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文档简介

会计学1DNA的纯化与回收实验原理

首先利用琼脂糖凝胶电泳DNA片段，分离目的条带DNA，然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块，利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段。

试剂盒的胶回收柱采用特殊硅基质材料，具有在高盐、低pH下吸附DNA，低盐、高pH下释放DNA的性质。配备设计独特的离心吸附柱式结构，使用常规台式高速离心机，可以高效回收核酸片段。第1页/共8页实验原理第2页/共8页实验试剂、材料、仪器溶液A（

Buffer）：溶解胶块、增加洗脱柱对核酸的结合活性1溶液B（异丙醇）：增强DNA和柱子的吸附力2溶液C（

Washsolution）:洗掉柱子里除核酸以外的杂质3溶液D（TE）:溶解DNA，把DNA从柱子上洗脱下来45自备材料：待分离的DNA、水浴锅、小型高速离心机、电泳仪、电泳槽第3页/共8页实验步骤在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块，尽可能除去多余的琼脂糖．放入1.5ml离心管中，称重。1根据胶块的质量和浓度，按每100mg琼脂糖胶加入300μl

的比例加入溶液A（本实验加400ul）。2将离心管置55℃-60℃水浴10分钟，使琼脂糖块完全溶化，期间振荡助溶2-3次。3加入50ul的溶液B，振荡混匀。（若混匀后溶液变成粉红色，则需加大溶液B的量至变到橙黄色或无色）4将全部溶液置于离心柱中，静置2分钟，12000rmp离心30s，若一次加不完可分两次离心。5第4页/共8页实验步骤倒掉收集管中的液体．加入500ul溶液C于离心柱中，12000rmp离心30s。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。6重复步骤6一次。712000rmp再离心1min，甩干剩余液体以除去残余酒精。将离心柱置于新的离心管中，室温静置5min，使乙醇挥发殆尽。8在吸附膜中加入20ul，50℃预热的溶液D,室温静置2min。12000rmp离心2min，将所得的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。9琼脂糖凝胶电泳检测回收产物。10第5页/共8页注意事项切胶时应快速操作，在紫外灯下时间长容易伤害到眼睛；溴化乙锭染色后的DNA易受紫外光破坏，故尽量放置于暗室，切带时应使用长波长紫外灯，切胶时间尽量短。胶块一定要充分融化，否则将会严重影响

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