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文档简介

RNA的生物合成(转录)RNABiosynthesis,Transcription本章内容第一节转录的酶和模板第二节转录过程第三节真核生物的转录后修饰转录(transcription)生物体以DNA为模板合成RNA的过程。转录RNADNA

复制和转录的区别参与转录的物质原料:

NTP(ATP,UTP,GTP,CTP)模板:单链DNA酶:

RNA聚合酶(RNApolymerase,RNA-pol)其他蛋白质因子模板和酶TemplatesandEnzymes第一节一、转录模板

(一)不对称转录(asymmetrictranscription)

1.结构基因(structuralgene):DNA分子上转录出RNA的区段。2.模板链(templatestrand):DNA双链中按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链,也称作有意义链或Watson链。

编码链(codingstrand):

DNA双链中与模板链相对的单链,不进行转录,也称为反义链或Crick链。

5′···GCAGTACATGTC···3′3′···cgtgatgtacag···5′5′···GCAGUACAUGUC···3′N······Ala·Val·His·Val······C编码链模板链mRNA蛋白质转录翻译5335模板链编码链编码链模板链结构基因转录方向转录方向不对称转录含义

在DNA分子双链上某一区段,一股链用作模板指引转录,另一股链不转录模板链并非永远在同一条单链上。二、RNA聚合酶(一)原核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶:大肠杆菌的RNA聚合酶全酶由5种亚基α2ββ’σ组成,σ因子与其它部分的结合不是十分紧密,它易于与β’βα2分离,没有σ、亚基的酶称为核心酶——只催化链的延长,对起始无作用。五种亚基的功能分别为:

α亚基:与启动子结合功能。

β亚基:含催化部位,起催化作用,催化形成磷酸二酯键。

亚基:在全酶中存在,功能不清楚。

β’亚基:与DNA模板结合功能。

σ亚基:识别起始位点。

RNA聚合酶原核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶的特点:1、反应底物:NTP,DNA为模板、Mg2+促进聚合反应。RNA聚合酶不需要引物,合成方向53。2、真核生物与原核生物的RNA聚合酶结构不同。3、利福平抑制原核生物RNA聚合酶活性;α-鹅膏蕈碱

抑制真核生物RNA聚合酶活性。核心酶(coreenzyme)全酶(holoenzyme)RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合(二)真核生物的RNA聚合酶

真核细胞的RNA聚合酶酶类分布产物α-鹅膏蕈碱对酶的作用分子量反应条件ⅡIⅢ核仁核质核质rRNA5.8SrRNA18SrRNA28SrRNAmRNAtRNA5SrRNA不抑制低浓度抑制高浓度抑制500000~700000~700000_低离子强度,要求Mg2+或Mn2+高离子强度高Mn2+浓度三、模板与酶的辨认、结合原核生物一个转录单位可视为一个转录单位,称为操纵子(operon),包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列。

5335结构基因调控序列RNA-pol与RNA聚合酶结合启动基因转录的DNA序列,称为启动子(promoter)。目录开始转录TTGACAAACTGT-35区(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10区1-30-5010-10-40-205335原核生物启动子保守序列RNA-pol辨认位点(recognitionsite)55RNA聚合酶保护区结构基因33TATA盒CAAT盒GC盒

增强子

顺式作用元件结构基因-GCGC---CAAT---TATA转录起始真核生物启动子保守序列转录过程TheProcessofTranscription第二节RNA的转录过程:(以大肠杆菌为例)

起始位点的识别

转录起始链的延伸转录终止RNA的转录过程(一)转录起始1.RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。2.DNA双链解开,使其中的一条链作为转录的模板。一、原核生物的转录过程转录起始需解决的问题:2.DNA双链解开1.RNA聚合酶全酶(2)与模板结合3.在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应,形成转录起始复合物RNApol(2)-DNA-pppGpN-OH3转录起始复合物:5-pppG-OH+

