标准解读
《GB/T 34777-2017 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达产品残留DNA检测 荧光定量PCR法》是一项国家标准,旨在规范使用荧光定量PCR技术检测由中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系生产的生物制品中可能存在的宿主细胞DNA残留量的方法。该标准适用于采用CHO细胞作为宿主细胞生产重组蛋白、抗体等生物制品过程中产生的最终产品或中间产物中的残留DNA含量测定。
标准详细描述了实验所需材料与设备,包括但不限于:样品处理所需的试剂耗材;用于提取DNA的试剂盒;荧光定量PCR仪及其配套软件;以及特异性针对CHO细胞基因组DNA设计的引物和探针等。此外,还提供了具体的实验步骤,如样本前处理、DNA提取纯化、荧光定量PCR反应体系建立及循环条件设定等内容,并强调了每一步操作中需要注意的关键点以确保结果准确性。
对于质量控制方面,《GB/T 34777-2017》规定了阳性对照品、阴性对照品以及内参的选择要求,同时给出了最低检出限、线性范围、精密度和特异性等方面的性能指标。通过这些措施保证了不同实验室间检测结果的一致性和可靠性。
最后,标准还介绍了数据处理方法,如何根据Ct值计算出样品中CHO细胞DNA的具体浓度,并对可能出现的问题提供了解决方案。这为从事相关领域研究和技术人员提供了科学依据和技术指导,有助于提高我国在生物制药行业内的产品质量控制水平。
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....
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- 现行
- 正在执行有效
- 2017-11-01 颁布
- 2018-05-01 实施
文档简介
ICS07080
A40.
中华人民共和国国家标准
GB/T34777—2017
中国仓鼠卵巢CHO细胞表达产品
()
残留DNA检测荧光定量PCR法
DetectionofresidualDNAinbiologicalproductwhichexpressedfrom
ChinesehamsterovarCHOcell—
y()
Fluorescentquantitativepolymerasechainreactionassay
2017-11-01发布2018-05-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
中国国家标准化管理委员会
中华人民共和国
国家标准
中国仓鼠卵巢CHO细胞表达产品
()
残留DNA检测荧光定量PCR法
GB/T34777—2017
*
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲号
2(100029)
北京市西城区三里河北街号
16(100045)
网址
:
服务热线
:400-168-0010
年月第一版
201711
*
书号
:155066·1-58352
版权专有侵权必究
GB/T34777—2017
前言
本标准按照给出的规则起草
GB/T1.1—2009。
本标准由全国生化检测标准化技术委员会提出并归口
(SAC/TC387)。
本标准起草单位信达生物制药苏州有限公司中国测试技术研究院生物研究所
:()、。
本标准主要起草人孙左宇周李华李雪峰黄晓刚袁志军郭燕红
:、、、、、。
Ⅰ
GB/T34777—2017
中国仓鼠卵巢CHO细胞表达产品
()
残留DNA检测荧光定量PCR法
1范围
本标准规定了检测残留宿主的荧光定量法
DNAPCR。
本标准适用于中国仓鼠卵巢细胞宿主细胞系表达的生物制品的残留宿主的检测
CHO()DNA。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件
。,()。
分析实验室用水规格和试验方法
GB/T6682
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
。
31
.
Ct值cyclethreshold
每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数
。
4缩略语
下列缩略语适用于本文件
。
中国仓鼠卵巢
CHO:(ChineseHamsterOvary)
5原理
以真核细胞基因组中具有高拷贝数的为目的基因设计特异性扩增该基因的引
16SrRNA,PCR
物包括正向引物和反向引物
,:ForwardPrimer(5'-CCAGGCATTGGTGGCAC-3'):ReversePrimer
(5'-AGACAGGGTTTCTCTGT-3')。
采用荧光定量法采集荧光绘制出的扩增曲线值与扩增体系中起
SYBRPCR(FQ-PCR),PCRCt,
始目的基因模板的对数值呈反比以起始模板对数值为纵坐标值为横坐标制作标准曲线
,DNA,Ct,。
根据标准曲线方程计算样品的残留量从而达到定量检测样品残留的含量目的
DNA,DNA。
6仪器设备
61荧光定量仪含有荧光染料检测通道
.PCR:SYBR。
62紫外可见分
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