DNA粗提取与鉴定实验课件

1.提取生物大分子的基本思路选用一定的

或

方法分离具有不同_______________的生物大分子。2.提取DNA的思路：利用DNA与

、

和

等在

和

性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。一、提取DNA的方法物理化学物理或化学性质RNA蛋白质脂质物理化学DNA粗提取与鉴定回扣基础知识点3.原理(1)DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的

溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的

就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。NaCl盐浓度1.提取生物大分子的基本思路一、提取DNA的方法物理化学物理(2)

能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受

的高温，而DNA在

以上才会变性。洗涤剂能瓦解

，但对DNA没有影响。(3)DNA不溶于

，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。酒精蛋白酶60～80℃80℃细胞膜4.DNA的鉴定在

的条件下，DNA遇二苯胺会染成

。注意二苯胺试剂要

。沸水浴蓝色现配现用通常选用2mol/LNaCl溶液溶解细胞中的_________，此时杂质易沉淀；在0.14mol/LNaCl溶液中DNA溶解度_______，可使_________。DNA最小DNA析出(2)能水解蛋白质，但对DNA没有影1.利用DNA的溶解特性粗提取DNA①DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。溶解特性质量浓度为2mol/LNaCl溶液质量浓度为0.14mol/LNaCl溶液DNA在NaCl溶液中，质量浓度为0.14mol/L时溶解度最小溶解析出蛋白质NaCl的质量浓度从2mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大部分发生盐析溶解考点一DNA提取与鉴定原理1.利用DNA的溶解特性粗提取DNA溶解特性质量浓度为2m②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。NaCl溶液酒精(体积分数为95%的冷酒精)DNA不溶蛋白质NaCl溶液质量浓度从2mol/L逐渐稀释的过程中溶解度逐渐增大某些蛋白质可溶②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利思考：为提取到DNA，曾先后使用不同浓度的NaCl溶液，则在质量浓度为2mol/LNaCl溶液及0.14mol/LNaCl溶液中应取滤液，还是滤得的固体物？在质量浓度为2mol/LNaCl溶液中DNA呈溶解状态，应取滤液，在质量浓度为0.14mol/LNaCl溶液中DNA溶解度极低，易析出，应取固体物。思考：为提取到DNA，曾先后使用不同浓度的NaCl溶液，则在2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表)DNA蛋白质蛋白酶没影响水解高温80℃以上才会变性60～80℃会变性洗涤剂没影响瓦解细胞膜特别提醒(1)甲基绿可将DNA染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定DNA属于颜色反应，需要水浴加热5min，可使DNA呈蓝色。(2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表)归纳DNA的粗提取原理及目的归纳基本原理方法目的DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在质量浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低溶于NaCl溶液中并稀释①NaCl溶液质量浓度为2mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质②当NaCl溶液稀释至质量浓度为0.14mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质DNA不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质DNA不溶于酒精溶液加入冷却酒精(体积分数为95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质归纳DNA的粗提取原理及目的归纳基本原理方法目的DNA1.蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。下列药品可达到上述同一目的的是 (

)A.蒸馏水 B.NaCl溶液C.NaOH溶液 D.盐酸2.(2013江苏)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验，操作错误的是()A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热BA学以致用1.蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。下列B3.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是()A.充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液B.实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点C.对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D.实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同4.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是()A.析出DNA时要缓慢地加蒸馏水，当析出黏稠物时即不再加水B.在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，自变量是洗涤剂和食盐C.提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色D.将含有DNA的滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温后过滤，能去除蛋白质杂质AD3.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是(1.实验材料的选取选用

