标准解读
《GB/T 36806-2018 甘蔗杆状病毒实时荧光PCR检测方法》是一项国家标准,专门针对甘蔗杆状病毒(Sugarcane bacilliform virus, SCBV)的检测而设立。该标准详细规定了采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(Real-time fluorescence quantitative PCR, qPCR)来定性检测甘蔗及其繁殖材料中是否存在SCBV的方法。
首先,在准备阶段,需要对实验所用的所有试剂和设备进行校准与验证,确保其处于最佳工作状态。这包括但不限于DNA提取试剂盒、qPCR仪以及特异性引物探针的设计或选择等。对于样品处理,则要求采集新鲜或冷冻保存的甘蔗叶片作为检测样本,并按照特定步骤提取总DNA。
接着是扩增体系构建环节,根据标准推荐的比例配制反应混合液,加入适量模板DNA后进行封闭式循环扩增。在此过程中,通过监测荧光信号的变化情况可以实时跟踪目标序列的累积量。值得注意的是,为了保证结果准确性,还需设置阳性对照、阴性对照及内参基因对照等多个对照组别。
最后,在数据分析阶段,依据Ct值(Cycle threshold value)判断样品是否含有SCBV:若样品孔Ct值小于等于设定阈值且明显低于空白对照,则判定为阳性;反之则为阴性。此外,还应结合电泳图谱进一步确认检测结果的有效性和可靠性。
该标准为实验室提供了统一规范的操作流程和技术指标,有助于提高甘蔗杆状病毒检测工作的科学性与可比性,从而更好地服务于农业生产实践中的病害防控需求。
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....
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- 现行
- 正在执行有效
- 2018-09-17 颁布
- 2019-04-01 实施




文档简介
ICS6502001
B16..
中华人民共和国国家标准
GB/T36806—2018
甘蔗杆状病毒实时荧光
PCR检测方法
DetectionofSugarcanebacilliformvirusbyreal-timePCR
2018-09-17发布2019-04-01实施
国家市场监督管理总局发布
中国国家标准化管理委员会
中华人民共和国
国家标准
甘蔗杆状病毒实时荧光
PCR检测方法
GB/T36806—2018
*
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲号
2(100029)
北京市西城区三里河北街号
16(100045)
网址
:
服务热线
:400-168-0010
年月第一版
20189
*
书号
:155066·1-61159
版权专有侵权必究
GB/T36806—2018
前言
本标准按照给出的规则起草
GB/T1.1—2009。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口
(SAC/TC271)。
本标准起草单位福建农林大学国家甘蔗工程技术研究中心农业部甘蔗及制品质量监督检验测试
:、
中心农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室
、。
本标准主要起草人高三基孙生仁吴小斌黄美婷傅华英王锦达张慧丽陈如凯
:、、、、、、、。
Ⅰ
GB/T36806—2018
甘蔗杆状病毒实时荧光
PCR检测方法
1范围
本标准规定了甘蔗杆状病毒SugarcanebacilliformIMvirus和甘蔗杆状病
IM(,SCBIMV)MO
毒SugarcanebacilliformMOvirus实时荧光检测方法的仪器与设备试剂与材料
(,SCBMOV)PCR、、
样品的采集与前处理检测以及结果判断与表述等
、。
本标准适用于可能带有和病毒的活体寄主植物的快速检测诊断
SCBIMVSCBMOV、。
2缩略语
下列缩略语适用于本文件
。
十六烷基三甲基溴化铵
CTAB:(cetyltrimethylammoniumbromide)
值实时荧光反应中每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数
Ct:PCR,(cycle
threshold)
脱氧核糖核酸酶
DNase:(deoxyribonuclease)
乙二胺四乙酸二钠
EDTA-Na2:(edetatedisodium)
羧基荧光素
FAM:6-(6-carboxy-fluorescein)
聚合酶链式反应
PCR:(polymerasechainreaction)
核糖核酸酶
RNase:(ribonuclease)
逆转录酶核糖核酸酶
RT/RNaseH:/H(reversetranscriptase/RNaseH)
甘蔗杆状病毒SugarcanebacilliformIMvirus
SCBIMV:IM()
甘蔗杆状病毒SugarcanebacilliformMOvirus
SCBMOV:MO()
甘蔗杆状病毒Sugarcanebacilliformvirus
SCBV:()
羧基四甲基罗丹明
TAMRA:6-(6-carboxytetramethylrhodamine)
三羟甲基氨基甲烷盐酸盐
Tris-HCl:[Tris(hydroxymethyl)aminomethanehydrochloride]
3甘蔗杆状病毒基本信息
甘蔗杆状病毒属于花椰菜花叶病毒科Caulimiviridae杆状病毒属Badnavirus英文名
()DNA(),
称为Sugarcanebacilliformvirus缩写为国际病毒分类委员会于年将的
,SCBV。(ICTV)2012SCBV
个分离物正式定为甘蔗杆状病毒SugarcanebacilliformIMvirus和甘蔗杆状病
2IM(,SCBIMV)MO
毒SugarcanebacilliformMOvirus两个不同的种甘蔗杆状病毒其他信息参见附录
(,SCBMOV)。A。
4方法原理
在比对甘蔗杆状病毒基因组序列的基础上设计一对仅在该病毒基因间保守的特异
,RT/RNaseH
性引物和一条特异性的荧光双标记探针在实时荧光扩增反应中探针的荧光
TaqMan。PCR,TaqMan
信号强度伴随着目标序列
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