临检血液概述采血抗凝剂

临检血液概述采血抗凝剂第一页，共五十七页，2022年，8月28日第一节概述血液生理概要标本采集、送检、保存与处理

标本抗凝

血涂片的制备血细胞染色方法血细胞显微镜计数法第二页，共五十七页，2022年，8月28日教学目标掌握：血液标本采集的方法及评价，抗凝剂的选择应用，血涂片制备方法和染色原理，血细胞显微镜计数方法。熟悉：血液生理概述和标本保存。第三页，共五十七页，2022年，8月28日一血液生理概要1.血液的组成血浆：血液加抗凝剂后分离出来的液体部分。血清：血液离休后自然凝固分离出来的液体。45%血尘55%8－9%91－92%第四页，共五十七页，2022年，8月28日2.血液的理化性质血量：正常人血液量70±10ml/kg体重，成人4~5L，占体重的6%~8%。颜色：动脉血鲜红色HbO2↑静脉血暗红色Hbred↑贫血病人红色变浅CO、氰化物中毒樱红色红细胞悬浮稳定性唾液酸根形成Zeta电位

第五页，共五十七页，2022年，8月28日黏滞性血细胞比容（红细胞数量）血浆粘度（血浆蛋白浓度）比密血液比密与红细胞相关男1.055~1.063女1.051~1.060血浆比密与血浆蛋白相关1.025~1.030渗透压血浆渗透压290~310mOsm/（kg∙H2O）PH7.35~7.45凝固性凝血因子激活

第六页，共五十七页，2022年，8月28日3.血液的功能运输功能协调功能维持内环境的稳定防御功能第七页，共五十七页，2022年，8月28日二、血标本的采集̖̖、送检、保存与处理（一）血标本的采集

采血静脉采血毛细血管采血普通采血法真空采血法第八页，共五十七页，2022年，8月28日

静脉采血法(venipunctureforbloodcollection)凡需血量较多的检查＞0.5ml如：ESR、Hct、凝血因子的测定等。[部位]浅表静脉均可,常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝部，幼儿可用颈外静脉。[体位]坐位或卧位[捆扎时间]＜1min第九页，共五十七页，2022年，8月28日第十页，共五十七页，2022年，8月28日二、静脉采血法

【采血方法】

准备→选择静脉→消毒→扎压脉带→穿刺、松压脉带→抽血→拔针止血→注入试管。如以下视频所示第十一页，共五十七页，2022年，8月28日静脉采血法第十二页，共五十七页，2022年，8月28日普通采血法1.避免溶血,器具干燥,避免气泡2.先拔针头,再缓缓注入试管3.与抗凝剂混匀时轻轻颠倒4.严格消毒5.抽血时只能外抽不能内推第十三页，共五十七页，2022年，8月28日真空采血法（40年代，美国BD公司）

套筒式和头皮静脉式两种优点：血样无需容器之间的转移，减少溶血现象，保持血液标本的完整性，使检验结果更加准确，也有利于防止医院内血源性传染病的交叉感染和环境保护。缺点：真空采血管价格较高注意:采血后,先拔下刺塞针端的采血试管,后拔穿刺针。第十四页，共五十七页，2022年，8月28日

I.采血针2008-10-21第十五页，共五十七页，2022年，8月28日

II.持针器2008-10-212008-10-21第十六页，共五十七页，2022年，8月28日

III.真空采血管2008-10-21第十七页，共五十七页，2022年，8月28日第十八页，共五十七页，2022年，8月28日

血量＜0.1ml的检验项目：RBC计数、WBC计数、BPC计数、Hb测定等毛细血管采血法Skinpunctureforbloodcollection第十九页，共五十七页，2022年，8月28日[采血部位]WHO推荐采取毛细血管血以左手中指或无名指指尖内侧为宜1手指采血：