含量相对较高的生物组织。2.破碎细胞，获取含DNA的滤液(1)动物细胞的破碎——以鸡血为例在鸡血细胞液中加入一定量的

，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集

即可。二、DNA粗提取实验流程

DNA蒸馏水滤液(2)植物细胞的破碎——以洋葱为例先将洋葱切碎，然后加入一定量

_______________；进行充分

和

__，过滤后收集研磨液。搅拌研磨洗涤剂和食盐思考：用猪的血液与鸡的血液提取DNA哪个效果更好？用鸡的血液；因为鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得，而猪的红细胞无细胞核DNA含量少。1.实验材料的选取二、DNA粗提取实验流程DNA蒸馏水滤液思考：1.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。2.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。3.在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？破碎细胞壁，使DNA更多地溶解在NaCl溶液中,研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。思考：3.去除滤液中的杂质最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。具体做法如下：方案一：滤液＋NaCl(2mol/L)→过滤除去杂质→加入蒸馏水使NaCl溶液浓度为0.14mol/L→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA－NaCl溶解液方案二：滤液＋嫩肉粉(木瓜蛋白酶)→静置10～15min→过滤获得DNA滤液方案三：滤液→60～75℃处理→过滤获得DNA滤液方案一的原理是________________________________；方案二的原理是________________________________；方案三的原理是________________________________。DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA蛋白质和DNA的变性温度不同3.去除滤液中的杂质DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同思考：1.过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？

选用尼龙布进行过滤2.方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。3.为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质思考：4.DNA的进一步提纯利用DNA不溶于冷却的

这一原理，可从溶液中析出较纯净的DNA，此时DNA的状态为

。5.DNA的鉴定将呈丝状物的DNA溶解于5mL质量浓度为

溶液中，再加入4mL的

试剂，

加热5min，冷却后观察溶液的颜色。注意要同时设置

实验。酒精溶液白色丝状物2mol/L的NaCl二苯胺沸水对照4.DNA的进一步提纯酒精溶液白色丝状物2mol/L的NaC1.实验材料的选取本实验用鸡血细胞作实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞的核DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水涨破，而用动物肝脏细胞等作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。考点二实验设计（1）不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。（2）材料不同所采用的提取方法不同①植物组织：取材→研磨→过滤→沉淀。在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐(洗涤剂能够溶解细胞膜)，充分搅拌和研磨，过滤后收集研磨液②鸡血：制备鸡血细胞液→提取核DNA→溶解细胞核内DNA→析出并滤取DNA→DNA再溶解→提取较纯净的DNA。1.实验材料的选取考点二实验设计（1）不同生物的组2.提取DNA的具体步骤

↓(2)溶解核内DNA：滤液＋质量浓度为2mol/LNaCl溶液

↓(3)过滤：除去不溶的杂质，得滤液

↓(4)析出含DNA的黏稠物：向滤液中缓缓加入蒸馏水，并用玻璃棒轻轻沿一个方向不停地搅拌，直到丝状物不再增加时，停止加水(此时NaCl质量浓度约为0.14mol/L)2.提取DNA的具体步骤↓(5)过滤：用多层纱布过滤，含DNA的黏稠物被留在纱布上↓(6)DNA的黏稠物再溶解：将其溶解在质量浓度为2mol/L的NaCl溶液中↓(7)过滤：用两层纱布滤得含DNA的滤液↓(8)对DNA进一步提纯：向滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，即粗提取的DNA↓↓(9)DNA的鉴定比较加入物质结果图示实验组均加入：①4mL二苯胺试剂②质量浓度为2mol/LNaCl溶液5mL丝状物(DNA)溶液逐渐变蓝对照组——不变蓝↓比较加入物质结果图示实验组均加入：丝状物溶液对照组——不共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”讨论：①两次蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第二次：使DNA黏稠物析出此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？②三次过滤第一次：DNA存在于滤液里第一步第二次：DNA被留在纱布上第四步第三次：DNA存在于滤液里第六步过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为1－2层共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”讨论：①两次蒸③两次析出第一次：用0.14mol／L的NaCI溶液含杂质多第三步第二次：用冷却的95％的酒精第七步④六次搅拌：第一、二、三、五、七步其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNA③两次析出第一次：用0.14mol／L的NaCI溶液含杂讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？1.材料未充分研磨成糊状2.加入酒精后振动或搅拌时过猛，DNA被破坏3.二苯胺配制时间过长，最好现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色4.析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水不能一次快速倒入，否则会影响结果5.实验中多个步骤要用玻璃棒进行搅拌，不同步骤中用法不同，做实验时如果不注意，会影响实验结果讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？1.材料未充分研磨成糊特别提醒(1)做该实验时，不能用猪血代替鸡血，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA。(2)制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止血液凝固,静置后上层是血浆，下层为所需要的血细胞。(3)涨破细胞的方法：向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。不能用生理盐水，因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当，所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。(4)两次加入蒸馏水，第一次是为了使血细胞吸水涨破,释放出核内的DNA；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNA的析出。(5)两次析出DNA的方法：第一次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNA析出；第二次是加入冷酒精，因为DNA不溶于酒精溶液。特别提醒(6)在DNA粗提取中三次过滤时，DNA存在的部分及所用的纱布层数不同：第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含DNA的滤液，使用的纱布为1～2层。第二次过滤含有黏稠物的NaCl溶液，是为了得到从低浓度的NaCl溶液中析出的附着在纱布上的含DNA的黏稠物，所用的纱布为多层。第三次过滤溶解有DNA的NaCl溶液，目的是为了使DNA再溶解，所以只要用两层纱布即可。(6)在DNA粗提取中三次过滤时，DNA存在的部分及所用的纱1.(2012江苏)下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是()A.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B.将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C.常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取D.用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少2.(2011·江苏)在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，下列相关叙述正确的是 (

