病毒转基因技术原理概述

病毒转基因技术原理概述问题社会公众对健康需求的增加生命科学和医学研究的推动对转基因技术的安全和伦理关注持续增加。2021/3/102课程内容分为理论课与实践课转基因技术概述病毒转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用生物安全医学伦理问题表达外源基因的复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定DNA病毒RNA病毒杂合病毒2021/3/103第一章转基因技术概述

范雄林86-27-83650639xlfan@华中科技大学同济医学院病原生物学系研究生高水平课程——《病毒转基因技术原理》2021/3/104主要内容基因转移方式真核细胞的转基因技术外源基因表达读框的构建原理2021/3/1051.定义基因转移（genetransfer）:

自然发生转基因技术(transgenetechnology):

人工利用2021/3/1062.常见的基因转移方式转化(transformation)转导(transduction)转染(transfection)现象定义分类用途2021/3/107转化（transformation）现象:

肺炎链球菌的转化试验定义:分类和应用:自然转化:感受态,宿主菌种类人工转化:低温CaCl2、电穿孔2021/3/108小鼠的肺炎链球菌的转化试验2021/3/109转导(transduction)现象:“U”型管实验

定义:分类和应用:普遍性转导局限性转导2021/3/1010局限性转导2021/3/1011转染(transfection)现象:

感染(infection)、病毒感染定义:广义和狭义分类和应用:物理化学方法生物学方法(病毒载体)2021/3/1012

野生型病毒的自然感染、病毒载体转染和质粒经化学法介导的转染2021/3/10133.基因转移入真核细胞的方法基因转移入真核细胞的影响因素外源基因转移入真核细胞的类型和方法构建外源基因的基本要素

2021/3/1014转移入原核细胞的影响因素:限制-修饰系统质粒宿主范围和相容性同源重组与非同源重组基因转移入真核细胞的影响因素真核与原核细胞具有显著区别;外源基因要进入真核细胞，要突破三大障碍;理想的转基因技术方法2021/3/1015质粒型载体:物理方法化学方法外源基因转移入真核细胞的类型和方法传统的针头注射显微注射粒子轰击电穿孔流体动力学包裹微球超声磷酸钙法脂质体法DEAE-Dxtran法2021/3/1016常用的物理方法介导基因转移2021/3/1017外源基因转移入真核细胞的类型和方法病毒颗粒型载体(病毒介导的转基因技术)

假型病毒载体（复制缺陷性病毒载体）：具有感染性重组型病毒载体：具有感染性DNA病毒载体：AdV,AAV,HSV-1,etc.RNA病毒载体:HIV,etc.杂合型病毒载体

2021/3/10182021/3/1019不同类型转基因技术方法的优缺点比较2021/3/1020构建外源基因的基本要素

转录控制元件翻译控制元件病毒复制包装信号

2021/3/1021复习思考题影响外源基因进入真核细胞的因素。物理、化学和病毒载体转基因技术的优缺点比较