微生物基础知识培训

微生物基础知识培训薛庆贺2016.05.25微生物特性洁净区清洁消毒洁净区环境检测微生物检测2006年安徽华源生物药业有限公司“欣弗事件”2008年黑龙江完达山制药厂“刺五加事件”咖啡检出宗曲霉毒素A饮用水和肉制品微生物超标1.1、微生物定义

微生物是广泛存在于自然界形体微小、数量繁多、肉眼看不见需借助显微镜放大数百倍、上千倍甚至数万倍能观察到的最低等微小生物统称。1.2、微生物分类

细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体，支原体，衣原体，螺旋体。微生物微生物微生物微生物微生物HM-SMP-QA-023《洁净室标准管理程序》菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。细菌按照其基本形态：球菌，杆菌，螺旋菌。细菌结构革兰氏染色

革兰氏染色细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要有肽聚糖层的厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不容性复合物，乙醇能使它溶解，但在革兰氏阳性细胞中，乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔径变小，由于复合物分子太大，不能通过细胞壁故保持紫色。在革兰氏阴性细胞中，乙醇处理破坏了细胞壁外膜，损伤肽聚糖层，于是被乙醇溶解的复合物从细胞中渗漏出来，当用染色液复染时，显现红色。革兰氏阴性细菌细胞壁外膜的基本成分是脂多糖（LipopolysaccharideLPS）,它有类脂A，核心多糖，O-特异多糖组成。LPS是内毒素物质的基础。内毒素特点：1.耐热性强（150℃，数小时也不会裂解）2.可过滤性（能被活性炭，硅藻土滤器吸附）3.不挥发性（注射用水制备中蒸馏）细胞膜：对物质选择和吸收细胞质：细菌细胞的基础物质拟核、核糖体……特殊结构：鞭毛，荚膜，芽孢。芽孢：有些细菌生长到一定时期时，繁殖速度下降，菌体的细胞原生质浓缩，在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的孢子，对不良环境具有较强抗性的休眠体，称为芽孢。能否形成孢子受其遗传因素的制约，也需要一定的环境条件，多数是在营养缺乏，温度较高，或代谢产物积累等不良条件下形成。真菌一般比细菌大几倍或几十倍，分为单细胞真菌（酵母菌）和多细胞真菌（霉菌）。温暖和潮湿的环境霉菌容易滋生，需特别注意：洁净区洗衣机，水池等。1.空气污染：空气是微生物污染的携带者，微生物通常依附于空气中的非活性粒子，如尘埃，皮肤，水滴，侵袭产品，而成为重要污染源。2.水污染：微生物不能在纯水中生长，但是所有的各类水，不管怎样处理，总会含有一定量的有机物和盐类。可溶性物质被微生物利用，作为它们生长的源泉。3.原材料污染：非无菌原料微生物：

需氧菌：＜1000cfu/g

霉菌和酵母菌：＜100cfu/g

控制菌：*。4.人员污染：4.1洁净区人员更衣规范E:\高清无菌更衣.avi高清无菌更衣.aviGMP第三十四条：任何进入生产区的人员均应当按照规定更衣。工作服的选材、式样及穿戴方式应当于所从事的工作和空气洁净度级别要求相适应。D级洁净区：应当将头发、胡须等相关部位遮盖。应当穿合适的工作服和鞋子或鞋套。应当采取适当措施，以避免带入洁净区外的污染物。C级洁净区：应当将头发、胡须等相关部位遮盖，应当戴口罩。应当穿手腕处可收紧的连体服或衣裤分开的工作服，并穿适当的鞋子或鞋套。工作服应当不脱落纤维或微粒。A/B级洁净区：应当用头罩将所有头发以及胡须等相关部位全部遮盖，头罩应当塞进衣领内，应当戴口罩以防散发飞沫，必要时戴防护目镜。应当穿经灭菌且无颗粒物散发的橡胶或塑料手套，穿经灭菌或消毒的鞋套，裤腿应当塞进脚套内，袖口应当塞进手套内。工作服应为灭菌的连体工作服，不脱落纤维或微粒，并能滞留身体散发的微粒。洁净服使用及管理：清洗过的衣服，在使用过程中的一般原则为按照清洗日期，先洗先用；新的洁净服应按照尺码及编号进行分类，袖口，脚口，发现破洞，碳纤维勾出必须报废。4.1人员行为人是洁净室最大的污染源，有其带来的污染占洁净室污染的90%左右。

