第九届年会-2单元july19thhong

T2DM病证结合动物模型研究的思考

——不同STZ剂量造模

对T2DM动物模型证候属性影响湖北中医药大学戴红研究意义针对不同疾病建立常见证候的动物模型，即病证结合动物模型，它能探讨证在某一具体疾病上的表现、同病异证机制和同一方药在单纯治病、单纯治证、病证同治中的作用机制，对于证的本质阐释及新药创制和疗效判定具有重要意义。证候实质的研究不仅能使辨证论治科学化和客观化，也是实现中医药科学化、现代化的必由之路，病证结合正是证候实质研究的重要途径之一，动物模型无疑是其中一个重要手段。研究意义近二十年来糖尿病的发病率在全球范围内迅速升高Sept.2012WHO

全球有3.47亿糖尿病患者，其中T2DM占90%我国糖尿病患病率调查：20岁以上人群中总体患病率9.7%，总患病人数9200万以上中药复方能发挥多途径、多靶点优势，在防治T2DM及其并发症上起着重要作用。研究切实可行、与临床证候相吻合的糖尿病各阶段证候模型，将对阐明经典方药防治糖尿病的作用机制及新药的研发起重要作用。目前糖尿病病证结合动物模型的建立方法

主要是以药物诱发为基础造模方法，其中较常用的是采用链脲佐菌素（STZ）或高脂饲料叠加STZ造模，或在此基础上叠加其它因素，如灌服中医复方，以建立符合某种证型诊断要求的模型。

在建立模型过程中对疾病与证候的关联性关注较少，而临床实践中，病与证的形成并不是截然分开的，证与疾病之间存在明显的相关性。糖尿病病证结合动物模型的研究现状共识糖尿病动物模型在病程中其表征特点确有变化，

具有统计学意义。分析同一时间段出现的多个表征动物模型的证型判断成为可能糖尿病病证结合动物模型的研究现状在动物品系、高脂饲养时间、STZ注射剂量与方法、T2DM成模判断标准等实验条件的报道不一仅STZ腹腔注射剂量有25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、50mg/kg等不同造模后采血时间选择范围在5～28天模型建立的评价标准有空腹和随机血糖之异空腹血糖就有7.0、7.8、10.0和11.13mmol/L等多个不同标准糖尿病病证结合动物模型的研究现状研究结论差异极大用高脂饮食结合STZ造模5周龄SD雄性大鼠用STZ35mg/kg造模后模型4～8周属阴虚内热、10～13周属气阴两虚；8周龄SD雄性大鼠用STZ35mg/kg造模后1～6周为时间窗，早期脾气亏虚为主，后期痰湿瘀滞为主Wistar大鼠用STZ30mg/kg造模后4周末起为气阴两虚，9～10周气阴两虚加重并伴痰浊，11～12周为血瘀6～8周龄Wistar大鼠用STZ25mg/kg2次造模后初期为阴阳两虚，中期为气阴两虚，后期为阴虚内热，现代医学对STZ动物模型的研究

大鼠

品系STZ造模选择的注射部位STZ剂量STZ注射前大鼠的体重腹腔or

尾静脉SDorWistar♀and♂or

♂25mg/kg30mg/kg35mg/kg40mg/kg50mg/kg5～8周龄体重：134mg～297mg

（Wistar♂

）150mg～318mg

（SD♂

）规范模型动物的选择标准范围、造模剂量和方法，在疾病模型相对稳定的情况下研究其证型表现平行对照研究把握疾病模型与其证型的对应关系进一步寻找“证”在T2DM中的本质表现实现辨证与辨病相结合平行对照研究造模方法高脂饮食4周加STZ腹腔注射STZ剂量四个常用剂量30mg/Kg、35mg/Kg、40mg/Kg、50mg/Kg观察STZ不同剂量组模型动物在T2DM病程中的表现，判断STZ腹腔注射4种不同剂量造模后各模型组动物在T2DM病程中的证型及其演变【饲养方法】每只单独饲养在代谢笼中【血糖测量】每周第1天

尾部血管采血法【动物体重称量】每周第1天

动态天平【造模后饲料与饮水】给予普通饲料、超纯水喂养平行对照研究特点【观测指标】每日观察每只动物表征，测定每只动物代谢指标，包括24h采食量、24h饮水量、24h尿量【实验人员】中诊教师and实验师实验结果实验结果第6周单日空腹血糖、24h采食量、24h饮水量和24h尿量变化及相关性检验第9周单日随机血糖、24h采食量、24h饮水量和24h尿量变化及相关性检验高脂饮食是造模的重要因素，四周高脂饮食期间，采食量大的动物STZ造模后血糖较高、饮水量大、尿量多、大便色浅且多湿烂并有较浓烈酸臭味；饮食在糖尿病模型动物的病情轻重及病程演变上有决定意义；且与模型动物表征、临床表现（饮食量、饮水量、尿量、大便性状等）密切相关，并有一定时间窗。STZ剂量除动物的24h采食量、饮水量、尿量的定量测定值，各组动物舌质、大便的性状、质地、便量等对判断动物证型及变化具有重要意义观测指标STZ各剂量组模型动物第5-10周期间在体重、24h采食量、24h饮水量、24h尿量、空腹血糖、随机血糖组间比较有显著差异观测指标观测指标数据分析初步结论观测指标数据分析初步结论时间窗模型4组血糖监测治疗时间STZ造模后第1-3周，模型1组、模型2组和模型3组动物证型主要表现为津伤、热象，但模型1组和模型3组动物津伤表现更为严重，模型3组动物尚有气虚和湿盛表现；第4周起模型3组动物气阴两虚表现明显，而模型2组动物第6周出现气阴两虚之象。动物病情较重，迅速进入衰竭期，STZ腹腔注射后第3周是其转折点，该剂量组动物模型类似于人类T1DM，不适合作为降糖中药复方研究的载体血糖值作为DM动物模型观察的重要指标，DM大鼠的随机血糖较空腹血糖更为稳定可靠，与动物的病情和代谢指标一致性高，相比之下，空腹血糖波动范围较大，不利于判断动物的真实血糖水平。实验11周起，各剂量组动物体重变化小、较为稳定，提示DM动物的治疗周期在6-8周以内较为理想，有利于观察降糖药物疗效。思考1.如何选择模型？以病为主以证为主2.模型建立饮食STZ剂量造模方法判断标准动物品系性别周龄3.证型的判断判断依据？无法采集自觉症状凭动物表征……？如何验证？证型表征…病证结合模型疾病证型的判定依据疾病动物模型建立动物品系动物周龄建模时间建模方法tough病证结合模型涉及广泛，变化较多，有待进一步研究复杂实验过程中一些与人类疾病不同的变化实验11周后：模型1组（STZ30mg/kg）造模后血糖＜11.1mmol/L的那只动物3天内病情迅速进展，出现多饮多食多尿，且血糖迅速升高并持续到实验结束；模型3组（STZ40mg/kg）中一只动物病情好转，多饮多食多尿及血糖值在一周内逐步减轻直至恢复正常，并持续至实验结束。提示某些糖尿病动物病情有可能自发性缓解，而人类T2DM患者病程中尚无可能。差异再思考1.在不同病程阶段观察模型动物表征的基础上结合微观指标检测，结合相应方剂反证证型有无可能准确地判断证型，从而有利于探