NTP5-pppGpN

-OH3+ppi转录起始过程(1)起始位点的识别

RNA的合成不需要引物。体外实验证明,不含σ亚基的核心酶会随机地在一个基因的两条链上启动,当有σ亚基时就会选择正确的起点。σ亚基起着识别DNA分子上的起始信号(启动子——指RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列)的作用。启动子的结构至少由三部分组成:-35序列提供了RNA聚合酶全酶识别的信号;-10序列是酶的紧密结合位点(富含AT碱基,利于双链打开);第三部分是RNA合成的起始点。AACTGTATATTATTGACATATAAT+1转录起始点5’3’3’5’35序列

Sextama框10序列Pribnow框(2)转录起始

RNA聚合酶全酶扫描解链区,找到起始点,然后结合第一个核苷三磷酸。加入的第一个核苷三磷酸常是GTP或ATP,很少是CTP,不用UTP。所形成的启动子、全酶和核苷三磷酸复合物称为三元起始复合物,第一个核苷三磷酸一旦掺入到转录起始点,σ亚基就会被释放脱离核心酶。因子仅与起始有关,RNA的合成一旦开始,便被释放E-35-10pppG或pppA5‘5‘3‘3‘模板链(二)转录延长1.亚基脱落,RNA–pol聚合酶核心酶变构,沿着DNA模板前移;

2.在核心酶作用下,NTP不断聚合,RNA链不断延长。(NMP)n+NTP(NMP)n+1

+PPi目录53DNA原核生物转录过程中的羽毛状现象核糖体RNARNA聚合酶依赖Rho(ρ)因子的转录终止非依赖Rho因子的转录终止(三)转录终止指RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进,转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。分类转录终止

在DNA分子上(基因末端)提供转录停止信号的DNA序列称为终止子(terminators),它能使RNA聚合酶停止合成RNA并释放出RNA。

需要ρ因子(终止因子,协助RNA聚合酶识别终止信号)帮助,ρ因子能与RNA聚合酶结合但不是酶的组分,它的作用是阻止RNA聚合酶向前移动,于是转录终止,并释放出已转录完成的RNA链。不依赖于ρ因子。强终止子序列有两个明显的特征:(1)在终止点之前具有一段富含G-C的回文区域。(2)富含G-C的区域之后是一连串的dA碱基序列,它们转录的RNA链的末端为一连串U(连续6个)。弱终止子:缺少回文结构强终止子:有回文结构ATP1.依赖Rho因子的转录终止2.非依赖Rho因子的转录终止DNA模板上靠近终止区,有些特殊的碱基序列,转录出RNA后,RNA产物形成特殊的结构来终止转录。5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`

RNA5TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT...3DNAUUUU...…UUUU...…5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU...3`茎环(stem-loop)/发夹(hairpin)结构茎环结构使转录终止的机理使RNA聚合酶变构,转录停顿;使转录复合物趋于解离,RNA产物释放。5´pppG5335RNA-pol新合成的RNA分子中典型的回文结构(发夹结构)有些终止子的作用可被特异的因子所阻止,使酶得以越过终止子继续转录,称为通读(readthrough)能够引起抗终止作用的蛋白质称为抗终止因子(antiterminationfactors)二、真核生物的转录(一)转录起始转录起始时,RNA-pol不直接结合模板。转录起始点TATA盒CAAT盒GC盒增强子顺式作用元件(cis-actingelement)1.转录起始前的上游区段AATAAA切离加尾转录终止点修饰点外显子翻译起始点内含子OCT-1OCT-1:ATTTGCAT八聚体顺式作用元件(cis-actingelement)

:可影响自身基因表达活性的DNA序列。反式作用因子(trans-actingfactors):能直接或间接辨认、结合顺式作用元件并反式激活另一基因转录的蛋白质,统称为反式作用因子。

2.转录因子反式作用因子中,直接或间接结合RNA聚合酶的,则称为转录因子(transcriptionalfactors,TF)。

锌指(zincfinger)C——CysH——His常结合GC盒ZnCysHis参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ

