖的生物活4.1.1香菇多糖的抗肿瘤活性香菇多糖具有抗肿瘤作用，它没有化疗药物的毒副作用。香菇多糖进入抗体后诱导产生一种具有免疫活性的细胞因子，在这些细胞因子的综合作用下，机体免疫系统增强，对肿瘤细胞起防御与杀伤作用。［16］香菇多糖通过激活巨噬细胞，增强抗体依赖性细胞诱导的细胞毒(ADDC)，发挥抗肿瘤活性；此外，香菇多糖还能使肿瘤部位的血管扩张和出血，导致肿瘤出血坏死和完全退化。4.1.2香菇多糖的免疫调节香菇多糖的免疫调节作用是其生物活性的重要基础。香菇多糖是典型的T细胞激活剂，促进白细胞介素的产生，还能促进单核巨噬细胞的功能，被认为是一种特殊免疫增强剂。其免疫作用特点在于它能促进淋巴细胞活化因子(LAE)的产生，释放各种辅助性T细胞因子，增强宿主腹腔巨噬细胞吞噬率，恢复或刺激辅助性T细胞的功能。［17］另外，香菇多糖还能促进抗体生成，抑制巨噬细胞释放。［18］4.1.3香菇多糖的抗病毒活性日本石田博士研究认为，香菇含有一种双链核糖核酸，能刺激人体网状细胞及白血球释放干扰素，而干扰素具有抗病毒作用。香菇菌丝体提取物可抑制细胞的吸附疱疹病毒，从而防治单纯疱疹病毒、巨细胞病毒引起的各类疾病。英国从培养的香菇菌丝体中提取到一种物质，可使因艾滋病病毒感染的T淋巴细胞复原，刺激巨噬细胞，有助于产生抗体治疗艾滋病，且安全无副作用。近年来，有学者发现硫酸化香菇多糖具有抗艾滋病病毒（HIV）的活性，可干扰反转录病毒及其他病毒的吸附和侵入。日本学者报道，从香菇子实体中获得的一种具有良好抗肿瘤作用的葡聚糖的硫酸化衍生物可抑制HIV的活性。4.1.4香菇多糖抗感染作用据报道，香菇多糖能提高巨噬细胞功能。香菇多糖对Abelson病毒、12型腺病毒及流感病毒感染均有抑制作用，是治疗各种肝炎特别是慢性迁移型肝炎的良好药物。[19]4.2香菇多糖的应用4.2.1香菇多糖在医药领域的应用香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。作为免疫辅助药物，香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移，提高肿瘤对化疗药物的敏感性，改善患者的身体状况，延长其寿命。[20]香菇多糖与化疗剂联合使用，有减毒、增效的作用。化疗药物杀伤肿瘤细胞的选择性较差，对正常细胞也具有杀伤作用，产生毒副作用，造成化疗不能按期按量进行;由于化疗的剂量不足，常引起肿瘤细胞的耐药性，成为难治性癌症，影响疗效。化疗过程中服用香菇多糖，可以增强化疗的疗效，并减轻化疗的毒性作用；同时，化疗过程中患者的白细胞下降的发生率、胃肠毒性、肝功能损害及呕吐的发生明显降低。这充分说明了香菇多糖与化疗并用可以增效、减毒，并增强患者机体的免疫功能。香菇多糖配合其他药物治疗慢性乙型肝炎，可提高乙肝病毒标志物的转阴作用，减少抗病毒药物的副作用。此外，香菇多糖可用于治疗结核杆菌感染。4.2.2多糖在保健食品领域的应用香菇多糖是一种特殊的生物活性物质，是一种生物反应增强剂和调节剂，它能增强体液免疫和细胞免疫功能。香菇多糖的抗病毒作用机制可能在于其提高感染细胞免疫力，增强细胞膜的稳定性，抑制细胞病变，促进细胞修复等功能。同时，香菇多糖还具有抗逆转录病毒活性。因此，香菇多糖是一种有待开发的抗流感的保健食品。第5节本课题研究目的及意义香菇化学成分丰富，药理作用显著.是目前最有开发前途的功能食品和药品资源之一。尤其是香菇多糖具有多方面的药理活性，药食兼用，其毒副作用小，疗效高，极具深入研究和开发前景。中国作为世界最大的香菇生产、出口和消费国。应对其提取工艺进行深入研究，从而选出最佳提取方法。，应用微波加热提取手段，能够显著缩短萃取时间,较大程度地提高多糖的萃取效率。水溶性多糖微波辅助提取法与其他方法相比，提取时间短，提取率也高。微波辅助热水浸提法提取香菇多糖不论在节能、高效还是在操作方面都具有优越性。本研究利用微波辅助热水浸提法提取香菇多糖，探讨其最佳工艺条件，以期能为香菇多糖的开发应用提供理论依据。第2章微波辅助热水浸提法提取香菇多糖的研究第1节实验材料与设备1.1试验材料香菇绥化市农田采集，自然晾十，粉碎。