)

A.用蒸馏水将NaCl溶液质量浓度调至0.14mol/L，滤去析出物B.调节NaCl溶液质量浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C.将丝状物溶解在质量浓度为2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D.用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同C课堂巩固B1.(2012江苏)下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述3.下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是 (

)A.①是洗涤红细胞，去除血细胞表面的杂质B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质C.③是溶解DNA，去除不溶于质量浓度为2mol/LNaCl溶液的杂质D.④是稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质C3.下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的4.下图为“DNA的粗提取与鉴定”的实验装置，请回答下列相关的问题。(1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中有较高含量的________。(2)在图A所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是________，通过图B所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入质量浓度为2mol/L的NaCl溶液的目的是____________________________________(3)图C所示实验步骤中加蒸馏水的目的是___________________。DNA使血细胞破裂使滤液中的DNA溶于浓NaCl溶液使DNA析出4.下图为“DNA的粗提取与鉴定”的实验装置，请回答下(1)5.下图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答下列问题：（1）步骤一中，向鸡血细胞液中加入

并搅拌，可使鸡血细胞破裂。（2）步骤二中，过滤后收集含有DNA的

。蒸馏水滤液5.下图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程（3）步骤三、四的操作原理是________________________；步骤四中，通过向溶液中加入

调节NaCl溶液的物质的量浓度至

mol/L时，DNA将会析出，过滤去除溶液中的杂质。（4）步骤七：向步骤六过滤后的

中加入等体积的冷却的

，静置2～3min，溶液中会出现

色丝状物，这就是粗提取的DNA。（5）步骤七：DNA遇

试剂，沸水浴5min，冷却后，溶液呈

色。DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质蒸馏水0.14滤液酒精白二苯胺蓝（3）步骤三、四的操作原理是________________1.提取生物大分子的基本思路选用一定的

或

方法分离具有不同_______________的生物大分子。2.提取DNA的思路：利用DNA与

、

和

等在

和

性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。一、提取DNA的方法物理化学物理或化学性质RNA蛋白质脂质物理化学DNA粗提取与鉴定回扣基础知识点3.原理(1)DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的

溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的

就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。NaCl盐浓度1.提取生物大分子的基本思路一、提取DNA的方法物理化学物理(2)

能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受

的高温，而DNA在

以上才会变性。洗涤剂能瓦解

，但对DNA没有影响。(3)DNA不溶于

，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。酒精蛋白酶60～80℃80℃细胞膜4.DNA的鉴定在

