HLA检测技术及其应用课件

HLA检测技术及其应用HLA检测技术及其应用1内容血型HLA概念检测方法HLA的应用HLA与临床输血内容血型2血型种类及其遗传基础血型：血液中各种成分的遗传（表现）多态性标志血液成分：红细胞，白细胞，血小板，血清蛋白遗传多态性表现：细胞表面，血浆中的各种特异性蛋白多态性的遗传基础：基因（染色体上的核酸序列）血型种类及其遗传基础血型：血液中各种成分的遗传（表现）多态性3血型的发现输血治疗的需要促使“血型”发现15世纪后期开始输血1900年Landsteiner发现人类红细胞ABO血型1927年发现MN血型系统1940年发现Rh血型HLA1958年法国J.多赛发现血型的发现输血治疗的需要促使“血型”发现4LandsteinerLandsteiner5血型的检测方法免疫血液学方法：抗原、抗体检测方法

凝集实验：试管法、凝胶柱法、固相吸附、

流式技术细胞生物学检测方法：混合淋巴细胞培养分子生物学检测方法：血型基因检测SSP、SSO、SBT

血型的检测方法免疫血液学方法：抗原、抗体检测方法6HLA概念人类白细胞抗原，白细胞表面的一种糖蛋白，有非常复杂的生物学功能，非常复杂的多态性广范存在于除白细胞表面的其他组织、体液中，与组织相容性有关，又称为组织相容性抗原HLA概念人类白细胞抗原，白细胞表面的一种糖蛋白，有非常复杂7HLA概念:HLA分子结构HLA-I类分子HLA-II类分子HLA概念:HLA分子结构HLA-I类分子HLA-II类分8HLA的生物学功能参与内外抗原肽的处理，呈递．

自我识别的信号某些病毒，细菌进入细胞的受体与某些疾病的发病有关,如：B27与强直

性脊柱炎（AS）HLA的生物学功能参与内外抗原肽的处理，呈递．9HLA功能HLA功能10（二）HLA复合体的遗传特征

1.单元型遗传

2.多态性现象（1）复等位基因（2）共显性表达

3.连锁不平衡

（二）HLA复合体的遗传特征11HLA概念:HLA基因结构（6p21,3）HLA概念:HLA基因结构（6p21,3）12已经发现的HLA种类、数量已经发现的HLA种类、数量13HLA-Ⅰ类分子的分布

1.存在于有核细胞(含血小板和网织红细胞)表面。淋巴细胞>肾、肝脏、心脏>神经组织、成熟的滋养细胞

2.存在形式（1）膜结合：有核细胞表面（2）可溶性：存在于血清、初乳和尿液等体液中。

HLA-Ⅰ类分子的分布14

HLA-Ⅱ类分子的分布

1.APCB细胞、单核/巨噬细胞和树突状细胞；

2.其他激活的T细胞，精子和血管内皮细胞。

HLA-Ⅱ类分子的分布15血清学细胞学分子生物学实验方法补体介导的微量细胞毒试验混合淋巴细胞培养法（MLC)分子生物学技术原理抗体(HLA分型)+淋巴细胞(受者)+补体淋巴细胞受损判定结果（细胞死亡百分率）单向法双向法比较供、受者编码HLA抗原基因的DNA序列，判定供、受者间的相似程度。主要应用检测HLA-A、B、C抗原检测DR抗原

HLA分型法原理及应用血清学细胞学分子生物学实验方法补体介导的微量细胞毒试验混合淋16HLA的检测方法TERASAKI发明的微量淋巴细胞毒实验:当特异性抗体与HLA抗原结合，激活补体，使淋巴细胞溶解，显微镜下可见到被活性染料着色的淋巴细胞用于HLA-I类抗原分型HLA的检测方法TERASAKI发明的微量淋巴细胞毒实验:17HLA检测方法（分子生物学）基于PCR技术的分型方法PCR-SSP方法操作简单、灵活适合少量样本临床病例分型检测通量较小HLA检测方法（分子生物学）基于PCR技术的分型方法18PCR-SSP方法PCR-SSP方法19HLA检测方法（分子生物学）PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针）杂交条方法基因芯片方法流式荧光微珠HLA检测方法（分子生物学）PCR-SSO（序列特异性寡核苷20芯片的工作原理将HLA基因的PCR产物固定在基片上荧光标记的序列特异性探针杂交探针1探针2探针3探针n…......杂交图谱汇总每条探针数据得到所有样品的分型结果由计算机自动判读分型结果芯片的工作原理将HLA基因的PCR产物固定在基片上荧光标记的21PCR-SSO流式微珠分型PCR-SSO流式微珠分型22SBT（DNA测序分型）SBT（DNA测序分型）23HLA检测技术及其应用课件24几种常用HLA分型方法比较HLA分型方法比较项目

