金魔芋炭疽病生物学特性研究

金魔芋炭疽病生物学特性研究姓名：和丽舒指导教师：余磊农学院园艺（1）班学号：201022010142目录1234前言材料与方法结果分析讨论第一章前言魔芋——又名蒟蒻，是天南星目，天南星科，魔芋属的一种生长在海拔250—2500米的山间多年生草本植物。由于魔芋含有十六种氨基酸，十种矿物质微量元素和丰富的食物纤维，对防治糖尿病,高血压有特效；魔芋低热、低脂、低糖，对预防和治疗结肠癌、乳腺癌、肥胖症的人群可以说是一种上等的既饱口福、又治病健体的食品，还可以防治多种肠胃消化系统的多种常见慢性疾病，所以魔芋具有十分高的药用价值。金魔芋——新发现的一个特有珠芽魔芋类品种，其葡甘聚糖含量远高于花魔芋、白魔芋及其它珠芽类魔芋品种如红魔芋等，具有很好的加工和推广价值。金魔芋第一章前言第一章前言炭疽病——发病初期，在叶片上呈现圆形、椭圆形红褐色小斑点，后期扩展成深褐色圆形病斑，中央则由灰褐色转为灰白色，最后病斑转为黑褐色，后期病斑穿孔，病斑多时融合成片导致叶片干枯，病叶易脱落。第二章材料与方法2.1金魔芋炭疽病害植株来源

染病的金魔芋植株叶片来自云南省德宏州，经采集后带回云南省昆明学院农学院实验室中冷藏保存，待用。2.2病原菌的分离和纯化在发病的魔芋叶片病健交界处切取3cm×3cm的组织块，经75%乙醇处理1min后，用0.1%的升汞表面消毒3min，在灭菌水中漂洗三次，每次漂洗时间为3min，最后除去组织表面多余水分，置于马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）平板上，于30℃培养72h后挑取菌落边缘菌丝进行纯化。

第二章材料与方法第二章材料与方法2.3致病性测定PSA上培养5d的菌落切成长10mm，宽5mm的菌块，选健康金魔芋植株的叶片，用70%的酒精进行表明消毒后，采用针刺法进行接种。在叶片上接种带菌PSA培养基，采用湿润的脱脂棉保湿，对照叶片滴灭菌水，每处理三次重复。接种的叶片套袋保湿，并将植株置于25℃~30℃的温室中，每隔2d观察发病情况。2.4病原菌形态学特征观察

取出纯化后的菌种，在无菌操作台中用肉眼观察、描述菌落形态。在培养基上挑取病原菌菌丝做徒手切片，在光学显微镜下观察分生孢子及其分生孢子器的形态特征，并测量其大小［4］。根据病原菌的产孢特征及其在PSA上的形态特征，参照文献《真菌鉴定手册》［5］进行病菌鉴定。第二章材料与方法2.5病原菌生物学特性研究

2.5.1不同培养基对病原菌生长的影响

供试培养基为马铃薯蔗糖培养基、水琼脂培养基、胡萝卜培养基、燕麦片培养基、番茄培养基，取上述培养的菌落，边缘用直径为5mm的打孔器打取边缘长势一致的菌落接种在不同的PSA平板上，每个处理设置4各重复，30℃下黑暗培养，4d后用十字交叉法测量菌落的直径并观察记录菌落的生长势

PSA培养基——用天平称取洗净的去皮马铃薯20g，切碎后放入锅中煮沸30min，将过滤后的溶液定容至100ml，加入2g琼脂，2g蔗糖，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入灭菌锅121℃，灭菌40min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。

水琼脂培养基——在100ml水中加入2g琼脂，搅拌均匀后移入锥形瓶中，用报纸包好瓶口，再用橡皮筋扎好。放入灭菌锅中121℃，灭菌40min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。第二章材料与方法