优点：方便→获较多血量→检查结果比较恒定缺点：与静脉血仍在某些差异。2耳垂采血：

优点：痛感轻→方便→适用于反复采集

缺点：血循环差→受气温影响大检查结果不恒定RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特别是冬季。第二十页，共五十七页，2022年，8月28日3、其他部位：拇指、拇趾或足底外侧缘采血——半岁以下婴幼儿皮肤完整处——严重烧伤者[采血针]三棱针或专用的“采血针”为好，使用前者应高压灭菌，一人一针。第二十一页，共五十七页，2022年，8月28日2008-10-21第二十二页，共五十七页，2022年，8月28日第二十三页，共五十七页，2022年，8月28日[注意事项]1、采血部位皮肤完整。2、无菌技术操作：防采血部位感染，一人一针防肝炎、艾滋病。3、采血针刺入皮肤应深浅适中。4、多项检查时，采血次序为：BPC计数→RBC计数、Hb测定→WBC计数与分类。5、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入堵塞仪器。第二十四页，共五十七页，2022年，8月28日两种采血方法的优缺点比较毛细血管采血静脉采血缺点限制了重复实验和追加实验，标本量少，局部炎症可得假结果，组织液可混入不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响有形成分的形态优点价廉、快速、操作简便，标本可直接测定标本代表性大，无组织液影响，适于临床研究，可重复实验和追加其他实验第二十五页，共五十七页，2022年，8月28日

1.血标本运输2.血标本保存3.检验后标本处理

（二）血液标本运输、保存与处理第二十六页，共五十七页，2022年，8月28日

三、血标本的抗凝

1、枸橼酸钠（柠檬酸钠）a.抗凝原理：螯合钙离子使用方法配成109mmol/L的浓度和血液1：9配成105mmol/L的浓度和血液1：4

化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）c.适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）d.不适用于：血细胞计数第二十七页，共五十七页，2022年，8月28日2.乙二胺四乙酸（EDTA）盐a.抗凝原理：螯合钙离子b.使用方法：15g/L浓度EDTA和血液1：10适用范围：对血细胞形态影响小,适合血常规检查、Hct不适用于：影响血小板聚集和凝血因子功能,不宜凝血因子检查和血小板功能试验。第二十八页，共五十七页，2022年，8月28日3.肝素（含硫酸基团的粘多糖）抗凝原理：低浓度时抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高浓度时阻断凝血酶和纤维蛋白的反应。

b.适用方法：1g/L浓度的肝素钠与血液1：10第二十九页，共五十七页，2022年，8月28日优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）和多种生化分析e.不适用于：

WBC和BPC计数、血涂片检查、凝血功能检验。第三十页，共五十七页，2022年，8月28日4.草酸钠（乙二酸的钠盐）a.抗凝原理：草酸钙沉淀b.使用方法：草酸钠0.1mol/L和血液1：9c.适用范围：止血学检验。d.不适用于：对凝血因子V保护功能差，影响PT测定；沉淀物影响自动凝血仪的使用。第三十一页，共五十七页，2022年，8月28日5.双草酸盐抗凝剂

a.抗凝原理：草酸钙沉淀使用方法：草酸钾0.8g,草酸铵1.2g（100ml）与血液1：10（80°C以下烘干）适用范围：红细胞检验（红细胞比积、计数）

d.不适于:血小板计数和白细胞分类计数,电解质测定第三十二页，共五十七页，2022年，8月28日

物理方法抗凝

脱纤维蛋白：

将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，使血液不能凝固。适用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。第三十三页，共五十七页，2022年，8月28日小结血液是由血细胞和血浆组成的红色、粘稠、不透明、带腥味的混悬液。凡需血液量较少的检验项目，常用皮肤采血法，通常采手指血。采血时要注意采血部位要无病变，要擦去第一滴血，不能用力挤压。凡需血液量较多的检验项目，要用静脉采血法，其采血部位常用肘前静脉。如需要抗凝抗凝血标本时，则需要根据检验项目的要求，采用枸橼酸钠、乙二胺四乙酸盐和肝素等抗凝剂来阻止血液凝固。第三十四页，共五十七页，2022年，8月28日第三十五页，共五十七页，2022年，8月28日请您练习答案:皮肤采血法用注意什么问题?

