标准解读
《GB/T 19495.5-2004转基因产品检测核酸定量PCR检测方法》是中国关于转基因产品检测的一项国家推荐性标准,重点介绍了使用聚合酶链反应(PCR)技术对转基因产品中特定核酸序列进行定量检测的方法。以下是该标准的主要内容概述:
标准范围
本标准规定了利用实时荧光定量PCR技术检测转基因产品中目标DNA或RNA片段的浓度或拷贝数的方法。适用于转基因植物、微生物及其制品中转基因成分的定性和定量分析。
术语和定义
- 实时荧光定量PCR:通过在PCR扩增过程中实时监测荧光信号强度变化,实现对模板DNA初始量的定量分析。
- 标准曲线法:利用已知浓度的标准品建立荧光信号与模板浓度之间的关系曲线,用于未知样品的定量分析。
原理
该方法基于TaqMan探针或SYBR Green染料技术,在PCR扩增时,随着靶标序列的增加,荧光信号强度随之增强,通过监测这一过程,可以计算出样本中目标核酸的初始含量。
试剂与材料
详细列出了进行PCR实验所需的各种试剂、引物、探针的选择原则及质量要求,以及标准品的制备方法。
仪器设备
包括实时荧光定量PCR仪、离心机、超净工作台等实验设备的基本要求和操作规范。
检测步骤
- 样品处理:详细说明了从转基因产品中提取DNA或RNA的步骤和注意事项。
- PCR反应体系配制:介绍如何根据实验需求准备反应混合液。
- PCR程序设置:包括预变性、循环变性、退火、延伸等各阶段的温度和时间设定。
- 数据分析:解释如何根据标准曲线对实验结果进行定量分析。
精密度与准确度
提供了重复性限和再现性限的计算方法,以及评价检测方法精密度和准确度的准则。
检出限与定量限
定义了检出限(LOD)和定量限(LOQ),明确了能可靠检测和定量的最低核酸浓度。
试验报告
规定了检测报告应包含的信息,如样品信息、检测方法、结果数据、结论及必要的备注等。
该标准为转基因产品中特定核酸序列的定量检测提供了统一的技术指导和操作流程,确保了检测结果的可比性和准确性,对于转基因产品的安全性评估、市场监管及贸易具有重要意义。
如需获取更多详尽信息,请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。
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文档简介
ICS67.050B04中华人民共和国国家标准GB/T:19495.5-一2004转基因产品检测核酸定量PCR检测方法Detectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts-QuantitativePCRmethodsbasedonnucleicacid2004-04-13发布2004-04-13实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会
GB/T19495.5-2004三前言范围2规范性引用文件3术语、定义和缩略语·防污染措施45原理6试剂7主要仪器设备8检测…………结果分析与计算10结果表述…侧试报告附录A(规范性附录)转基因大豆GTS-40-3-2实时荧光PCR检测方法附录B(规范性附录)转基因玉米MON810实时荧光PCR检测方法10附录C(规范性附录)转基因玉米Br176实时荧光PCR检测方法附录D(规范性附录)转基因玉米Bul1实时荧光PCR检测方法工7附录E(规范性附录)转基因玉米GA21实时荧光PCR检测方法10附录F(规范性附录)转基因玉米T25实时荧光PCR检测方法附录G(规范性附录)转基因油菜RT73实时荧光PCR检测方法参考文献25
GB/T19495.5-2004GB/T19495《转基因产品检测》为系列标准:GB/T19495.1—2004转基因产品检测通用要求和定义:GB/T19495.2—2004转基因产品检测实验室技术要求:GB/T19495.3—2004转基因产品检测核酸提取纯化方法;-GB/T19495.4—2004转基因产品检测核酸定性PCR检测方法:-GB/T19495.5—2004转基因产品检测核酸定量PCR检测方法;-GB/T19495.6—2004转基因产品检测基因芯片检测方法;GB/T19495.7—2004转基因产品检测抽样和制样方法;GGB/T19495.8—2004转基因产品检测蛋白质检测方法。本部分的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E、附录F和附录G为规范性附录本部分由国家认证认可监督委员会提出并归口。本部分由中华人民共和国广东出入境检验检疫局和国家质检总局动植物检疫实验所负责起草,中华人民共和国江宁出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局和中国进出口商品检验技术研究所参加起草本部分主要起草人:草文、朱水芳、曹际娟、潘良文、陈红运、黄文胜、章桂明、徐宝梁、赵文军、董洁本部分系首次发布的国家标准。
GB/T19495.5—2004转基因产品检测核酸定量PCR检测方法范围GB/T19495的本部分规定了转基因产品中转基因成分核酸定量检测方法本部分的规范性附录规定了不同转基因品种和品系核酸定量检测方法。本部分规定了转基因成分绝对含量和相对含量的计算方法本部分适用于食品、饲料、种子及其环境材料中转基因成分的实时荧光PCR定量检测本部分也适用于转基因产品中转基因成分定性PCR检测阳性结果的确证检测。范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T19495的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勒误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。GB/T19495.1—2004转基因产品检测通用要求和定义GB/T19495.2—2004转基因产品检测实验室技术要求GB/T19495.3-2004转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T19495.4—2004转基因产品检测核酸定性PCR检测方法术语、定义和缩略语本部分采用下列术语、定义和缩略语3.1术语和定义GB/T19495.1确立的以及下列术语和定义适用于GB/T19495的本部分3.1.1检测低限Iimitofdetection.LOD在假阴性结果不超过5%的条件下,检测方法所能检测的最低浓度和含量3.1.2外源基因exogenousgene利用生物工程技术转入的其他生物基因,使该生物品种表现新的生物学性状3.1.3阳性标准物质positivereferencematerials由认可机构制备、有湖源性的并经检测证
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