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文档简介

种子生产与经营专业教学资源库不连续缓冲系统的电泳分离原理一、不连续缓冲系统的特点不连续缓冲系统的凝胶不同。在不连续缓冲系统中，样品加在孔径大的浓缩胶上，而浓缩胶则聚合在小孔径的分离胶之上。一、不连续缓冲系统的特点样品直接加在浓缩胶形成的小槽中一、不连续缓冲系统的特点不连续缓冲系统的主要优点是凝胶上可加体积相当大的蛋白质稀溶液，仍然可以使样品的各组分得到良好的分离。

蛋白质样品在小孔径的分离胶中分离之前，先经过大孔径浓缩胶的迁移作用而被浓缩至一极狭窄的区带。我国当前应用的玉米种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，就是利用4.65%浓缩胶，PH3.2；9.3%分离胶，PH5.6的不连续缓冲系统。二、不连续缓冲系统的电泳分离原理电泳分离样品浓缩效应样品分子筛效应电荷效应二、不连续缓冲系统的电泳分离原理——样品的浓缩效应浓缩胶为大孔径胶，样品在其中浓缩，并按其迁移率递减的顺序逐渐在其与分离胶的界面上积聚成薄层。分离胶为小孔径胶，样品在其中进行电荷效应和分子筛效应分离。

蛋白质分子在大孔径胶中受到的阻力小，移动速度快。进入小孔径凝胶时的阻力大，速度就减慢了。

由于凝胶层的不连续性，因此在大孔径与小孔径凝胶的界面处就使蛋白质样品高度浓缩，堆积成层，形成一狭小的高浓度的蛋白质区带。二、不连续缓冲系统的电泳分离原理——样品的浓缩效应不连续系统浓缩效应示意图二、不连续缓冲系统的电泳分离原理——分子筛效应

样品通过一定孔径的凝胶时，小分子走在前面，大分子走在后面。二、不连续缓冲系统的电泳分离原理——电荷效应

由于每种蛋白质分子所载有效电荷不同，因而迁移率不同。

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