3.转录起始前复合物(pre-initiationcomplex,PIC)

真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合,而需依靠众多的转录因子。POL-ⅡTFⅡFⅡAⅡB由RNA-PolⅡ催化转录的PICPol-ⅡTFⅡFⅡHⅡETBPTAFTFⅡD-ⅡA-ⅡB-DNA复合物TATAⅡAⅡBTBPTAFTATAⅡHⅡECTD-PPIC组装完成,TFⅡH使CTD磷酸化4.拼板理论(piecingtheory)一个真核生物基因的转录需要3至5个转录因子。转录因子之间互相结合,生成有活性,有专一性的复合物,再与RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。(二)转录延长真核生物转录延长过程与原核生物大致相似,但因有核膜相隔,没有转录与翻译同步的现象。RNA-pol前移处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。RNA-PolRNA-PolRNA-Pol核小体转录延长中的核小体移位转录方向5------AAUAAA-5------AAUAAA--核酸酶-GUGUGUGRNA-polAATAAAGTGTGTG转录终止的修饰点55333加尾AAAAAAA······3mRNA(三)转录终止——和转录后修饰密切相关真核生物的转录后修饰Post-transcriptionalModification第三节一、真核生物mRNA的转录后加工(一)首、尾的修饰

5端形成帽子结构(m7GpppGp—)3端加上多聚腺苷酸尾巴(polyAtail)5pppG…5GpppG…pppGpi鸟苷酸转移酶5

m7GpppG…甲基转移酶SAM帽子结构的生成5pG…磷酸酶PPi帽子结构(二)mRNA的剪接1.

hnRNA和snRNA核内的初级mRNA称为杂化核RNA(hetero-nuclearRNA,hnRNA)snRNA(smallnuclearRNA)核内的蛋白质小分子核糖核蛋白体(snRNP)snRNA真核生物结构基因,由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成,去除非编码区再连接后,可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质,这些基因称为断裂基因。断裂基因(splitegene)CABD编码区A、B、C、D非编码区2.外显子(exon)和内含子(intron)外显子在断裂基因及其初级转录产物上出现,并表达为成熟RNA的核酸序列。内含子隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。鸡卵清蛋白基因hnRNA首、尾修饰hnRNA剪接成熟的mRNA鸡卵清蛋白基因及其转录、转录后修饰鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图DNAmRNA目录3.内含子的分类根据基因类型和剪接方式,内含子分4类:I:线粒体、叶绿体及低等真核生物rRNA基因;II:线粒体、叶绿体mRNA基因;III:是常见的形成套索结构后剪接,大多数mRNA基因有此类内含子;IV:tRNA基因,剪接过程需酶及ATP。4.mRNA的剪接——除去hnRNA中的内含子,将外显子连接。

snRNP与hnRNA结合成为剪接体①②③UACUACA-AGUGU4U5U6E1E2U1U2UACUACA-AGUGU6E1E2U1、U4、U5pG-OH(ppG-OH,pppG-OH)U-OHGpUpGpA第一次转酯反应第二次转酯反应UpAGpU外显子1内含子外显子2G-OHUpUpGpA剪接过程的二次转酯反应

(twicetransesterification)

•RNA编辑作用说明,基因的编码序列经过转录后加工,是可有多用途分化的,因此也称为分化加工(differentialRNAprocessing)。5.mRNA的编辑(mRNAediting)人类apoB基因mRNA(14500个核苷酸)肝脏apoB100(分子量为500000)肠道细胞apoB48(分子量为240000)mRNA编辑二、tRNA的转录后加工tRNA前体RNApolⅢTGGCNNAGTGCGGTTCGANNCCDNARNAaseP、内切酶tRNA核苷酸转移酶、连接酶ATPADP碱基修饰(2)还原反应如:UDHU(3)核苷内的转位反应如:Uψ(4)脱氨反应如:AI如:AAm(1)甲基化(1)(1)(3)(2)(4)三、rRNA的转录后加工转录45S-rRNA剪接18S-

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