医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书

医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书医院细胞遗传室常用实验溶液试剂的配置作业指导书目的规范试剂的配制，为临床实验的靠谱性供给质量保障。原则专人负责，一剂一皿，一配一录，双人核签。按期校正，可溯源。性能特点规范试剂的配制，为临床供给正确稳固有效的试剂，减少人为要素对临床试验结果的影响。方法化学实验试剂的配制方法试剂与耗材量筒、烧杯、玻棒、电子称、量杯、容量瓶、定容瓶、油纸、药勺、100ul加样枪、100ul枪头操作步骤6.1生理盐水正确称取氯化钠（NaCl）(生产商xxxx,批号xxxx有效期xxx)8.5g，加二蒸水溶解定容至1L，待充分溶解混匀装瓶，贴标签（配置日期、药品名称、浓度、用途、有效期、配制双人），记录双人署名6.20.075M氯化钾溶液氯化钾（KCl）5.587g，加二蒸水至1000ml，室温保留，用于细胞低渗办理。6.312×SSC溶液氯化钠（NaCl）105.3g柠檬酸钠（Na3C6H3O7·5H2O）52.94g加二蒸水至1000ml，室温保留，临用时用二蒸水稀释至所需浓度。6.40.25%胰蛋白酶溶液（Trypsin）胰蛋白酶粉末（1:250）250mg无Ca2+,Mg2+的PBS加至100ml先用少量消毒的PBS将胰蛋白酶粉末溶解，再补足PBS至100ml，搅拌混匀，置4℃冰箱4小时，用0.22um微孔滤膜除菌，分装成小瓶于-20℃保留，用于消化细胞。6.5Giemsa染色液Giemsa贮备液：配制：Giemsa粉末1g加少量甘油混淆研碎→合计加入甘油66ml，充分混匀→倒入烧杯中在55-60℃水浴中加热2小时→冷却→加入甲醇66ml，充分混淆→在室温中静置2-3周，过滤储存于棕色瓶中，可长久使用。6%Giemsa

工作液：47ml蒸馏水中加入

Giemsa

贮备液3ml，用于染色体标本的染色，一般染色时间为

10-20

分钟。6.6无钙镁离子溶液氯化钠（NaCl）8g氯化钾（KCl）0.2g柠檬酸三钠Na3C6H5O7?2H2O）1g磷酸二氢钠NaH2PO4?H2O）0.05g碳酸氢钠（NaHCO3）1g葡萄糖1g挨次溶于二蒸水，最后加二蒸水至1000ml，用除菌滤器除菌，保留于4℃冰箱备用。6.7Hank’s溶液（1）原液甲：氯化钠（NaCl）80g氯化钾（KCl）4g硫酸镁（MgSO4?7H2O）1g氯化镁（MgCl2?6H2O）1g氯化钙（CaCl2）0.714g将氯化钙溶液于50ml二蒸水中，其余挨次溶于100ml二蒸水中，两液混淆，加二蒸水至500ml，加氯仿保留于4℃冰箱中。（2）原液乙：磷酸氢二钠（Na2HPO4）1.52g磷酸氢二钾（KHPO）0.6g24葡萄糖10g0.4%酚红液50ml挨次溶于400ml二蒸水中，加入酚红液，加二蒸水至500ml，加入氯仿，保留于4℃冰箱中。（3）使用液：取原液甲25ml，原液乙25ml，加入已早先灭菌的二蒸水至500ml，分别装入溶液瓶中，以9磅高压蒸汽灭菌10分钟，冷却后，置4℃冰箱中保留，使用前以3.5%的NaHCO3液调pH。6.80.02%乙二胺四乙酸二钠溶液乙二胺四乙酸二钠（EDTA）0.1g氯化钠（NaCl）4g氯化钾（KCl）0.1g磷酸氢二钠（Na2HPO4?H2O）0.576g磷酸二氢钾（KHPO）0.1g24葡萄糖0.1g挨次溶于二蒸水中，加入0.4%酚红溶液2.5ml，最后加入二蒸水至500ml，用溶液瓶分装，9磅10分钟高压蒸汽灭菌，保留于4℃冰箱，使用时用3.5%碳酸氢钠溶液调pH，用于分别细胞。6.9秋水仙素溶液称取2毫克秋水仙素，溶解于100ml0.85%的NaCl溶液中，用时最后浓度依据不一样的培育资料而定，一般0.04-0.08μg/ml培育液。6.10抗菌素和抗霉素溶液为了预防因无菌操作不严而发生污染，往常在培育液内加入适当的抗菌素，常用的有青霉素和链霉素适用，浓度分别为50-100IU/1ml，还有放线菌素B（ActinomycinB）或制霉菌素（mycostatin）可克制霉菌污染。组织、细胞培育常用抗生素见表3-5表3-5组织、细胞培育常用抗生素液（引自Pollardetal.1997）抗生素作用对象参照浓度稳固性（d）（g/ml）二性霉素真菌-B氨苄青霉革兰氏阳性、阴素性菌氯霉素革兰氏阴性菌红霉素革兰氏阳性、支原体庆大霉素革兰氏阳性、阴性菌、支原体卡那霉素革兰氏阳性、阴性菌制霉菌素真菌青霉素-G革兰氏阳性菌链霉素革兰氏阳性、阴性菌利福平革兰氏阳性、阴性菌

