高等院校医药类课件-法医物证检验

第16章法医物证检验第16章各种生物检材

血液血痕精斑唾液软组织硬组织（骨、牙）毛发指甲各种生物检材提取活体检材提取活体血样时，采集静脉或耳垂血。将新鲜血液滴在消毒纱布或中速滤纸上，约2cm2以上，在通风干燥的地方晾干。提取口腔脱落上皮细胞时，应先用清水漱口，然后用特制的口腔提取拭子或消毒棉签反复刮拭左右两侧颊粘膜，置通风干燥的处晾干。毛发应拔取1-3根，尽量取毛根。以上检材均用纸袋包装。提取活体检材血迹检材对衣裤、鞋帽以及刀、斧、石块等附着疑有血痕的小件物品要整件提取。附有血痕又可剪切的大件物品，如地毯、被褥、床单等，可将血痕连同其周边的部分一起剪下；衣柜、墙壁、地面等不能移动的物件上附着的血迹，可刮取或用生理盐水浸湿的纱布提取，血痕量少时，应用少量的棉纱线提取，以尽量提高棉纱线上血痕的浓度。血痕检材分别用纸袋包装，不能用塑料袋包装或放入密封容器内。血迹检材对衣裤、鞋帽以及刀、斧、石块等附着疑有血痕的小件物品精斑（ 混合斑）提取阴道内容物，应用棉签在阴道穹窿部提取，至少提取3支以上，并标明提取序号，分别晾干、分开包装。怀疑有性侵害的尸体，必要时还应注意会阴、下腹、口腔等部位有无精斑，并分别提取。怀疑有性侵害的现场，必须提取怀疑有精斑的所有检材，如床单、被褥、卫生纸、避孕套、内裤、衣物等。应该分别提取、分别晾干、分开包装。精斑（ 混合斑）提取阴道内容物，应用棉签在阴道穹窿部提取，至毛发毛发要用镊子夹取，每一根或一组毛发应分别用纸折叠后置纸袋内送检。唾液斑检材如烟头、果核、香口胶同样要用镊子夹取，分别包装。毛发毛发要用镊子夹取，每一根或一组毛发应分别用纸折人流组织及引产胎儿人流刮宫组织的提取，取确认为绒毛的组织5g以上；引产胎儿的取5g以上的组织；洁净容器包装、冰冻保存、冷藏送检。羊水取2ml以上，洁净容器包装、冷藏保存、冷藏送检。人流组织及引产胎儿人流刮宫组织的提取，取确认为绒毛的组织5g尸体检材新鲜尸体取心血。心血腐败者，取深部肌肉组织。腐败尸体，原则上尽量提取相对新鲜的深部肌肉组织组织。高度腐败尸体，可取肋软骨或者其它软骨、指甲（2枚以上）、带毛根的毛发（10根以上）。以上检材必须提取其中两种；白骨化的尸体取指甲、长骨、毛发均应提取。以上检材均应用洁净容器包装、冰冻保存、冷藏送检。尸体检材新鲜尸体取心血。对照检材根据案件需要，应提取对照样本检材，如已婚女性被人强奸，必须送该女子及其性伴侣的血样本作对照等。对照检材根据案件需要，应提取对照样本检材，如已婚女性被人强奸

血痕检验（BloodstainsTest）血痕检验血痕检验的目的：1．是否血痕2．是人血还是动物血3．血痕的个人识别4．与案情有关的其他问题血痕检验的目的：血痕检验的程序：1．肉眼检验2．预试验3．确正试验血痕检验的程序：

4．种属鉴定5．遗传标记测定6．其他检验4．种属鉴定肉眼检验预试验阴性不是血痕或被坏阳性可能是血痕确证试验（有时可省）肉眼检验预试验阴性阳性确证试验（阴性不是血痕或量太少或被破坏

阳性肯定是血痕种属试验阴性不是人血或量太少或被破坏

阳性肯定是人血痕各种动物血鉴定个人识别非遗传标记测定出血部位出血时间出血量出血者年龄出血性别一人血或多人血阴性阳性种属试验阴性阳性各种动物个人识别遗传标记测定红细胞血型血清型红细胞酶型HLADNA多态性ABOMNPRhHpGcTfGmPGMEsDGLOIEAP

ABDRDQ

DNA指纹VNTRSTRRAPD遗传标记测定红细胞血型血清型红细胞酶型第一节肉眼检验第一节肉眼检验一．血痕的部位二．血痕的颜色一．血痕的部位三．血痕的形状1．滴状2．流注状3．擦拭状4．喷溅状三．血痕的形状高等院校医药类课件-法医物证检验高等院校医药类课件-法医物证检验高等院校医药类课件-法医物证检验5．血印痕6．血泊7．血水8．隐性血痕9．其他四．血痕的范围5．血印痕四．血痕的范围