PCR-SSPPCR-SSO杂交条

PCR-SSO微珠法PCR-SSO芯片法

DNA测序方法技术要求

低

低

较高

高

高

分辨率

中低

中低

中高

中高

高检测通量

低

一般

较高

高

较高使用设备

少

少

较多

多

较多环境污染

EB致癌

轻微

轻微

轻微

轻操作步骤

简单

简单

较复杂

复杂

较复杂检测成本

低

低

较高

高

较高适用范围临床或小批量

临床、较大批量

中、大批量

大批量

临床、各种批量应用情况

国内临床

国内临床

骨髓库

国家芯片中心

国外常规采用几种常用HLA分型方法比较25HLA分型方法的发展趋势高准确性：血清学-----分子生物学高通量：SSP-------基因芯片、流式高分辨：低分辨-------中分辨--------高分辨氨基酸残基配型：血型学-----基因------AA残基

（表位）HLA分型方法的发展趋势高准确性：血清学-----分子生物学26HLA的应用免疫应答，T细胞分化器官移植与疾病关联肿瘤关联法医、个体识别、人类学研究HLA的应用免疫应答，T细胞分化27免疫应答免疫应答28HLA检测技术及其应用课件29HLA与器官移植、临床输血骨髓移植（造血干细胞移植）肾移植血小板输注其他血液成分输血HLA与器官移植、临床输血骨髓移植（造血干细胞移植）30HLA与疾病HLA与疾病31HLA与肿瘤恶性肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子表达减少或缺乏，肿瘤细胞逃逸免疫监视。

IFN-

促进肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子表达增强CD8+CTL细胞的特异性杀伤。HLA与肿瘤恶性肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子表达减少或缺乏，32法医、个体识别、人类学研究HLA可以作为亲子鉴定的一个指标刑侦研究种族人群的迁徙法医、个体识别、人类学研究HLA可以作为亲子鉴定的一个指标33HLA与临床输血溶血性输血反应，临床少见发热反应，70%发热反应是由HLA抗体引起血小板输注无效，首要因素是HLA抗体过敏反应，与HLA抗体有关GVHDTRALIHLA与临床输血溶血性输血反应，临床少见34HLA检测技术及其应用HLA检测技术及其应用35内容血型HLA概念检测方法HLA的应用HLA与临床输血内容血型36血型种类及其遗传基础血型：血液中各种成分的遗传（表现）多态性标志血液成分：红细胞，白细胞，血小板，血清蛋白遗传多态性表现：细胞表面，血浆中的各种特异性蛋白多态性的遗传基础：基因（染色体上的核酸序列）血型种类及其遗传基础血型：血液中各种成分的遗传（表现）多态性37血型的发现输血治疗的需要促使“血型”发现15世纪后期开始输血1900年Landsteiner发现人类红细胞ABO血型1927年发现MN血型系统1940年发现Rh血型HLA1958年法国J.多赛发现血型的发现输血治疗的需要促使“血型”发现38LandsteinerLandsteiner39血型的检测方法免疫血液学方法：抗原、抗体检测方法

