下载本文档
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
内毒素对Akt卵白表达与磷酸化程度的影响程晓刚,尹华华,夏浩,闫红,刘道城,李磊【摘要】目的探究内毒素脂多糖(lipplysaharideLPS)在体表里对Akt卵白表达和磷酸化程度的影响。要领差异剂量LPS打击RA264.7细胞,检测差异时相点细胞Akt卵白表达和磷酸化程度。小鼠腹腔注射LPS6h后检测肺构造Akt卵白表达和磷酸化程度。效果差异剂量LPS打击RA264.7细胞,细胞Akt卵白表达没有明显差异,磷酸化程度增长。内毒素血症小鼠肺构造Akt卵白表达无明显变革,磷酸化程度低落。结论LPS在体表里对Akt卵白磷酸化作用差异,体外Akt卵白磷酸化程度增高,但内毒素血症小鼠体内出现Akt卵白磷酸化程度非常低落。【关键词】脂多糖Akt磷酸化内毒素血症Keyrds:LPS;Akt;phsphrylatin;endtxeiaLPS为G-菌细胞壁最外层布局,诱导单核/巨噬细胞表达多种前炎性介质,引起创伤后的免疫失调。LPS与血浆中的LPS结合卵白〔LBP〕结合,再与靶细胞外貌受体D14等结合,激活D14-TLR4-D-2复合体,引起卑劣信号通报,导致TNF-α、构造因子(Tissuefatr,TF)等因子的表达。只管LPS刺激引起单核/巨噬细胞TNF-α及构造因子TF表达的正性调控信号通路已有较多研究,然而,限定这些基因表达的信号通路仍不明白[1]。反响调控是机体维持自身平衡非常紧张的生理机制,固然如今对LPS刺激TLR4活化信号通路的负性调控有一些研究,然而对其调治的详细机制尚不十明白确[2]。新近研究表现,PTEN/PI-3K/Akt通路在炎症和内毒素血症的产生方面大概具紧张调控作用[3]。但LPS对PTEN/PI3K/Akt通路关键分子Akt卵白及磷酸化程度的影响尚不非常明晰。本研究拟在体外与体内别离检测LPS刺激后Akt卵白及磷酸化程度的表达变革,以便对LPS信号通路的调控途径有更深化的相识。1质料与要领1.1质料Balb/小鼠12只,6~8周龄,雄性,质量20~21g。〔购自重庆医科大学实行动物中央〕;兔抗Akt卵白多克隆抗体及磷酸化Akt小鼠单克隆抗体购自ellSignalingTehnlgy(USA);β-atin小鼠单克隆抗体购自Siga(USA);Gatanti-use二抗,Gatanti-Rabbit二抗及TL化学发光试剂盒购自Piere(USA);LPS〔0111:B4〕购自Siga〔USA〕;卵白裂解液及卵白酶按捺剂购自上海申能博彩公司;RA264.7细胞株购自中国科学院上海细胞所。1.2要领成都医学院学报以无血清造就基留宿造就RA264.7细胞后,予LPS1μg/l刺激,别离于刺激后5、10、20、30、45、60、120in后网络细胞卵白,Bradfrd's法测定卵白浓度后以esternblt测定Akt表达及pAkt程度(以与内参照β-atin的灰度比值表现)。1.3统计学阐发以Quantityne软件举行定量阐发,并以T查验及单因素方差阐发举行统计阐发。2效果2.1内毒素血症小鼠肺构造Akt卵白表达及pAkt程度实行效果表白,内毒素血症6h后小鼠肺构造的Akt卵白表达较正常小鼠略有增高,但无明显性差异〔P>0.05〕。而pAkt程度那么较正常小鼠明显低落〔P<0.01〕(见图1)。3讨论脓毒症是由熏染引起的满身性炎症反响综合征(systeiinflaatryrespnsesyndre,SIRS),由其诱发的多器官成效停滞综合征(ultiplergandysfuntinsyndre,DS)已成为当今外科IU患者的重要殒命缘故原由。然而,至如今为止,对引发脓毒症的细胞及分子机制及脓毒症病人在抵抗炎症、维持自稳方面的生理机制尚不非常相识,对脓图31μg/lLPS刺激RA264.7细胞后差异时相点Akt卵白表达及pAkt程度毒症病人并无确切有用的治疗方法。LPS是革兰氏阴性杆菌细胞壁的最外层布局,在启动体内免疫体系反响中发挥紧张作用,是触发脓毒症的关键因素。