根据有关文献报道：一般男性每人每分钟像周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上；穿衣服时，每人静态时的发菌量为10-300个/min，行走时发菌量为900-2500个/min，咳嗽一次发菌量为70-700个/min,喷嚏一次发菌量为400-600个/min.

人体部位细菌数量手部100-1000/cm^2前额1000-100000/cm^2头皮10×10^5/cm^2腋窝10×10^6/g鼻腔分泌物10×10^6/g唾液10×10^8/g粪便71×10^9/g

301.头发和皮肤每分钟人类皮肤要散发10000个微生物，一粒糖可以装载4亿个微生物，可以设想人的衣服，头发及双手可以容纳多少微生物？2.水滴

既有尘粒污染，也有微生物污染。3.衣着棉绒，纤维和微粒及鞋子引入。4.化妆品和首饰发胶，眼影膏，粉底等是极大的微生物污染源，耳环，戒指，项链手链传播微生物污染。5.未按照SOP执行所引起的污染315.设施污染

设施很少是微生物固有的来源。设施设计缺陷，结构材料不良，不正确的操作能够对污染水平造成明显的影响。一些设备很难清洗，微生物会在污染物容易聚集的地方生存并繁殖。32二.洁净区清洁和消毒消毒剂按照杀灭微生物水平（国内）

低效消毒剂（可杀灭细菌繁殖体和亲脂性病毒，对真菌有一定的作用）中效消毒剂（可杀灭细菌芽孢以外的微生物）

高效消毒剂（可杀灭一切微生物，包括细菌芽孢）灭菌剂和消毒剂（国外）

灭菌剂：可杀灭一切微生物，等同于高效消毒剂。

消毒剂：除灭菌剂外的消毒产品。（通用消毒剂，医院消毒剂，有限作用消毒剂）33二.洁净区清洁和消毒低效消毒剂（双胍类和季铵盐类消毒剂）阳离子表面活性剂，具有杀菌和去污作用，非关键物品清洁和消毒，将其溶于乙醇中，可增强杀菌效果，可用于皮肤消毒。改变细胞膜的通透性，将他们与其他消毒剂复配，提高杀菌效果和杀菌速度。34二.洁净区清洁和消毒中效消毒剂（酚类和醇类消毒剂）75%乙醇和70%异丙醇。凝固蛋白质，导致病原体死亡；复合醇类消毒剂，多用于手部消毒。酚类消毒剂苯酚，甲酚，卤化酚及酚的衍生物。甲酚皂溶液，又称来苏尔，其主要成分为甲基苯酚，国外制药行业应用比较广泛的为苯酚的衍生物，主要成分对叔戊基苯酚和邻笨基苯酚。以这两种苯酚衍生物为消毒剂的产品，在酸性和碱性条件下轮换，确实有防止有微生物耐药性产生的效果。35二.洁净区清洁和消毒高效消毒剂（过氧化物消毒剂和臭氧）主要是极强的氧化能力，过氧化氢，过氧乙酸，二氧化氯和臭氧等。消毒后在物体表面不残留毒性，但是一般这类物质不稳定，特殊处理或添加其他成分来保证其稳定性。36作用时间二.洁净区清洁和消毒第一：清洁表面清洁是非常重要的，它能够通过去除污垢（有机物）的方式以避免消毒剂失效。第二：消毒将消毒剂作用于目标表面，（一、拖洗法和擦拭法；二、喷洒和喷雾法）第三：清除残留清楚残留在实际运用中容易被忽视，但是这一步骤对于保证消毒效果和避免再次污染很关键。37三、环境监测..\洁净室标准管理程序HM-SMP-QA-023-03(1).doc38四、微生