第二节预试验（PreliminaryTest）第二节预试验预试验即筛选试验，要求：1．是血痕一定呈阳性反应，预试验阴性即可认定不是血痕或血痕已被破坏。2．所需的检材量少，灵敏度高，即使肉眼看不见，也呈阳性反应。3．操作简便快速。预试验即筛选试验，要求：

血痕Hb或正铁血红素过氧化物酶活性过氧化氢水新生态氧无色化学物质有色物质氧化血痕预试验的基本原理：过氧化物酶活性过氧化氢水无色化学物质有色物质氧化血痕预试验的一联苯胺试验1原理2试剂：冰醋酸联苯胺无水乙醇饱和溶液3%过氧化氢3操作：血痕少许，置与滤纸上冰醋酸1滴联苯胺无水乙醇饱和溶液1滴3%过氧化氢1滴1-2分种不出现兰色反应立即出现兰色反应阳性不出现阴性一联苯胺试验冰醋酸1滴联苯胺无水乙醇饱和溶液1滴3%过氧化4注意事项

二酚酞试验1原理2试剂3操作三鲁米诺试验1原理：鲁米诺的碱性溶液，在过氧化氢存在下，与血红素反应发出强荧光。2试剂：3操作：4注意：4注意事项四其他预试验邻联甲苯胺试验孔雀绿试验氨基比林试验四其他预试验第三节确证试验(ConclusiveTest)第三节确证试验

血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物，确证试验阳性，表明检材中含有血红蛋白或其衍生物，可以判定为血痕。确证试验灵敏度一般不太高。常用方法：1结晶试验2显微分光镜检查：光谱检查血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物，确证试验一血色原结晶试验1原理：血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白，在还原剂作用下，正铁血红素还原为血红素，后者与变性珠蛋白或其他含氮化合物（如吡啶烟碱）等，结合，形成血色原结晶。2试剂：高山氏试剂10%NaOH3ml混合置棕色瓶中30%葡萄糖10ml吡啶3ml试剂配置好第二日天使用较好，久置则反应缓慢，甚，至失效。3操作4结果桃红色的星状菊花状或针状结晶一血色原结晶试验高等院校医药类课件-法医物证检验二氯化血红素结晶试验1原理：在酸的作用下，血红蛋白分解为正铁血红素，后者与氯离子反应生成氯化血红素结晶。2试剂：10%NaCl2ml

冰醋酸10ml无水乙醇5ml3操作4结果:冷却后镜检出现菱形或瓦片状褐色结晶。5注意：加热须小心，若加热超过142度，血红素被破坏不能形成结晶。二氯化血红素结晶试验三显微分光镜检查1原理：有色物质能吸收一定波长的光，当日光通过有色物质时，再经过分光镜时，因其中某些波长的光被吸收，便会在光谱上相应波长区域内出现黑色吸收线。血红蛋白及其衍生物均系有色物质，具很强的选择性吸收光线的性质，再分光镜下检查是否有特定的吸收线，可确定是否是血痕。2方法

三显微分光镜检查高等院校医药类课件-法医物证检验

第四节种属鉴定（SpsciesIdentification)第四节种属鉴定种属鉴定

环状沉淀反应沉淀反应免疫扩散试验血清学方法对流电泳抗球蛋白消耗试验酶联免疫吸附试验细胞学方法生化方法血红蛋白等电聚焦种属鉴定一沉淀反应1原理用异种动物学清蛋白作为抗原，免疫动物，可刺激动物产生血清抗体，后者能与相应的血清抗原发生特意性沉淀反应，而与不相应的血清蛋白则不发身生反映。用已知抗血清与被检血痕的生理盐水寝液反应，确定血痕的种属。2抗血清：抗人血红蛋白血清抗人血清蛋白血清（1）要求（1）特异性好。（2）效价达10000倍以上，10分钟内出现明显沉淀。（3）澄清透明。一沉淀反应（2）抗血清的种属特异性：

a近缘反应:

b抗血清交叉反映的消除：以纯化的抗原免疫动物，获得特异性血清。用吸收法除去血清中的交叉反应抗体。稀释抗原条整抗原抗体比例，消除抗血清的交叉反映。（3）抗血清的器官特异性

（2）抗血清的种属特异性：3检材处理4影响沉淀反应的因素5方法（1）环状沉淀反应（2）琼脂扩散实验（3）对流免疫电泳3检材处理二抗人球蛋白消耗试验1原理：人血痕浸液与抗人球蛋白血清相遇时，血痕浸液中的球蛋白就会与抗球蛋白特异性结合，抗人球蛋白血清的效价就会减少或丧失。再用经不完全抗D

