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实验四高等植物光合色素含量测定实

验

背

景K652=34.5实验目的掌握用分光光度计测定叶绿素含量的方法。实验原理

混合液中的两个或多各组分，只要它们的光谱吸收峰不互相重叠，仍然可以根据Lambert-Beer定律（A=kLC）求出各组分含量。Lambert定律：A=kL；Beer定律A=kC。叶绿素a、b在80%丙酮溶液中的Amax分别为663nm、645nm，由此得出：见推导过程Ca=12.7A663–2.69A645；Cb=22.9A645–4.68A663Ca+b=8.02A663+20.20A645实验仪器及药品实验材料：植物叶片A663=Ca.ka1+Cb.kb1A645=Cb.kb2+Ca.ka2分光光度计测出，故求二元一次方程组可得到此公式。k——比吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度(C)为1g/L(0.1%)，比色皿的直径(光径，L)为1cm时所测出的吸光度即为比吸收系数。故其单位为：ε——摩尔吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度(C)为1mol/L，比色皿的直径(光径，L)为1cm时所测出的吸光度即为摩尔吸收系数。故其单位为：由于k是一个常数，而A可以通过返回方法及步骤方法一：快速测定法由于叶绿素a、b在652nm处有共同吸收，k=34.5Lg-1.cm-1。可直接用便携式叶绿素测定仪测定植物叶片的叶绿素含量，最后浓度单位为mg/dm2方法二:分光光度计法色素提取：将上述植物叶片洗净并用滤纸吸干，准确称取已知Φ的叶圆片0.05g左右，加入少许CaCO3和石英砂及80%丙酮2ml，充分研磨，转入离心管中（离心机使用），再用5ml

80%丙酮洗研钵，转入离心管中，平衡，5000rpm离心10min，上清液定容至10ml备用。测定：以1cm比色皿分别测定A663、A645。使A控制在0.1~0.8之间。结果与讨论1、根据原理中计算出三类色素的浓度（mg/L）。

2、根据公式分别计算出各种植物叶片色素含量。思考题1、一般正常的植物叶片，Chla/Chlb=3/1，你所测定的结果符合此比例吗？为什么？2、两种测定方法含量有何不同？为什么？3、怎样把方法一中的叶绿素含量mg/dm2转换为方法二中的mg/gFW？怎样测定不同形态的植物叶片的叶面积？Chlcontent=

(mg.g-1FW)附1.叶面积的计算选取单位面积重量是一个常数的打印纸如A4或16K。一般A4打印纸为70~105GSM（g/m2）。用铅笔轻轻地沿着叶缘在A4纸上划线。用剪刀沿着叶缘剪下A4纸。称所剪下的A4纸的重量W(g)。计算：附2.高速冷冻离心机的使用方法温度调节1、插上电源插座2、按T接通电源3、按功能键调节温度上限4、按功能键调节温度下限5、按功能键显示目前温度4、按

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