标准解读

《GB/T 19915.5-2005 猪链球菌2型多重PCR检测方法》是一项由中国发布的国家标准，旨在为猪链球菌2型的检测提供一种快速、灵敏且特异的方法。该标准详细规定了利用多重聚合酶链反应（Multiplex Polymerase Chain Reaction, 多重PCR）技术来同时检测猪样本中是否存在猪链球菌2型及其特定基因序列的程序和要求。以下是该标准的主要内容概览：

标准适用范围

本标准适用于养猪业、兽医诊断实验室及相关的科研机构，在对猪或其相关样本（如血液、组织、分泌物等）进行猪链球菌2型感染筛查和诊断时作为参考依据。

检测原理

多重PCR技术基于传统PCR，能够在同一反应体系中同时扩增多个目标DNA片段。通过设计针对猪链球菌2型特异性基因序列的引物，实现对目标病原体的定性和定量分析。

样本采集与处理

标准详细说明了样本的正确采集方法、保存条件以及预处理步骤，确保样本质量满足检测要求，避免污染和降解，从而提高检测准确性。

PCR反应体系与条件

规定了多重PCR反应所需的各种组分（如DNA模板、引物、缓冲液、酶等）的比例和浓度，以及优化后的循环参数（包括退火温度、延伸时间和循环次数等），以确保高效、特异的扩增效果。

阳性、阴性对照设置

强调在每次实验中必须设立阳性对照（已知含有猪链球菌2型DNA的样本）和阴性对照（无病原体的样本或纯水），用以验证实验的有效性和排除假阳性、假阴性结果。

结果判定与报告

描述了如何根据电泳图谱或荧光信号判断检测结果，明确了阳性和阴性结果的判定标准，并要求详细记录实验过程和结果，以供审核和追踪。

质量控制

提出了实施该检测方法时的质量控制措施，包括实验室内质控、仪器校准、操作人员培训等方面的要求，以保证检测结果的可靠性和重复性。

安全性注意事项

提醒实验操作人员遵循生物安全规范，特别是在处理潜在感染性样本时，采取必要的防护措施，防止病原体扩散和人员感染。

该标准的实施，为猪链球菌2型的快速诊断提供了科学依据和技术支持，有助于及时发现并控制猪链球菌疫情，保障养殖业的健康发展和公共卫生安全。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2005-09-27 颁布
  • 2005-11-01 实施
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GB/T 19915.5-2005猪链球菌2型多重PCR检测方法_第1页
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ICS07.100.30C53中华人民共和国国家标准GB/T：19915.5—2005猪链球菌2型多重PCR检测方法ProtocolofmultiplexPCRidentificationofSirepiococcussuistype22005-09-27发布2005-11-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会

中华人民共和国国家标准猪链球菌2型多重PCR检测方法GB/T19915.5—2005中中国标准出版社出版发行北京西城区复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：63787337、637874472005年12月第一版2005年12月电子版制作书号：155066·1-26804版权专有侵权必究举报电话：（010)68533533

GB/T19915.5-2005前本标准的附录A为规范性附录本标准由国家标准化管理委员会提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口本标准由中国检验检疫科学研究院负责起草。本标准主要起草人：韩雪清、林祥梅、吴绍强、刘建、贾广乐、梅琳、陈国强、张敬友、姜淼、唐泰山。本标准为首次发和

GB/T19915.5—2005猪链球菌2型多重PCR检测方法范围本标准规定了猪链球菌2型多重PCR检测的操作方法。本标准适用于检测生猪执子、增菌培养物、疑似病料及猪组织样品(猪淋巴结、扁桃体、肉品等)中的褚源链球菌及猪链球菌2型。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勒误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义下列术语和定义适用于本标准猪链球菌2型Srrepiococcussuistype2猪链球菌是属于链球菌属的一种细菌,根据其英膜多糖抗原的差异,可分为1～34及1/2共35个血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型,不仅对猪致病性很强，而且可以感染特定的人群,是一种重要的人畜共患病病原菌。3.2多重聚合酶链式反应（多重PCR）multiplexpolymerasechainreaction多重PCR又称多重引物PCR或复合PCR.它是在同一PCR反应体系中加上两对以上引物,同时扩增出多个核酸片断的PCR反应。4缩略语本标准采用下列缩略语：PCR聚合酶链式反应DNA脱氧核糖核酸dTP脱氧核酸三磷酸bp碱培对试剂和材料除另有规定外.所用生化试剂均为分析纯.水为符合GB/T6682—1992的灭菌双蒸水或超纯水.5.1猪链球菌2型多重PCR反应混合物PCR缓冲液（含Mgt），2PL:dNTP.1.6L:引物1.0.6PL:引物2,0.6L；引物3.0.6L引物4.0.6L;菌液1.5L:酶0.2L;水12.3L；总体积20L。5.2TaqDNA聚合酶5.310×P

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