1310035510035051005503100IU/ml31003503四环素革兰氏阳性、阴104性菌、支原体使用表中所列出的工作浓度，可在37℃长时间控制轻度污染，而对细胞无毒性作用。大部分的体外培育都使用青霉素和链霉素，其余抗生素仅在特别状况下使用。6.11小牛血清小牛的年纪约6个月，体重限于500磅之内，放血致死，获得小牛血清。6.12肝素溶液取肝素1g加无菌生理盐水2.5ml，即成4%的肝素溶液，可用于肝素化外周血培育基。而抽血时则用临床注射用肝素(每支2ml含肝素12500U)6.13外周血细胞培育液25毫升培育瓶中加入RPMI-1640培育基4ml，小牛血清1ml，PHA适当，0.4%肝素0.05ml，双抗：青霉素和链霉素，终浓度为100U/ml，用3.5%碳酸氢钠调理pH为（目前实验室已采纳商业化培育基）。6.14骨髓及其余悬浮细胞培育液含有20%小牛血清的RPMI1640培育基(或其余人工综合培育基)，培育基的用量可视骨髓细胞的多少而定，一般为5ml。6.15Brdu和Frdu溶液Brdu250μg/ml称取Brdu62.5mg加生理盐水定容至250mlFrdu2.6mM称取Frdu128.024mg，二蒸水溶解定容至200ml，过滤除菌，避光保留。6.1650%AgNO3称取AgNO35g，HCOOH10ul,加去离子水至10ml6.17卡诺固定液（甲醇:乙酸=3:1）6.185%Ba(OH)2称取Ba(OH)22.5g加二蒸水50ml溶解高分辨染色体系备试剂的配制7.1Frdu母液：正确称取5-氟脲嘧啶核苷（Frdu）粉末0.0248g，加去离子水溶解，定容至10ml，即配成10-2M的Frdu母液。过滤分装成1ml/管，-20℃中冻存待用。7.2Frdu工作液：正确量取已配制好的10-2MFrdu母液稀释1000倍，即配成浓度为10-5M的Frdu工作液。过滤分装，4℃中冷藏待用。7.3Uridine母液:正确称取脲嘧啶核苷(Uridine)粉末0.0246g,加去离子水溶解，定容至10ml，即配成10-2M的Uridine母液。过滤分装成1ml/管，-20℃中冻存待用。7.4Uridine工作液:正确量取已配制好的10-2MUridine母液加去离子水稀释100倍，即配成浓度为10-4M的Uridine工作液。过滤分装，4℃中冷藏待用。7.5TDR母液:正确称取胸腺嘧啶核苷（TDR）粉末0.2432g,加去离子水溶解，定容至10ml，即配成10-1MTDR母液。过滤分装成1ml/管，-20℃中冻存待用。7.6TDR工作液:正确量取已配制好的10-1MTDR母液稀释100倍，即配成浓度为10-3M的TDR工作液。过滤分装，4℃中冷藏待用。7.7EB工作液:正确称取溴乙啶（EB）粉末0.05g,加去离子水溶解，定容至50ml,即配成浓度为1mg/ml的EB溶液。过滤分装，4℃中冷藏待用。7.8秋水仙胺工作液:正确称取秋水仙胺粉末0.01g，NaCl4.5g,加去离子水溶解，定