定量方法概述

第四节

分析方法的验证1.验证的目的：证明采用的方法适合于相应检测要求

2.需验证的分析项目：鉴别试验、杂质检查、有效成分的含量测定以及制剂中其它成分的测定，药品溶出度、释放度。一、分析方法验证的内容（一）准确度用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度表示方法：用回收率（%）表示取样量取样量原料药可用已知纯度的对照品或供试品进行测定用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。

制剂：考察其他组分和辅料对回收率的影响①用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。②可向制剂中加入已知量的被测物进行测定（加样回收率）③用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定结果进行比较。杂质定量测定的准确度向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。本法测定结果与另一成熟的方法进行比较3．数据要求在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液3×3，至少9个测定结果（二）精密度同一样品多次测量值之间相互接近的程度表示方法：偏差、标准偏差（SD）或相对标准偏差（RSD）重复性在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度中间精密度在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度重现性在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度（三）专属性有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能正确测定出被测物的特性

鉴别、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性（一）鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。（二）含量测定和杂质测定

①在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。

②在杂质和降解物不能获得的情况下，可用已验证方法或药典方法进行对照。（四）检测限指试样中被测物能被检测出的最低量(1)非仪器分析目视法(2)信噪比法把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1时的相应浓度或量确定检测限。（五）定量限指试样中被测物能被定量测定的最低量，常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10∶1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。（六）线性线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。线性关系：Y=a+bx（r=0.9999)线性程度：相关系数15（七）范围范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。16

是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。实际工作中常考察的因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等（八）耐用性一、分析方法验证的内容①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充③视具体情况予以验证第五节

定量分析有关计算原料药的含量用百分含量表示：制剂的含量则用标示量的百分含量表示：

标示量(S)：就是药品标签上注明，每一单位剂量药品中主药的量。表示为g/片、mg/ml等。片剂表示量百分含量：每片实测的含量？在分析时，一般取样10片或20片，精密称定其总重量，再取一定量的片粉来测量，以平均片重来代替片重进行计算。取10片，精密称定重量为2.000g，研磨，精密称取片粉0.2100g，实测量是0.1980g，求平均片重?每片实测的含量？注射剂剂表示量百分含量：T(滴定度):1ml滴定液(mmol/L)相当于被测药物的毫克数（一）滴定分析法（一）滴定分析法（一）滴定分析法呋塞米原料药含量测定取本品0.4988g（干燥品），加乙醇30ml，微温使溶解，放冷，加甲酚红指示液4滴与麝香草酚蓝指示液1滴，用氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）滴定至溶液显紫红色，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并将滴定的结果用空白试验校正，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于33.07mg的呋塞米。按干燥品计算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。呋塞米原料药含量测定（一）滴定分析法由于98.48%＜99.0%，故本品含量不合格剩余滴定法也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴定液A反应，然后再进行含量计算滴定液浓度校正因子空白试验消耗滴定液B的体积剩余的滴定液A消耗的滴定液B的体积（一）滴定分析法司可巴比妥钠原料药含量测定取本品0.1041g（干燥品），置250ml碘瓶中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5m1，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10m1，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品计算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白实验消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）25.02ml（一）滴定分析法司可巴比妥钠原料药含量测定测定结果大于98.5%，故本品含量合格（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片剂（标示量0.5g）的含量测定取甲苯磺丁脲10片，精密称定为5.948g，研细，精密称取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微热，使其溶解，放冷，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉红色，消耗量18.47ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.04mg的甲苯磺丁脲。《中国药典》现行版规定本品含甲苯磺丁脲应为标示量的95.0%～105%。试计算本品的标示量百分含量，并判断是否符合规定。（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片剂（标示量0.5g）的含量测定本品含量合格(二）分光光度法供试品溶液的浓度CX供试品溶液的浓度CX1.单位的统一2.样品有没有稀释3.表示方法(二）分光光度法对乙酰氨基酚原料药含量测定精密称取对乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含量(二）分光光度法对乙酰氨基酚原料药含量测定(二）分光光度法甲氧苄啶注射液（规格2ml：0.1g）含量测定精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀。在271nm波长处测定吸光度为0.416，计算甲氧苄啶标示量百分含量。(二）分光光度法甲氧苄啶注射液（规格2ml：0.1g）含量测定（三）色谱法供试品溶液的浓度CX（三）色谱法头孢唑林钠含量测定取含量为99.5%的头孢唑林钠对照品25.13mg，配成溶液，取此溶液10µl注入液相色谱仪，测定峰面积，3次测定值分别为：2490189、2492796和2492178；另外称取头孢唑林钠供试品3份，分别为28.13mg、29.35mg和27.10mg，按上法测定，分别取10µl溶液注入液相色谱仪，测得峰面积分别为2634858、2763699和2536847，求供试品的百分含量。（三）色谱法头孢唑林钠含量测定第一次测定：第二次测定：第三次测定：对照品平均峰面积：（三）色谱法复方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松标示量百分含量色谱条件与系统适用性试验：固定相：C18

流动相：甲醇-水（70∶30）检测波长：240nm理论板数：按氢化可的松峰计算不低于2000分离度：地塞米松峰、内标物质峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求（三）色谱法复方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松标示量百分含量内标溶液：甲睾酮0.0100g，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度测定法：供试品+内标记录色谱图；测得数据如下：（三）色谱法复方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松标示量百分含量另取醋酸地塞米松对照品约0.0128