纸层析法鉴定转氨基作用

纸层析法鉴定转氨基作用2021/5/71[目的]1.验证氨基酸的转氨基作用

2.掌握纸上层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和方法。

[原理]在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α-氨基生成相应的α-酮酸，而另一种α-酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程，称为氨基酸的转氨基作用。2021/5/72层析理论层析法（色谱法）：是利用混合物各组分物理、化学性质（如溶解度、吸附能力、电荷和分子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不同的区域，借以将各组分分离。

固定相——滤纸结合的水流动相——乙醇由于混合物中的有效成分和杂质受固定相的阻力和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度不同，有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、吸附和交换作用，最终结果是使混合物得到分离。2021/5/73[步骤]

1.制备肝匀浆

2.转氨基反应取干净试管2支，分别标明测定管与对照管，按下表操作。

管号试剂（滴）测定管对照管肝匀浆10d10d37℃水浴10min沸水浴10min丙氨酸10d10dα-酮戊二酸10d10d37℃水浴20min2021/5/743.准备：取直径15cm圆形滤纸1张，用圆规在滤纸正中作一半径为1cm的小圆圈，用铅笔通过圆心作两点互相垂直的线，并在两线外端等距离点4个原点，标明测、对、谷、丙。在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔芯粗细），另取同类滤纸小片1.5cm×3cm，下三分之二剪成须状。将其卷成圆筒如灯芯状，插入小孔（略突出于滤纸面）2021/5/75[步骤]4.点样分别用采血管吸取测定管上清液、对照管上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各1滴，依次点在滤纸上标明测、对、谷、丙的点样处。注意点样斑点不可太大。直径应小于0.5cm。必要时可再点一次，每点一滴，用吹风机吹干后方可再点第二滴，并且点样量应力求均匀相等。5.层析

将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析液中进行层析。约40分钟后，去除灯芯，立即用铅笔划出溶剂前沿，用吹风机吹干。2021/5/766.显色

将滤纸平放在培养皿上，用喷瓶向滤纸均匀喷洒0.1%茚三酮溶液，再用吹风机吹干，可见紫红色的同心弧形斑点。7.计算按下表记录有关数据，计算Rf值。“谷”“丙”“对”“测1、2”点样处至色斑中心距离(A)点样处至溶剂前沿距离(B)Rf值(A/B)

将“对”、“测”各色斑的Rf值与已知氨基酸的Rf值进行对比，确定它们各是什么氨基酸。据此解释转氨基作用。2021/5/779、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。***2/3/20235:02:29PM11、人总是珍惜为得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。***Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、业余生活要有意义，不要越轨。**2/3/202317、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。***03-2月-23谢谢大家2021/5/789、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20235:02:29PM11、人总是珍惜为得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、业余生活要有意义