标准解读

《GB/T 38477-2020 基因表达的测定 蛋白印迹法》是一项国家标准，主要规定了使用蛋白印迹技术（Western Blotting）来检测基因表达的方法。该标准适用于实验室条件下对生物样本中特定蛋白质的存在与否及其相对含量进行定性或定量分析。

根据标准内容，首先明确了实验所需的主要试剂和材料，包括但不限于抗体、封闭液、洗脱缓冲液等，并强调这些物质的质量直接影响最终结果准确性。接着详细描述了样品制备过程，从细胞裂解到蛋白质提取再到凝胶电泳分离，每一步骤都有具体的操作指南和技术参数要求。

对于核心步骤——转膜与免疫反应，文件中不仅给出了推荐使用的设备类型及操作条件，还特别指出了影响因素如温度、时间以及抗体稀释比例等关键控制点。此外，关于信号检测部分，《GB/T 38477-2020》也提供了多种方法供选择，并说明了各自优缺点及适用范围。

在数据处理方面，标准建议采用合适的软件工具来进行图像采集与分析，并提醒研究者注意背景扣除、条带强度测量时可能遇到的问题。同时，对于如何评估实验重复性和可靠性也有相应指导原则。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2020-11-19 颁布
  • 2020-11-19 实施
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文档简介

ICS07080

A21.

中华人民共和国国家标准

GB/T38477—2020

基因表达的测定蛋白印迹法

Determinationofgeneexpression—Westernblot

2020-11-19发布2020-11-19实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T38477—2020

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中国标准化研究院提出并归口

。

本标准起草单位河北医科大学中国标准化研究院河北省食品检验研究院中国科学院遗传与发

:、、、

育生物学研究所农业资源研究中心中国医科大学河北师范大学

、、。

本标准主要起草人吕品马爱进张岩赵伟东曹鹏秀赵美丞王宁

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38477—2020

基因表达的测定蛋白印迹法

1范围

本标准规定了用蛋白印迹法测定基因表达的方法原理试剂或材料仪器设备测

(Westernblot)、、、

定步骤和结果分析

。

本标准适用于动植物组织或体外培养细胞目的基因表达测定

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3术语定义和缩略语

、

31术语和定义

.

下列术语和定义适用于本文件

。

311

..

基因表达geneexpression

将储存在分子中的遗传信息经过转录和翻译转变成具有生物活性的蛋白质分子的过程

DNA,。

32缩略语

.

下列缩略语适用于本文件

。

牛血清白蛋白

BSA:(BovineSerumAlbumin)

增强型化学发光

ECL:(EnhancedChemiluminescence)

十二烷基硫酸钠

SDS:(SodiumDodecylSulfate)

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳

SDS:-(SodiumDodecylSulfate-PolyacrylamideGel

Electrophoresis)

缓冲盐溶液

TBS:Tris(TrisBufferedSaline)

吐温缓冲盐溶液

TBST:-20/Tris(Tween-20/TrisBufferedSaline)

4原理

分离的蛋白质转移到转印膜上后先用抗目的蛋白质的一抗与转印膜上的蛋白质反

SDS,

应然后利用带标记的二抗与一抗反应最后根据二抗标记物的特性检测微量蛋白质

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