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文档简介
检验科血脂检验操作规程标本采集与处理1.受检者抽血前二周应保持平衡的饮食习惯,近期体重稳定无外伤,手术等意外情况。并注意如有使用降糖、降脂、降压、避孕药,犷受体阻滞剂,免疫抑制剂,激素药物等,则应根据所用药物特性停药数天或数周后再作血液脂类检测。2•空腹抽血,TG,脂蛋白,载脂蛋白测定应至少禁食12小时(仅作胆固醇测定不必强求空腹)24小时内不作剧烈运动。抽血前不要久站立。至少应静坐5分钟。抽血时止血带使用不可超过1分钟。3・标本用血清,也可用肝素或EDTA・Na2抗凝之血浆。EDTA.Na2浓度不宜太高。4•血标本室温放置不得超过3h,放置30~45分钟后应即时分离出血清(浆)盖封於4°C冰箱中可稳定至少4天,如需长期保存,应於-70C中冰冻存放,不可反复冻融。血清总胆固醇(TC)测定酶法(CHOD~PAP法)【试剂】市售现成试剂。【操作】按试剂及仪器使用说明书要求设定程序,输入参数用自动或半自动生化分析仪测定(速率法)终点法可手工操作,用普通分光光度计比色测定。波长500nm或520nm。【标本】血清(浆)参看本节的标本采集与处理。【附注】本法为中华医学会检验学会推荐的TC测定常规方法(中华医学检验杂志,1995、18:185)。胆固醇标准液以定值参考血清为宜,而不宜用Chol的水溶液作标准。Chol定值质控血清亦不应用作标准液。主要技术指标:冬点法批内CVV1.5%、批间CVW2.5%。灵敏度:显色剂用酚时,TC5・2mmol/L(200mg/dl)时的吸光度(A500nm)约0.30~0.35,故A500nm=0.005时TC浓度约为0.08mmol/L(3mg/dL)。测定范围:当血清与试剂用量之比为1:100时其测定的上界为13mmo1/L(500ng/dL)。血清甘油三酯(TG)测定酶法(GPO~PAP法)【试剂】市售现成试剂。有两种。一步酶法单一试剂,二步酶法双试剂。标准液(参考物)一步酶法之用三油酸甘油酯水溶液,也可用甘油,但甘油不适用於二步酶法。【操作】按试剂及仪器使用说明书要求设定程序和参数,用自动或半自动生化分析仪测定,终点法可用普通分光光度计手工操作,比色测定。波长500nm。【标本】血清(浆)参看本节标本采集与处理。【附注】本法在操作程序上分为一步酶法与二步酶法,二步酶法为中华医学检验学会的推荐方法(中华医学检验杂志1995、18:249)。现阶段允许二法并存,要求逐步过渡到统一采用二步酶法,在方法尚未统一前,实验室报告TG测定结果时应注明“除FG值”或“未除FG值”。主要枝术指标:酶试剂用缓冲液配制后,20~25°C应稳定1天,C可稳定3~7天,试剂空白为A500nmW0.05;显色后稳定三30min:测定上界11.3mmo1/L(100mg/dL);精密度:批内CVW3%,批间CVW5%:灵敏度:2mmol/LTGA500nm三0.2。血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定磷钨酸镁沉淀法【试剂】市售成套试剂,沉淀剂,酶试剂(同TG测定)。【操作】按试剂盒说明书操作。1.沉淀含apoB的脂蛋白。2•测定上清液(只含HDL)的胆固醇含量(方法同酶法TC测定)。【标本】血清(浆)。硫酸葡聚糖一镁沉淀法【试剂】市售成套试剂:总HDL试剂,HDL3试剂,酶试剂(同TC试剂)。【操作】按试剂说明书操作:1・沉淀含apoB的脂蛋白,(总HDL试剂);2•沉淀含apoB的脂蛋白及HDL2(HDL3试剂);3•测定总HDL~C及HDL3~C(同酶法TC测定),并计算出HDL2~C量。【标本】血清(浆)血样在室温中不宜久放,应即时测定,原则应低温保存。直接HDL~C测定法【试剂】市售专门的试剂,无沉淀剂。酶试剂同TC测定。(如日本第一化学药品株式会社的产品)。【操作】按试剂盒及仪器使用说明书要求设置程序,输入参数直接用自动或半自动生化分析仪测定,无须沉淀离心分离出HDL步骤。【标本】血清(浆)。血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定1.Friedwald工式计算法:(1)LDL-C二TC—HDL-C—TG/5(以mg/dl为单位计);(2)LDL-C二TC—HDL-C—TG/2.2(以mmo1/L为单位计);(3)只有当血TGV4・52mmo/L结果才较准确;(4)只有TC、TG、HDL-C三项测定都准确且符合标准化要求时,才可计算出LDL-C的近似值。2.聚乙烯硫酸沉淀法【试剂】沉淀剂市售,酶试剂同TC测定。【操作】1.TC测定。2•选择性沉淀血清中LDL,测定上清液之HDL—C与VLDL-C之和的量,(同TC测定)。3•计算出LDL—C的含量。【标本】血清。血清载脂蛋白Al(apoAl)测定免疫透射比浊法。波长340nm,本法批间CVV5%。【试剂】市售试剂盒,试剂2〜8°C保存,不同批号试剂不能混合使用,抗血清效价不应低於l6。【操作】按试剂及仪器使用说明书要求,设定程序和参数用自动生化分析仪测定,也可用特定蛋白分析仪作速率法散射比浊测定,或用含340nm的分光光度计手工操作测定。【标本】
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