胡萝卜培养基——用天平秤取洗净的胡萝卜20g，切碎后放入锅中煮沸30min，将过滤后的溶液定容至100ml，加入2g琼脂，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入灭菌锅121℃，灭菌40min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。燕麦培养基——天平秤取3g燕麦，放入锅中加水煮沸30min，将其过滤后定容至100ml，加入2g琼脂，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入灭菌锅121℃，灭菌40min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。番茄培养基——番茄捣碎后取其汁液20g，加水定容至100ml，加入琼脂2g，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入灭菌锅121℃，灭菌40min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。第二章材料与方法2.5.2不同pH对病原菌生长的影响以真菌的生理培养基为基础培养基，加入HCL（1mol/L）和NaOH（1mol/L）将培养基分别调成1、2、3、4、5、6、7、8、9、10不同的ph值［7］，取上述培养的菌落，边缘用直径为5mm的打孔器打取边缘长势一致的菌落接种在不同的PSA平板上，每处理重复四次，30℃下黑暗培养，4d后用十字交叉法测量菌落直径并观察记录菌落的生长势。第三章结果分析3.1病原菌的分离结果与形态特征观察通过分离得到的魔芋炭疽菌在PSA平板上30℃培养5d的菌落直径为4cm--5.5cm，菌落为圆形或近圆形，边缘整齐，气生菌丝初为白色，后渐变为灰白色或深灰色，培养7d后靠近菌落中央产生轮纹状排列的分生孢子盘，分生孢子单胞，无色，镰刀形［8］，产孢量较多，分生孢子大小（18-23）μm×（3.3-4）μm，平均为21.878μm×3.427μm。分生孢子由侧生分生孢子梗产生，厚垣孢子球形，表面不光滑，多个在菌丝中间串生;分生孢子萌发的芽管深褐色，有隔，棍棒状，边缘整齐。根据上述病原菌的培养性状和形态学特征，参照真菌分类相关文献《真菌鉴定手册》的描述，初步鉴定该病原菌为炭疽菌。第三章结果分析光学显微镜下炭疽菌产孢结构及其孢子，初步鉴定该病原菌为黑线炭疽菌(Colletotrichumdematium）第三章结果分析长（μm）宽（μm）23.8663.64620.4773.11519.5813.55119.0383.39622.9633.47420.7093.35521.8783.451平均值：21.216平均值：3.427分生孢子大小测定值第三章结果分析3.2致病性测定结果

将炭疽菌对魔芋叶片进行针刺回接，7d后针孔周围开始出现褐色圆斑，并逐渐往外扩散，15d后病斑症状加重，呈不断扩大趋势，发病率达到100%，而对照组除了针刺处有黄白色愈合伤疤，其它正常，发病率为零。炭疽菌致病性测定15d发病观察第三章结果分析3.3病原菌的生物学特性

3.3.1不同培养基对病原菌生长的影响

测定结果表明，菌落在PSA培养基上生长最好，30℃培养4d的菌落直径为mm，菌丝生长迅速。其次是番茄培养基。在胡萝卜和燕麦培养基中长势稀薄，而在水琼脂培养基上则不能生长

燕麦培养基番茄培养基第三章结果分析水琼脂培养基胡萝卜培养基PSA培养基第三章结果分析培养基菌落直径／ｍｍ生长势重复1重复2重复3重复4平均值ＰＳＡ7680728879++++番茄5358565054.25+++胡萝卜3433212929.25++燕麦3630402733.25++水琼脂－－－－－－+代表菌落的生长势，+越多表明生长势越好不同培养基对病菌生长情况测定第三章结果分析

3.3.2不同PH对病原菌生长的影响

魔芋炭疽病病原菌对ph的反应以中性生长最好，适宜的ph值为5~8，以ph=7为最适，ph低于3，高于10时，菌丝不生长。

不同pH对病原菌菌丝生长情况ph=1ph=2第三章结果分析ph=3ph=4ph=5ph=6第三章结果分析ph=7ph=8ph=9ph=10第三章结果分析PDA培养基ｐH菌落平均直径／ｍｍ重复1重复2重复3重复4平均直径－－－－－1－－－－－26156625859.253394238333844538446046.75554584052516695455646174860655657.2581634273628.259－－－－－不同PH对病原菌菌丝生长情况测定第四章结论与讨论初步鉴定该病原菌为黑线炭疽菌(Colletotrichumdematium）魔芋炭疽菌在所供试的PSA培养基、番茄培养基、燕麦培养基、胡萝卜培养基上均能生长，而在水琼脂培养基上则不能生长。对生长环境的测试结果显示，该菌能够在ph3.0～9.0的范围内生长，而ph7.0最适合生长，在弱酸弱碱的环境下炭疽菌均能生长，不同ph值对病原菌生长影响实验结果说明，炭疽菌对土壤酸碱度要求并不高，由此可