的条件下，DNA遇二苯胺会染成

。注意二苯胺试剂要

。沸水浴蓝色现配现用通常选用2mol/LNaCl溶液溶解细胞中的_________，此时杂质易沉淀；在0.14mol/LNaCl溶液中DNA溶解度_______，可使_________。DNA最小DNA析出(2)能水解蛋白质，但对DNA没有影1.利用DNA的溶解特性粗提取DNA①DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。溶解特性质量浓度为2mol/LNaCl溶液质量浓度为0.14mol/LNaCl溶液DNA在NaCl溶液中，质量浓度为0.14mol/L时溶解度最小溶解析出蛋白质NaCl的质量浓度从2mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大部分发生盐析溶解考点一DNA提取与鉴定原理1.利用DNA的溶解特性粗提取DNA溶解特性质量浓度为2m②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。NaCl溶液酒精(体积分数为95%的冷酒精)DNA不溶蛋白质NaCl溶液质量浓度从2mol/L逐渐稀释的过程中溶解度逐渐增大某些蛋白质可溶②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利思考：为提取到DNA，曾先后使用不同浓度的NaCl溶液，则在质量浓度为2mol/LNaCl溶液及0.14mol/LNaCl溶液中应取滤液，还是滤得的固体物？在质量浓度为2mol/LNaCl溶液中DNA呈溶解状态，应取滤液，在质量浓度为0.14mol/LNaCl溶液中DNA溶解度极低，易析出，应取固体物。思考：为提取到DNA，曾先后使用不同浓度的NaCl溶液，则在2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表)DNA蛋白质蛋白酶没影响水解高温80℃以上才会变性60～80℃会变性洗涤剂没影响瓦解细胞膜特别提醒(1)甲基绿可将DNA染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定DNA属于颜色反应，需要水浴加热5min，可使DNA呈蓝色。(2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表)归纳DNA的粗提取原理及目的归纳基本原理方法目的DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在质量浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低溶于NaCl溶液中并稀释①NaCl溶液质量浓度为2mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质②当NaCl溶液稀释至质量浓度为0.14mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质DNA不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质DNA不溶于酒精溶液加入冷却酒精(体积分数为95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质归纳DNA的粗提取原理及目的归纳基本原理方法目的DNA1.蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。下列药品可达到上述同一目的的是 (

)A.蒸馏水 B.NaCl溶液C.NaOH溶液 D.盐酸2.(2013江苏)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验，操作错误的是()A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热BA学以致用1.蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。下列B3.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是()A.充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液B.实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点C.对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D.实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同4.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是()A.析出DNA时要缓慢地加蒸馏水，当析出黏稠物时即不再加水B.在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，自变量是洗涤剂和食盐C.提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色D.将含有DNA的滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温后过滤，能去除蛋白质杂质AD3.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是(1.实验材料的选取选用

含量相对较高的生物组织。2.破碎细胞，获取含DNA的滤液(1)动物细胞的破碎——以鸡血为例在鸡血细胞液中加入一定量的

，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集

即可。二、DNA粗提取实验流程

DNA蒸馏水滤液(2)植物细胞的破碎——以洋葱为例先将洋葱切碎，然后加入一定量

_______________；进行充分

和

__，过滤后收集研磨液。搅拌研磨洗涤剂和食盐思考：用猪的血液与鸡的血液提取DNA哪个效果更好？用鸡的血液；因为鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得，而猪的红细胞无细胞核DNA含量少。1.实验材料的选取二、DNA粗提取实验流程DNA蒸馏水滤液思考：1.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。2.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。3.在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？破碎细胞壁，使DNA更多地溶解在NaCl溶液中,研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。思考：3.去除滤液中的杂质最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。具体做法如下：方案一：滤液＋NaCl(2mol/L)→过滤除去杂质→加入蒸馏水使NaCl溶液浓度为0.14mol/L→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA－NaCl溶解液方案二：滤液＋嫩肉粉(木瓜蛋白酶)→静置10～15min→过滤获得DNA滤液方案三：滤液→60～75℃处理→过滤获得DNA滤液方案一的原理是________________________________；方案二的原理是________________________________；方案三的原理是________________________________。DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA蛋白质和DNA的变性温度不同3.去除滤液中的杂质DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同思考：1.过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？

