标准解读

《GB/T 28062-2011 柑桔黄龙病菌实时荧光PCR检测方法》是一项国家标准，主要针对柑橘类植物中黄龙病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus, CLas）的快速、准确检测。该标准详细规定了使用实时荧光PCR技术来检测柑橘黄龙病菌的具体操作流程和技术要求，适用于科研机构、检验检疫部门以及相关企业对疑似感染样品进行检测。

在实际应用过程中，首先需要按照标准要求准备样本，包括但不限于从柑橘树上采集叶片等组织材料，并通过适当的方法提取DNA。提取过程需确保获得高质量的基因组DNA，这对于后续PCR反应的成功至关重要。

接着是引物和探针的设计与选择。标准中推荐了几组特异性高的引物及TaqMan探针序列，这些序列能够有效识别柑橘黄龙病菌特有的基因片段，从而保证了检测结果的高度准确性。用户也可以根据最新的研究成果自行设计新的引物组合，但必须经过严格验证以确认其有效性。

随后进入PCR扩增阶段。此步骤严格按照仪器制造商提供的说明书或实验室已建立的标准操作程序执行，设置合适的循环条件，如预变性温度及时长、退火/延伸温度及时间等参数。整个PCR反应体系通常还包括dNTPs、MgCl₂缓冲液、热启动DNA聚合酶等成分。

最后，在PCR结束后，依据荧光信号强度变化曲线判断是否存在目标病原体。如果样品中含有柑橘黄龙病菌，则会在特定循环数后观察到明显的荧光信号增长；反之，则无明显变化。此外，还需设立阳性对照和阴性对照实验，用以校正实验系统误差并验证检测系统的可靠性。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2011-12-30 颁布
  • 2012-06-01 实施
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GB/T 28062-2011柑桔黄龙病菌实时荧光PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T28062—2011

柑桔黄龙病菌实时荧光PCR检测方法

DetectionofCandidatusLiberibacterasiaticususingthe

real-timefluorescentPCR

2011-12-30发布2012-06-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T28062—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位重庆大学农业部农业技术推广服务中心中华人民共和国北京出入境检验检

:、、

疫局

。

本标准主要起草人殷幼平王中康王玉玺高文娜夏玉先曹月青彭国雄李正国

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28062—2011

柑桔黄龙病菌实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了柑桔黄龙病亚洲韧皮杆菌Candidatus实时荧光检测的

(Liberibacterasiaticus)PCR

样品制备检测操作方法及结果判定标准

、。

本标准适用于对芸香科和非芸香科植物罹病植株和传播媒介柑桔木虱中黄龙病亚洲韧皮杆菌的检

测和病害鉴定

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

柑桔苗木产地检疫规程

GB5040

转基因产品检测实验室技术要求

GB/T19495.2

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

柑桔黄龙病CitrusHuanglongbing

一种由韧皮杆菌引起的植物检疫性病害主要侵染柑桔属金柑属和枳属等柑桔类植株重由带

。、。

菌种苗远距离传播田间主要由柑桔木虱取食传播典型受害植株叶片斑驳不均匀黄化枝梢黄化果

,。,,

实畸形种子败育严重时可引起植株死亡

,,。

32

.

实时荧光PCRreal-timefluorescentPCR

实时荧光聚合酶链式反应一种在体外扩增微量的特殊片段的方法在扩增过程中由于荧光

,DNA,

物质的释放或荧光物质与扩增产物结合并被实时检测而能够快速灵敏地检出模板的存在

、DNA。

33

.

扩增引物primer

人工合成的寡核苷酸序列其序列与待扩增的目标序列中的一段相同用于引导体外

,DNA,DNA

扩增

。

34

.

扩增模板templet

体外扩增中所用的待扩增的靶标序列

DNA。

35

.

Ct值cyclethresholdvalue

实时荧光反应中每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数

PCR。

36

.

亚洲韧皮杆菌重组质粒DNArecombinantplasmidDNA

利用特异性引物扩增柑桔黄龙病亚洲韧皮杆菌基因组模板获得的亚洲韧皮杆菌特异性

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