DNA的粗提取与鉴定(修改版)

DNA的粗提取与鉴定目的要求知道DNA提取原理据原理设计DNA提取方法能对DNA进行鉴定掌握本实验的基本操作方法一、实验原理

1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。

3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

5.注意事项：最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液实验材料和用具实验材料：1、新鲜鸡血细胞液（5~10ml）；2、体积分数为95%的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；3、蒸馏水；4、质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）

；5、物质的量浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的NaCl溶液；6、二苯胺试剂。实验用具：铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯；（100ml，一个，50ml、500ml各二个）；试管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。二、方法与过程

1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。2.提取DNA。①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。②两层纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。③原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水涨破，玻璃棒快速搅拌，机械加速血细胞破裂。⑴.提取血细胞核物质：⑵.溶解核内的DNA：滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。不要碰底！用吸管吸走上清液抗凝剂DNA含量高防止DNA破碎防止DNA破碎溶解DNA效果好取滤液涨破⑶.析出含DNA的粘稠物：⑷.滤取含DNA的粘稠物：⑸.DNA粘稠物的再溶解：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现白色丝状物；当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。20mL2mol/L的NaCl溶液步骤⑷含DNA的粘稠物在20mL烧杯中一个方向轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液：用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。取滤渣（析出物）取滤液含杂质的DNA⑺.提取含有杂质较少的DNA：步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中析出乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。3.DNA的鉴定：加入0.015mol/L的NaCl溶液5mL和二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，待冷却后观察溶液是否出现蓝色。1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”三、实验小结析出DNA效果好DNA细小易碎反应条件溶解DNA方法步骤

加入物质

目的

1.制备鸡血细胞液

柠檬酸钠溶液

①

2.提取鸡血细胞细胞核物质

20m1蒸馏水

②

3.溶解细胞核内的DNA

2mo1／L的NaCI溶液40mL

③

4.析出含DNA的黏稠物

蒸馏水

④

5.滤取含DNA的黏稠物

多层纱布⑤

6.将DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.过滤含DNA的NaCl溶液

两层纱布⑦

8.提取含有杂质较少的DNA

冷却的95％的酒精50mL

⑧

A:(1)向试管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4mL二苯胺试剂

9.DNA的鉴定

B:(1)向试管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺试剂

⑨

①防止血凝固②使血细胞涨破③溶解DNA④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地析出⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中⑦除去含DNA的滤液中的杂质⑧析出DNA⑨A出现蓝色B无变化2.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol／L和0.14mol／L对DNA有何影响?1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出反馈练习3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。答：D1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（）A.防止凝血B.加快DNA析出C.加快DNA溶解D.加速凝血练一练A2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（）A2mol/lB0.1mol/lC0.14mol/lD0.015mol/l3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（）A加快DNA溶解的速度B加快溶解杂质的速度C减小DNA的溶解度，加快DNA析出D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出CC4、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水,在这个过程中DNA的溶解度变化情况分别是A减小;减小B增大;增大C先减小后增大D增大;减小5、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的办法是A加蒸馏水B加矿泉水C加清水D加生理盐水6、与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是A操作时缓慢滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度B操作时用玻棒轻缓搅拌以保证DNA分子的完整C加蒸馏水可以同时降低DNA和蛋白质的溶解度D当丝状粘稠物不再增加时，NaCl溶液的浓度可以认为是0.14mol/L7、你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？用甲基绿染液。结果丝状呈现绿色。8、DNA遇二苯胺会染成（沸水浴）A硅红色B红色C紫色D蓝色D四、实验原理拓展介绍。1.DNA的释放。

DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之涨破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。2.DNA与蛋白质分离。在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，释放出的DNA也溶解在高浓度的氯化钠溶液中3.DNA的析出与获取。

因为DNA在低浓度（0.14mol/L

）的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。4.DNA的再溶解。用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀和浓缩。对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即