副溶血性弧菌

副溶血性弧菌制作人：刘明路furongxuexinghujun目录CONTENTS生物学特性shengwuxuetexing01检验结果jianyanjieguo05注意事项zhuyishixiang06实验材料shiyancailiao03操作步骤caozuobuzhou04PARTONE生物学特性生物学特性PARTONEPARTTWOPARTTHREE生物学特性本菌为G-，可两端浓染，多形态，无芽孢，单端单鞭毛，有嗜盐特性，在30-37℃最适温度时增长较快，一般冬季不易检出。多形态：弧状、逗点状球状、丝状杆状、棒状等。一、形态与染色

二、培养特性嗜盐：VP在含3%～6%盐的培养基繁殖迅速，低于0.5%或高于8%盐水中停止生长。生长温度：最适为37℃，4℃不生长。pH:最适pH为7.4-8.0。需氧性:需氧性很强，厌氧条件下生长缓慢三、抵抗力敏感：淡水等无盐环境不耐热对酸敏感，在2％冰醋酸或食醋中立即死亡，对氯、碳酸、来苏水等一般化学消毒剂敏感：对磺胺噻唑、氯霉素、合霉素敏感。耐受：耐高浓度NaCl－海水，盐渍酱菜中存活时间较长；耐低温的抵抗力较强耐青霉素、磺胺嘧啶。四、致病性抗原类型：12种O抗原及59种K抗原致病物质：致热性溶血素(TDH)，TDH类似溶血毒(TRH)具有溶血活性、肠毒素和致死作用临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。主要病理变化为空肠及回肠有轻度糜烂，胃粘膜炎、内脏(肝、脾、肺)淤血等。各种副溶血性弧菌菌落TCBS上的副溶血性弧菌菌落科玛嘉上的副溶血性弧菌菌落分离出的副溶血性弧菌菌落PARTTWO检验原理检验原理01定量检测检验原理特点：样品用3%氯化钠蛋白胨水10倍连续稀释后取三个稀释度各接3支含有该培养基的平皿，培养计数。研究对象：样品中是否检出副溶血性弧菌。02定性检测检验原理特点：首先将样品接种到氯化钠琼脂平板和ss琼脂平板各一个，培养18-24h观察研究对象：根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查MPN检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。检验流程样品25g(ml)+3%氯化钠碱性蛋白胨水TCBS平板定性检测科玛嘉弧菌平板1、镜检3、三糖铁实验2、氧化酶实验4、嗜盐实验报告结果

生化实验

API20E36±1℃18h36±1℃6h36±1℃24h36±1℃24hPARTTHREE实验材料实验材料013％氯化钠碱性蛋白陈水〔APW)、3％氯化钠胰蛋白胨大豆〔TSA）琼脂、硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂、3％氯化钠三糖铁（TSI

）琼脂培养基023％氯化钠甘露醇试验培养基、3％氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基、3％氯化钠MR-VP

培养基氯化钠结晶紫增菌液嗜盐性试验培养基

03氧化酶试剂、革兰氏染色液、革兰氏染色液、3%氯化钠溶液、

V-P试剂、甲基红试剂、靛基质试剂等。试剂PARTFOUR操作步骤试验方法样品用3%氯化钠蛋白胨水10倍连续稀释后取三个稀释度各接3支含有该培养基的平皿，培养计数。样品处理及培养第一步第二步第三步第四步首先将样品接种到氯化钠琼脂平板和ss琼脂平板各一个，培养18-24h观察。也可增菌液直接分离。分离培养将上述培养物接种无盐胨水、7%、11%氯化钠胨水。嗜盐性试验挑取可疑培养物镜检。涂片镜检第五步挑取上述可疑菌落，转种3.5%氯化钠三糖铁斜面，观察结果（下部变黄，有动力，不产H2S）可以菌落培养第六步V-P、靛基质、甲基红试验等生化试验PARTFIVE检验结果检验结果初步鉴定结果副溶血性弧菌：氧化酶试验：阳性。涂片镜检：G-，棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。3％氯化钠三糖铁斜面：底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。嗜盐性试验：分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水中培养，在无氯化钠和10％氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在7％氯化钠的胰胨水中生长旺盛。确定鉴定结果生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。或API

20E

生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。生化性状符合要求时，为副溶血性弧菌。PARTSIX注意事项注意事项溶血性试验我妻氏用高盐血琼脂培养基，在限定的条件下培养副溶血性弧菌时出现的溶血反应，称此溶血性能为“神奈川现象”。此试验要求是用人或兔的新鲜红血球制备高盐血平板，经37℃、24h培养，如在单个菌落周围呈现透明溶血环或在菌落下面有明显溶血者，为“神奈川现象”阳性，若不出现透明溶血环或无明显溶血者，为“神奈川现象”阴性。有致病性的副溶血性弧菌，多数为神奈川现象阳性，但亦有少数为阴性。动物试验经上述检验的可疑菌株，用小鼠测定毒力，将16~18h的蛋白胨水或肉汤培养物，注射小鼠腹腔0.3~0.5mL，有毒力者可在5~10h发病死亡，长者有24h左右发病死亡。发病时有竖毛、运动不活泼，腹部紧贴罐底，呼吸困难，四肢抽