阐发LPS的信号转导机制不但可深化熟悉过分炎症反响的产生气制,更紧张的是,可望为探求其新的干预方法提供新思绪。反响调控是机体维持自身平衡非常紧张的生理机制,如今对LPS刺激TLR4活化信号通路的负性调控的研究,重要包罗胞外的可溶性TLR4诱饵、胞内按捺物、膜结合的按捺物、TLR4的落解及TLR4诱导的凋亡。但对其彼此干系及机制并不十明白了[5]。PI3K是信号转导酶中的一个守旧家属,到场调控细胞增殖及存活。比来研究提示,PI3K/Akt通路在炎症产生生长和内毒素血症的产生中大概发挥紧张的调控作用[6]。PI3K连续表达于自然免疫细胞中,当细胞受病原微生物侵袭时,在TLRs成员的引发下,PI3K敏捷活化,到场第一时相LPS信号通路的传导及调控。研究表白LPS打击单核/巨噬细胞时可活化PI3K,活化的PI3K催化胞膜的磷脂肌醇的磷酸化,天生PI-3,4,5P3及PI3,4P2,从而引起PKB/Akt的膜移位及活化,在胞膜上召募的Akt可被磷脂酰肌醇依靠的激酶1活化,使其在Ser473及Thr308位双磷酸化而被活化。研究证明,PI3K/Akt通路活化后,可按捺LPS诱导的TNF在人单核细胞的表达,LPS诱导的人肺泡巨噬细胞的X2的表达,以及小鼠腹腔巨噬细胞N的天生。而按捺PI3K/Akt通路可引起小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮合酶(iNS)基因表达加强,树突状细胞P38活性加强。用PI3K的按捺剂及表达显性负相〔dinant-negative〕的Akt那么可引起LPS的APK通路活化以及AP-1依靠的转录。别的实行证明LPS诱导的抗炎细胞因子IL-10的产生依靠于PI3K/Akt的活化[1,7,8]。PTEN〔phsphataseandtensinhlgdeletednhrseten〕是1997年创造的一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,其重要成效是使PI〔3,4,5〕P3的D3位点去磷酸化,从而低落细胞内PIP3的程度。而PIP3是PI3K/Akt通路的关键环节,PIP3的淘汰可低落PI3K激活引起的Akt磷酸化,从而阻断PI3K/Akt信号通路。因此,PTEN是PI3K/Akt信号通路中的一个紧张的分子开关。当PTEN活性加强时,PI3K/Akt通路削弱,乃至封闭,而当PTTEN活性削弱时,PI3K/Akt通路那么加强。最新研究表现,LPS刺激后,PTEN(+/+)小鼠的腹腔巨噬细胞APK激酶的活性加强,TNF-α等炎症介质的产生和开释显着高于PTEN(-/-)小鼠,提示PTEN在调控炎症反响中的职位非常紧张,PTEN大概通过按捺PI3K/Akt这条负性调控通路起着促炎作用[9]。因此,其卑劣分子Akt在LPS作用下怎样变革,大概是PTEN/PI3K通路到场LPS信号转导调控的关键环节。本研究从LPS刺激后Akt卵白及磷酸化程度的表达变革角度,阐发Akt表达变革的缘故原由及其意义,以便对LPS信号通路的调控途径有更深化的相识。研究效果表白LPS在体表里作用时Akt卵白表达及磷酸化程度是差异的,最大的差异是LPS体外诱导Akt卵白磷酸化程度呈剂量依靠性增高,而在体内那么表现为Akt卵白磷酸化程度的低落,究其缘故原由大概是在体内影响信号通报的因素较体外庞大所致,体外实行中LPS连续存在,而体内由于代谢庞大,大概LPS产生落解,并且由于机体的庇护性反响,炎性因素占主导职位,负性调控大概还未启动或是炎症反响过于猛烈,负性调控启动后受抑,从而对机体调控LPS活化信号倒霉,大概到场内毒素血症引发的SIRS。别的,LPS刺激后30分钟即可引起磷酸化Akt的增高,提示Akt在LPS刺激后早期即到场了其信号通路的调治,并且在LPS连续存鄙人,表现出磷酸化程度的增高,大概对LPS信号的负性调控有必然作用。