凝集实验：试管法、凝胶柱法、固相吸附、

流式技术细胞生物学检测方法：混合淋巴细胞培养分子生物学检测方法：血型基因检测SSP、SSO、SBT

血型的检测方法免疫血液学方法：抗原、抗体检测方法40HLA概念人类白细胞抗原，白细胞表面的一种糖蛋白，有非常复杂的生物学功能，非常复杂的多态性广范存在于除白细胞表面的其他组织、体液中，与组织相容性有关，又称为组织相容性抗原HLA概念人类白细胞抗原，白细胞表面的一种糖蛋白，有非常复杂41HLA概念:HLA分子结构HLA-I类分子HLA-II类分子HLA概念:HLA分子结构HLA-I类分子HLA-II类分42HLA的生物学功能参与内外抗原肽的处理，呈递．

自我识别的信号某些病毒，细菌进入细胞的受体与某些疾病的发病有关,如：B27与强直

性脊柱炎（AS）HLA的生物学功能参与内外抗原肽的处理，呈递．43HLA功能HLA功能44（二）HLA复合体的遗传特征

1.单元型遗传

2.多态性现象（1）复等位基因（2）共显性表达

3.连锁不平衡

（二）HLA复合体的遗传特征45HLA概念:HLA基因结构（6p21,3）HLA概念:HLA基因结构（6p21,3）46已经发现的HLA种类、数量已经发现的HLA种类、数量47HLA-Ⅰ类分子的分布

1.存在于有核细胞(含血小板和网织红细胞)表面。淋巴细胞>肾、肝脏、心脏>神经组织、成熟的滋养细胞

2.存在形式（1）膜结合：有核细胞表面（2）可溶性：存在于血清、初乳和尿液等体液中。

HLA-Ⅰ类分子的分布48

HLA-Ⅱ类分子的分布

1.APCB细胞、单核/巨噬细胞和树突状细胞；

2.其他激活的T细胞，精子和血管内皮细胞。

HLA-Ⅱ类分子的分布49血清学细胞学分子生物学实验方法补体介导的微量细胞毒试验混合淋巴细胞培养法（MLC)分子生物学技术原理抗体(HLA分型)+淋巴细胞(受者)+补体淋巴细胞受损判定结果（细胞死亡百分率）单向法双向法比较供、受者编码HLA抗原基因的DNA序列，判定供、受者间的相似程度。主要应用检测HLA-A、B、C抗原检测DR抗原

HLA分型法原理及应用血清学细胞学分子生物学实验方法补体介导的微量细胞毒试验混合淋50HLA的检测方法TERASAKI发明的微量淋巴细胞毒实验:当特异性抗体与HLA抗原结合，激活补体，使淋巴细胞溶解，显微镜下可见到被活性染料着色的淋巴细胞用于HLA-I类抗原分型HLA的检测方法TERASAKI发明的微量淋巴细胞毒实验:51HLA检测方法（分子生物学）基于PCR技术的分型方法PCR-SSP方法操作简单、灵活适合少量样本临床病例分型检测通量较小HLA检测方法（分子生物学）基于PCR技术的分型方法52PCR-SSP方法PCR-SSP方法53HLA检测方法（分子生物学）PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针）杂交条方法基因芯片方法流式荧光微珠HLA检测方法（分子生物学）PCR-SSO（序列特异性寡核苷54芯片的工作原理将HLA基因的PCR产物固定在基片上荧光标记的序列特异性探针杂交探针1探针2探针3探针n…......杂交图谱汇总每条探针数据得到所有样品的分型结果由计算机自动判读分型结果芯片的工作原理将HLA基因的PCR产物固定在基片上荧光标记的55PCR-SSO流式微珠分型PCR-SSO流式微珠分型56SBT（DNA测序分型）SBT（DNA测序分型）57HLA检测技术及其应用课件58几种常用HLA分型方法比较HLA分型方法比较项目

PCR-SSPPCR-SSO杂交条

PCR-SSO微珠法PCR-SSO芯片法

DNA测序方法技术要求

低

低

较高

高

高

分辨率

中低

中低

中高

中高

高检测通量

低

一般

较高

高

较高使用设备

少

少

较多

多

较多环境污染

EB致癌

轻微

轻微

轻微

轻操作步骤

简单

简单

较复杂

复杂

较复杂检测成本

低

低

较高

高

较高适用范围临床或小批量

临床、较大批量

中、大批量

大批量

临床、各种批量应用情况