蒸馏水、5%三氯乙酸、95%乙醇、无水乙醇等1.2试验设备微波炉：MideaEG823LC-NSSHB-III型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；DK-98-IIA型电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；TDL-60B-B型台式低俗离心机；湖南星科科学仪器有限公司；JY92-IIDN型超声波细胞粉碎仪，宁波新芝生物科技股份有限公司；752型紫外分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；FA2104型电子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；JY501型电子天平，上海衡平仪器仪表厂；玻璃仪器气流烘干器，巩义市领科仪器厂；QL-861型漩涡混合机；FW100型高速万能粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司；第2节试验方法2.1香菇中多糖的提取工艺流程香菇一除杂、干燥、粉碎一称取香菇粉1g-按一定料液比溶解一微波处理一80。。热水浸提60min-过滤，滤液用70。。水浴浓缩到原体积1/2-5%三氯乙酸溶液反复脱蛋白-3000rpm离心10min-取上清液与95%乙醇按体积比1:3混合，醇沉12h-3000rpm离心10min-取沉淀，无水乙醇洗涤2〜3次，60°C蒸馏水溶解并定容到100mL2.2检测方法2.2.1香菇多糖含量的测定苯酚一硫酸法：精确称取20mg标准葡萄糖定容在500mL容量瓶中，得到葡萄糖标准溶液，分别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8mL,各以蒸馏水补至2.0mL，然后加入6%苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL，摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以2.0mL水按同样显色操作为空白，测得标准曲线的回归方程为：y=0.0071x-0.0049，R2=0.9902；式中：y为波长490nm下的光密度值；x为多糖微克数（瞄）。2.2.2还原糖含量的测定DNS法：分别取葡萄糖标准溶液（1mg/mL）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0于25mL试管中，分别准确加入DNS试剂2mL，沸水浴加热2min，流水冷却，用蒸馏水补至15mL在540nm下测光密度值，测得标准曲线的回归方程为：y=0.001x+0.0658,R2=0.998；式中：y为波长540nm下的吸光度；x为多糖微克数（瞄）。2.2.2多糖提取率的计算多糖=总糖-还原糖多糖提取率（％）=多糖量/子实体十重X100%第3节试验结果分析1.1固液比对多糖得率的影响固定微波功率400W，微波作用时间12min，分别设置料液比1:20、1:30、1:40、1:50、1:60进行试验，结果见图1。固液比/(mL/g)图2-1固液比对多糖提取率的影响从图1可看出，固液比为1g：60mL时多糖得率最高。当固液比较小时因用水量较少，平衡时提取不完全而导致多糖得率较低；固液比增加，在一定程度上可提高传质推动力。故选取固液比1g：60mL为最佳条件。1.2微波作用功率对多糖得率的影响固定固液比1g:60mL，微波作用时间10min，分别在微波功率80W、240W、400W、640W、800W进行试验，结果见图2。微波功率/W图2-2微波功率对多糖提取率的影响从图2的曲线可看出，作用功率升高，料液升温快，固液传质速率大，多糖得率升高，因此选用微波作用功率800W为最佳条件。1.3微波作用时间对多糖得率的影响固定固液比1g：60mL,微波辐射功率800W，微波分别处理6min、8min、10min、12min、14min进行试验，结果见图3。微波作用时间/min图2-3微波作用时间对多糖提取率的影响图3可看出，微波辐射6min时多糖得率最高。微波辐射加热效率高，对细胞壁的破碎作用大，加快了多糖溶出速率。超过6min，多糖可能产生降解现象而导致得率降