检验科血脂检验操作规程

检验科血脂检验操作规程标本采集与处理1．受检者抽血前二周应保持平衡的饮食习惯，近期体重稳定无外伤，手术等意外情况。并注意如有使用降糖、降脂、降压、避孕药，犷受体阻滞剂，免疫抑制剂，激素药物等，则应根据所用药物特性停药数天或数周后再作血液脂类检测。2•空腹抽血，TG，脂蛋白，载脂蛋白测定应至少禁食12小时（仅作胆固醇测定不必强求空腹）24小时内不作剧烈运动。抽血前不要久站立。至少应静坐5分钟。抽血时止血带使用不可超过1分钟。3・标本用血清，也可用肝素或EDTA・Na2抗凝之血浆。EDTA.Na2浓度不宜太高。4•血标本室温放置不得超过3h，放置30~45分钟后应即时分离出血清（浆）盖封於4°C冰箱中可稳定至少4天，如需长期保存，应於-70C中冰冻存放，不可反复冻融。血清总胆固醇（TC）测定酶法（CHOD~PAP法）【试剂】市售现成试剂。【操作】按试剂及仪器使用说明书要求设定程序，输入参数用自动或半自动生化分析仪测定（速率法）终点法可手工操作，用普通分光光度计比色测定。波长500nm或520nm。【标本】血清（浆）参看本节的标本采集与处理。【附注】本法为中华医学会检验学会推荐的TC测定常规方法（中华医学检验杂志，1995、18：185）。胆固醇标准液以定值参考血清为宜，而不宜用Chol的水溶液作标准。Chol定值质控血清亦不应用作标准液。主要技术指标：冬点法批内CVV1.5%、批间CVW2.5%。灵敏度：显色剂用酚时，TC5・2mmol/L（200mg/dl）时的吸光度（A500nm）约0.30~0.35,故A500nm=0.005时TC浓度约为0.08mmol/L（3mg/dL）。测定范围：当血清与试剂用量之比为1:100时其测定的上界为13mmo1/L（500ng/dL）。血清甘油三酯（TG）测定酶法（GPO~PAP法）【试剂】市售现成试剂。有两种。一步酶法单一试剂，二步酶法双试剂。标准液（参考物）一步酶法之用三油酸甘油酯水溶液，也可用甘油，但甘油不适用於二步酶法。【操作】按试剂及仪器使用说明书要求设定程序和参数，用自动或半自动生化分析仪测定，终点法可用普通分光光度计手工操作，比色测定。波长500nm。【标本】血清（浆）参看本节标本采集与处理。【附注】本法在操作程序上分为一步酶法与二步酶法，二步酶法为中华医学检验学会的推荐方法（中华医学检验杂志1995、18：249）。现阶段允许二法并存，要求逐步过渡到统一采用二步酶法，在方法尚未统一前，实验室报告TG测定结果时应注明“除FG值”或“未除FG值”。主要枝术指标：酶试剂用缓冲液配制后，20~25°C应稳定1天，C可稳定3~7天，试剂空白为A500nmW0.05；显色后稳定三30min：测定上界11.3mmo1/L（100mg/dL）；精密度：批内CVW3%，批间CVW5%：灵敏度：2mmol/LTGA500nm三0.2。血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定磷钨酸镁沉淀法【试剂】市售成套试剂，沉淀剂，酶试剂（同TG测定）。【操作】按试剂盒说明书操作。1．沉淀含apoB的脂蛋白。2•测定上清液（只含HDL）的胆固醇含量（方法同酶法TC测定）。【标本】血清（浆）。硫酸葡聚糖一镁沉淀法【试剂】市售成套试剂：总HDL试剂，HDL3试剂，酶试剂（同TC试剂）。【操作】按试剂说明书操作：1・沉淀含apoB的脂蛋白，（总HDL试剂）；2•沉淀含apoB的脂蛋白及HDL2（HDL3试剂）；3•测定总HDL~C及HDL3~C（同酶法TC测定），并计算出HDL2~C量。【标本】血清（浆）血样在室温中不宜久放，应即时测定，原则应低温保存。直接HDL~C测定法【试剂】市售专门的试剂，无沉淀剂。酶试剂同TC测定。（如日本第一化学药品株式会社的产品）。【操作】按试剂盒及仪器使用说明书要求设置程序，输入参数直接用自动或半自动生化分析仪测定，无须沉淀离心分离出HDL步骤。【标本】血清（浆）。血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定1.Friedwald工式计算法：（1）LDL-C二TC—HDL-C—TG/5（以mg/dl为单位计）；（2）LDL-C二TC—HDL-C—TG/2.2（以mmo1/L为单位计）；（3）只有当血TGV4・52mmo/L结果才较准确；（4）只有TC、TG、HDL-C三项测定都准确且符合标准化要求时，才可计算出LDL-C的近似值。2．聚乙烯硫酸沉淀法【试剂】沉淀剂市售，酶试剂同TC测定。【操作】1．TC测定。2•选择性沉淀血清中LDL，测定上清液之HDL—C与VLDL－C之和的量，（同TC测定）。3•计算出LDL—C的含量。【标本】血清。血清载脂蛋白Al（apoAl）测定免疫透射比浊法。波长340nm，本法批间CVV5%。【试剂】市售试剂盒，试剂2〜8°C保存，不同批号试剂不能混合使用，抗血清效价不应低於l6。【操作】按试剂及仪器使用说明书要求，设定程序和参数用自动生化分析仪测定，也可用特定蛋白分析仪作速率法散射比浊测定，或用含340nm的分光光度计手工操作测定。【标本】