而在内毒素血症时Akt卵白磷酸化程度低落,在这些体表里Akt磷酸化变革历程中PI3K及PTEN毕竟饰演了何种脚色,怎样到场了Akt磷酸化程度的调控,从而在何种时期LPS信号通路发挥了相应作用,怎样发挥作用那么是下一步必要研究的重要题目。【参考文献】[1]ausueeGuha,Nigelakan.ThePhsphatidylinsitl3-Kinase-AktPathayLiitsLipplysaharideAtivatinfSignalingPathaysandExpressinfInflaatryediatrsinHuannytiells[J].TheJurnalfBilgialheistry,2002,277(35):32124-32132.[2]TarFuka,ShigeKyasu.PI3KandNegativeRegulatinfTLRSignaling[J].TrendsinIunlgy,2022,24(7):358-363.[3]ShabbauerG,Tenati,PedersenB,etal.PI3K-AktPathaySuppressesagulatinandInflaatininEndtxeiie[J].ArterislerThrbVasBil,2022,24(10):1963-1969.[4]hengSS,LukasN,KunkelSL.Etaxin/L11IsaNegativeRegulatrfNeutrphilReruitentinaurinedelfEndtxeia[J].ExperientalandleularPathlgy,2002,73(1):1-8.[5]FYLie,DaXu,ElizabethK,etal.NegativeRegulatinfTll-likeReeptr-ediatedIuneRespnses[J].Nature,2022,5:446-458.[6]Keqinghen,PablIribarren,anghuaGng,etal.TheEssentialRlefPhsphinsitide3-kinases(PI3Ks)inRegulatingPr-InflaatryRespnsesandthePrgressinfaner[J].ellularleularIunlgy,2022,2(4):241-252.[7]HuiqingFang,RuaAPengal,Xianhuaa,etal.Lipplysaharide-InduedarphageInflaatryRespnseIsRegulatedbySHIP[J].TheJurnalfIunlgy,2022,173:360-366.[8]RuaA,Pengala,LathaP,etal.Lipplysaharide-induedPrdutinfInterleukin-10IsPrted
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 《焊接检验员培训》课件
- 《icu患者镇静管理》课件
- 安徽省2017年中考道德与法治真题试卷(含答案)
- 辽宁省沈阳市第一二六中学教育集团2024-2025学年八年级上学期期中考试数学试卷(无答案)
- 2024年新高一英语初升高衔接《动词时态、语态和主谓一致》含答案解析
- 心脏活动报道课件
- 《变革管理余世维》课件
- 《GIS的数据结构》课件
- 热离子管市场发展现状调查及供需格局分析预测报告
- 电缆接头产业深度调研及未来发展现状趋势
- 《医疗器械使用质量监督管理办法》.ppt
- 高中数学复习专题讲座不等式知识的综合应用
- 工程勘察设计收费标准(2002年修订本)98168
- 乙烯裂解大阀密封结构修复及预防处理方法
- 食堂每周菜谱3个月不重复
- 生产现场作业十不干PPT课件
- 物料承认管理办法
- 业主委员会成立流程图
- AEFI防范与处置PPT课件
- (完整版)全usedtodo,beusedtodoing,beusedtodo辨析练习(带答案)
- 小学综合实践活动方便筷子教案三年级上册精品
评论
0/150
提交评论