标准解读
GB 15193.20-2003是一项中国国家标准,全称为《食品安全性评价程序和方法 第20部分:TK基因突变试验》。这项标准规定了在评估食品及其原料、食品添加剂、食品相关产品安全性时,如何进行TK(Thymidine Kinase,胸苷激酶)基因突变试验的具体方法和要求。TK基因突变试验是一种体外遗传毒性测试,用于检测受试物是否能引起哺乳动物细胞DNA的损伤,进而导致基因突变,是评价物质潜在致癌性的重要手段之一。
标准内容概览:
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范围:明确了该标准适用于食品及相关产品的TK基因突变试验,用以评估这些物质对哺乳动物细胞的遗传毒性潜力。
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规范性引用文件:列出了执行该试验所需遵循的其他相关标准和文件,确保试验方法的标准化和一致性。
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术语和定义:对试验中涉及的关键术语进行了明确界定,如TK基因、基因突变、体外试验系统等,以便读者准确理解。
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试验原理:简述了TK基因突变试验的基本科学原理,即通过检测受试物处理后细胞中TK基因的突变频率,来判断其是否有诱导基因突变的能力。
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试验材料:详细规定了试验所需的细胞系、培养基、受试物处理条件及对照组设置等,确保实验的可重复性和准确性。
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试验方法:
- 预试验:确定受试物的最大无毒作用浓度。
- 正式试验:包括试验设计、细胞处理、细胞培养、突变检出及结果分析等步骤,具体描述了操作流程和技术要点。
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结果判定与评价:提供了判定受试物遗传毒性(阳性、阴性)的标准,以及如何根据试验数据进行综合评价的指导原则。
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试验报告:规定了试验报告应包含的内容,如试验目的、方法、结果、结论及必要的讨论,确保试验信息的完整传递。
注意事项:
- 试验过程中需严格控制实验条件,保证数据的可靠性和准确性。
- 结果解释需谨慎,考虑试验的局限性和可能的干扰因素。
- 本标准是食品安全性评价体系的一部分,与其他毒性测试结合使用,共同评估物质的安全性。
该标准为科研人员、食品安全监管机构及企业提供了一套统一、科学的方法,用以评估食品及相关产品中可能存在的遗传毒性风险,是保障公众健康安全的重要技术支撑。
如需获取更多详尽信息,请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。
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- 被代替
- 已被新标准代替
- 2003-09-24 颁布
- 2004-05-01 实施
文档简介
ICS07.100C53中华人民共和国国家标准GB15193.20—2003TK基因突变试验TKgenemutationtest2003-09-24发布2004-05-01实施中华人民共和国卫生部发布中国国家标准化管理委员会
GB15193.20—2003本标准全文强制。本标准参考美国FDA营养素补充剂与食品安全中心食品添加剂安全办公室发布的“食品成分安全评价毒理学原则2000年版红皮书(2001年9月发布):IV.C.1.c.小鼠淋巴瘤胸腺喀啶激酶基因突变试验(IV.C.1.c,MouselymphomaThymidineKinaseGeneMutationAssay)”。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口.本标准起草单位:四川大学华西公共卫生学院、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所本标准主要起草人:张立实、张建清、帅培强、王怡净。本标准首次发布。
GB15193.20—2003TK基因突变试验范围本标准规定了体外哺乳类细胞TK位点基因突变试验的基本技术要求与方法本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学生物和物理因素的遗传毒性,检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。2原理TK基因突变试验的检测终点是胸苷激酶(thymidinekinase,TK)基因的突变。在人类,TK基因定位于17号染色体长臂远端;在小鼠则定位于11号染色体。故TK基因的突变属于常染色体基因TK基因的产物胸苷激酶在体内催化从脱氧胸苷(TdR)生成胸苔酸(TMP)的反应。在正常情况下,此反应并非生命所必需,原因是体内的「MP主要来自于脱氧尿喀啶核苷酸(dUMP).即由胸苷酸合成酶催化的dUMP甲基化反应生成TMP。但如在细胞培养物中加入胸苷类似物(如三氟胸苷,即TFT一trifluorothymidine),则TFT在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸,进而掺入DNA,造成致死性突变,故细胞不能存活。若TK基因发生突变,导致胸苷激酶缺陷,则TFT不能磷酸化,亦不能掺入DNA,故细胞在含有TFT的培养基中能够生长,即表现出对TFT的抗性。根据突变集落形成数,计算突变频率,以判定受试物的致突变性。3试剂与材料3.1细胞:15178Y「k+-3.7.2C小鼠淋巴瘤细胞。为清除自发突变的k--基因型细胞,在正式实验前,应使用含3g/mL胸甘,5g/mL次黄骠岭,0.1Pg/mL氮甲碟岭和7.5g/ml甘氮酸的THMG培养基中处理24h,离心、洗涤后在不含氨甲碟岭的THMG培养基中培养3天.3.2试剂:PBS磷酸盐缓冲液,三氟胸香(trifluorothymidine),次黄原吟(hypoxanthine).甘氨酸(gly-cine),氨甲碟岭(methotrexate),胸腺喀啶核苷(thymidine),阳性对照物(MMS,MMC,环磷酰胺等)。试验设计-般应进行细胞毒性预试验,根据预试验结果,在相对存活率(relativesurvival,RS)为阴性对照组的20%~80%范围内设3个~4个剂量(浓度)水平。每次试验均需设阴性(双蒸水)对照.通常亦需设阳性对照。阳性对照通常使用MMS、EMS、MMC、CP(环磷酰胺)等。如使用非水溶剂,则亦需设溶剂对照。5操作步骠5.1培养液和培养条件:含10%马血清和适量抗菌素的RPMI1640培养液(96孔板培养时使用含20%马血清的RPMI1640培养液).5%二氧化碳、37℃、饱和湿度条件下作常规悬浮培养。5.2处理:取生长良好的细胞.调整密度为5×10°/mL,按1%体积加入受试物.3
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