选用尼龙布进行过滤2.方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。3.为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质思考：4.DNA的进一步提纯利用DNA不溶于冷却的

这一原理，可从溶液中析出较纯净的DNA，此时DNA的状态为

。5.DNA的鉴定将呈丝状物的DNA溶解于5mL质量浓度为

溶液中，再加入4mL的

试剂，

加热5min，冷却后观察溶液的颜色。注意要同时设置

实验。酒精溶液白色丝状物2mol/L的NaCl二苯胺沸水对照4.DNA的进一步提纯酒精溶液白色丝状物2mol/L的NaC1.实验材料的选取本实验用鸡血细胞作实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞的核DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水涨破，而用动物肝脏细胞等作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。考点二实验设计（1）不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。（2）材料不同所采用的提取方法不同①植物组织：取材→研磨→过滤→沉淀。在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐(洗涤剂能够溶解细胞膜)，充分搅拌和研磨，过滤后收集研磨液②鸡血：制备鸡血细胞液→提取核DNA→溶解细胞核内DNA→析出并滤取DNA→DNA再溶解→提取较纯净的DNA。1.实验材料的选取考点二实验设计（1）不同生物的组2.提取DNA的具体步骤

↓(2)溶解核内DNA：滤液＋质量浓度为2mol/LNaCl溶液

↓(3)过滤：除去不溶的杂质，得滤液

↓(4)析出含DNA的黏稠物：向滤液中缓缓加入蒸馏水，并用玻璃棒轻轻沿一个方向不停地搅拌，直到丝状物不再增加时，停止加水(此时NaCl质量浓度约为0.14mol/L)2.提取DNA的具体步骤↓(5)过滤：用多层纱布过滤，含DNA的黏稠物被留在纱布上↓(6)DNA的黏稠物再溶解：将其溶解在质量浓度为2mol/L的NaCl溶液中↓(7)过滤：用两层纱布滤得含DNA的滤液↓(8)对DNA进一步提纯：向滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，即粗提取的DNA↓↓(9)DNA的鉴定比较加入物质结果图示实验组均加入：①4mL二苯胺试剂②质量浓度为2mol/LNaCl溶液5mL丝状物(DNA)溶液逐渐变蓝对照组——不变蓝↓比较加入物质结果图示实验组均加入：丝状物溶液对照组——不共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”讨论：①两次蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第二次：使DNA黏稠物析出此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？②三次过滤第一次：DNA存在于滤液里第一步第二次：DNA被留在纱布上第四步第三次：DNA存在于滤液里第六步过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为1－2层共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”讨论：①两次蒸③两次析出第一次：用0.14mol／L的NaCI溶液含杂质多第三步第二次：用冷却的95％的酒精第七步④六次搅拌：第一、二、三、五、七步其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNA③两次析出第一次：用0.14mol／L的NaCI溶液含杂讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？1.材料未充分研磨成糊状2.加入酒精后振动或搅拌时过猛，DNA被破坏3.二苯胺配制时间过长，最好现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色4.析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水不能一次快速倒入，否则会影响结果5.实验中多个步骤要用玻璃棒进行搅拌，不同步骤中用法不同，做实验时如果不注意，会影响实验结果讨论：实验结果不明显，可能是什么原因？1.材料未充分研磨成糊特别提醒(1)做该实验时，不能用猪血代替鸡血，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA。(2)制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止血液凝固,静置后上层是血浆，下层为所需要的血细胞。(3)涨破细胞的方法：向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。不能用生理盐水，因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当，所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。(4)两次加入蒸馏水，第一次是为了使血细胞吸水涨破,释放出核内的DNA；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNA的析出。(5)两次析出DNA的方法：第一次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNA析出；第二次是加入冷酒精，因为DNA不溶于酒精溶液。特别提醒(6)在DNA粗提取中三次过滤时，DNA存在的部分及所用的纱布层数不同：第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含DNA的滤液，使用的纱布为1～2层。第二次过滤