①所选择采血部位的皮肤应完好。②严格消毒皮肤，防止采血部位感染。③皮肤消毒后，待乙醇挥发干后再刺针。④如血流不畅，切不可用力挤压勉强采血，而应重新针刺。⑤出血不止时，可用消毒干棉球压迫至血不再流出为止，必要时应在报告单上注明，提醒临床医生注意。⑥进行多项细胞检查要分项采血时，采血的次序为：血小板计数、红细胞计数、白细胞计数。第三十六页，共五十七页，2022年，8月28日请您练习请说出静脉采血的步骤？答案:准备→选择静脉→消毒→扎压脉带→穿刺、松压脉带→抽血→拔针止血→注入试管。第三十七页，共五十七页，2022年，8月28日请您练习答案:请说出枸橼酸钠的抗凝原理、用途及其用量？枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。主要用于血沉、凝血象和血小板功能检查。凝血象检查常用0.109mol/L的水溶液，与血液之比通常为1：9。魏氏法血沉测定用浓度为0.105mol/L，与血液比例为1:4（V：V）。第三十八页，共五十七页，2022年，8月28日请您练习请将下列抗凝方法和适宜的项目用线连接起来。枸橼酸钠血细胞比容测定乙二胺四乙酸盐红斑狼疮细胞的检验

肝素凝血象脱纤维法一般血液学检查第三十九页，共五十七页，2022年，8月28日教学目标1.叙述载玻片的清洁方法、血涂片的制备方法及合格血片的标准。2.阐述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事项和染色结果的判断。3.知道吉姆萨染色法和混合染色法。第四十页，共五十七页，2022年，8月28日良好血涂片的标准厚薄适宜,头体尾分明，细胞分布均匀,血膜边缘整齐两侧两端留有空隙良好血涂片尾体头第四十一页，共五十七页，2022年，8月28日四血涂片的制备血涂片染色显微镜检查用途：细胞形态检查，细胞数量评估，网织红、异常细胞、寄生虫检验。血膜过厚：细胞重叠缩小血膜过薄：细胞分布不匀，白细胞多集中于边缘第四十二页，共五十七页，2022年，8月28日1.玻片清洁：a新玻片处理：用盐酸浸泡24小时。b用过玻片处理：用洗涤剂清洗。c使用中玻片处理：只能持玻片边缘，保持清洁、干燥、中性、无油腻。第四十三页，共五十七页，2022年，8月28日操作推片载玻片25°--30°30°--45°血液推玻片载玻片制备过程：第四十四页，共五十七页，2022年，8月28日角度大角度大速度快血膜厚血滴过大,血膜过厚造成血膜厚的原因示意图第四十五页，共五十七页，2022年，8月28日造成血膜薄的原因示意图角度小血滴小血膜薄角度小速度慢血膜薄<25°第四十六页，共五十七页，2022年，8月28日血膜分布不均：主要由于以下原因所致:推片用力不均,血膜成厚薄相间的梯形玻片不清洁有油迹血膜出现空泡区推片边缘不齐血膜出现线条样缺损第四十七页，共五十七页，2022年，8月28日碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核的染料。如亚甲蓝、天青。酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。3.复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料（一）染料（天然染料和人工染料）

发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。五细胞常用的染色方法第四十八页，共五十七页，2022年，8月28日（二）细胞染色原理：1.物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等化学作用：a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。第四十九页，共五十七页，2022年，8月28日

瑞氏染色法（一）染色原理分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性亚甲蓝与细胞中的酸性物质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板结合。第二相是亚甲蓝和伊红结合在适宜条件下形成紫色的亚甲蓝-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。第五十页，共五十七页，2022年，8月28日

b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。

c.周围环境的酸碱度：如环境pH＜pI（pI为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH＞pI，则结合碱性染料。

PH↓→H＋增多→易与伊红结合→染色偏红PH↑→H＋减少→易与美蓝结合→偏蓝第五十一页，共五十七页，2022年，8月28日

（二）试剂

1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml

磷酸盐缓冲液（PBS）：（PH6.4－6.8）磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