标准解读

《GB/T 28067-2011 甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法》是一项国家标准，规定了采用实时荧光RT-PCR技术对甘蔗黄叶病毒进行检测的具体方法。该标准适用于甘蔗及其相关材料中甘蔗黄叶病毒的定性检测。

标准详细描述了实验所需的主要仪器设备和试剂，包括但不限于核酸提取试剂盒、逆转录酶、Taq DNA聚合酶等，并明确了这些试剂的选择要求与质量控制标准。对于样本处理，给出了详细的步骤指导，从样品采集到RNA提取再到cDNA合成，每一步都做了具体说明，以确保实验结果的一致性和准确性。

在引物设计方面，《GB/T 28067-2011》提供了针对甘蔗黄叶病毒特定序列区域设计引物的原则及推荐使用的引物序列。此外，还介绍了如何设置反应体系、选择合适的扩增条件以及如何通过熔解曲线分析来判断阳性或阴性结果的方法。

标准中特别强调了质量控制的重要性，不仅包括内部对照（如无模板对照、阳性对照）的使用，还提出了对外部质控品的要求，以保证整个检测过程的有效性和可靠性。同时，对于可能出现的各种问题，比如假阳性或假阴性结果的原因分析及解决策略也有所涉及。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2011-12-30 颁布
  • 2012-06-01 实施
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GB/T 28067-2011甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法_第1页
GB/T 28067-2011甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法_第2页
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文档简介

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T28067—2011

甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法

Detectionofsugarcaneyellowleafvirususingthereal-timeRT-PCR

2011-12-30发布2012-06-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T28067—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位福建农林大学甘蔗综合研究所农业部甘蔗及制品质量监督检验测试中心农业

:、、

部甘蔗遗传改良重点开放实验室

。

本标准主要起草人高三基陈平华陈如凯郭晋隆张华许莉萍王恒波陈由强

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28067—2011

甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了甘蔗黄叶病毒实时荧光检测方法所需的仪器与试剂样品的采集与前处

RT-PCR、

理操作方法以及结果判定

、。

本标准适用于甘蔗植株种苗及种茎中甘蔗黄叶病毒的快速检测诊断

、、。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

21

.

反转录reversetranscription

以为模板合成的过程也称逆转录

RNADNA,。

22

.

实时荧光RT-PCRrealtimeRT-PCR

实时荧光反转录聚合酶链式反应

-。

23

.

Ct值cycletime

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数

。

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

核糖核酸

RNA:

Taq酶Taq聚合酶

:DNA

种脱氧核苷三磷酸混合液

dNTPs:45′-

酶

RNase:RNA

莫洛尼鼠白血病病毒Moloneymurineleukeminvirus反转录酶

M-MLV:()

羧基荧光素

FAM:6-

羧基四甲基罗丹明

TAMRA:6-

4方法原理

在反转录酶作用下将反转录成再以为模板利用Taq酶进行实时荧光扩

RNAcDNA,cDNAPCR

增反应采用Taq探针方法在比对甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因的基础上设计一对仅在甘蔗黄

(Man)。,

叶病毒外壳蛋白基因间保守的特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针探针的端标记荧

。5’FAM

光素为报告荧光基团端标记荧光素为淬灭荧光基团结合部位位于目的扩增片段内部

,3’TAMRA,。

当完整的探针与目的序列配对时荧光基团发射的荧光因与端的淬灭剂接近而被淬灭仪器检测不

,3’,

到荧光信号但在进行延伸反应时Taq酶发挥的外切核酸酶功能

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