（球蛋白）致敏的红细胞做指示剂，观察经吸附后的抗人球蛋白血清的效价是否下降或消逝。如已消耗，则指示细胞呈现凝集抑制，即为阳性反应。本试验是检测人血清的球蛋白，此球蛋白在人体液或分泌液中存在极少，对抗人球蛋白血清无抑制作用。二抗人球蛋白消耗试验2方法（1）红细胞致敏（2）抗人球蛋白血清的标化（3）抗人球蛋白血清浸泡血痕（4）测定吸收后抗人球蛋白血清的效价三薄层凝胶等电聚焦四其他方法2方法第五节血痕的血型测定第五节血痕的血型测定一血痕的红细胞血型测定（一）血痕的ABO血型测定1.凝集素的测定2凝集原的测定A.B.H血型物质是一种多糖体，对干燥和高温有较强的抵抗力，当红细胞变形或细胞膜碎裂，其上血型物质仍能保持与相应凝集素特异结合的能力。应此，A.B.H血型物质的检测就成为血痕ABO血型鉴定的重点。

一血痕的红细胞血型测定A吸收试验原理：血痕中的血型物质可以从抗血清中吸收相应的凝集素，如A型物质可以吸收A凝集素,B型物质可以吸收B凝集素。将被检血痕分别与已知效价的抗血清进行反应，血痕中的血型物质与相应的凝集素特异性结合，使抗血清中该凝集素效价减低或消失。吸收后再用相应红细胞测定其效价，看其效价的变化，便可判断血痕的血型。

A吸收试验各种各样的生物检材分泌物获得检材中细胞经物理化学作用释放DNA经过一系列实验操作及仪器分析得到分型结果应用PCR反应的对DNA进行几何级数放大统计学计算得出结论各种各样的生物检材分泌物获得检材经物理化学作用释放DNA经过

DNA分型的应用以人找物

发现犯罪嫌疑人在先，获取证实及犯罪事实的物证再后。以物找人

发现证实犯罪的物证在先，获取犯罪嫌疑人再后。以物找物

对发生在不同时间、不同地点的案件所获取的犯罪物证进行串并。（如精斑、血迹、毛发等检材的串并）以人找人

尸源的寻找与认定。（如无名尸、碎尸、空难、焚尸等的认定）DNA分型的应用

精斑检验

SEMINALSTAINTEST精斑检验案情

强奸猥亵非法性关系离婚检材

裤头卫生纸床单毛巾阴道拭子新鲜精液鉴定

是否精斑

个人识别生育能力鉴定案情一、精液的组成精子精浆

一、精液的组成

精浆水90%

有机物精素黄素胆碱卵磷脂蛋白质氨基酸酶离子Na+K+Ca++P++Cl-Zn+SO4=特有蛋白P30

β—MSPβ—SM

α2

–SGP血型物质ABHGcTfGmKmAcpPGM1DIA3

二、检材处理精液4度保存晾干制成精斑

精斑提取

晾干纸袋保存对照检材唾液血液（血痕）女子、丈夫、嫌疑人。二、检材处理精子的形态正常精子分头、体、尾三部分，长50－60um,外形似蝌蚪。头部正面观呈卵圆形，侧面观呈扁平形，由细胞核和顶体组成。头长3-5um，宽2-3um，厚1-2um。颈部圆柱形，长约6um。尾部细长而弯曲，长达40-50um。HE染色：精子头呈蓝色，头前半部不着色或浅染，尾部呈红色。可见异型精子。精子的形态正常精子分头、体、尾三部分，长50－60um,外形高等院校医药类课件-法医物证检验精子在女性生殖道的检测时限性交后阴道内3-8H,宫颈2-5天，子宫、输卵管1-10天可检活精子。阴道内3-9天，宫颈17天可检见死精子。精子检出时限与被害人的体位、活动情况有关。精子检出率的高低与阴道内容物的提取部位有关，宫颈刮片和阴道后穹隆擦拭物的精子检出率较高。精子在女性生殖道的检测时限性交后阴道内3-8H,宫颈2-5天

三、精液检验

一般性状

乳白色，粘稠状液体,PH7.2—8.9

比重：1.021—1.040，渗透压：0.55—0.58数量

2-2.5ml/次，1-1.5亿个/ml，总数4-6亿个形态、活动度。

头、体、尾，50-60um。三、精液检验

不正常的标准

数量：<0.6亿/ml，总数<1亿总量<1.5ml

活动不良的精子>40%

畸型精子>15%不正常的标准四、精斑检验一）肉眼检查

二）预实验三）确证实验四）血型测定

四、精斑检验一）肉眼检查

颜色形态数量分布陈旧度一）肉眼检查二）精斑预示验1.紫外线检查原理：紫外线黄素银白色荧光

400-500nm方法及结果二）精斑预示验特点：简单、快速，不破坏检材；确定精斑的分布，范围。特异性差。特点：2.Acp实验原理

Acp

磷酸苯二钠萘酚

+

氨基安替比林结果铁氢化钾红色醌类2.Acp实验试剂缓冲液枸橼酸1.4g1N氢氧化钠12.5ml

磷酸苯二钠0.2g4-甲基安替笔林0.6g

加蒸馏水至100ml

显色液

1N氢氧化钠17.7ml

碳酸氢钠1.4g

铁氰化钾3.6g

加蒸溜水至100ml

试剂方法：检材+缓冲液

37℃

，5min。显色液深红色+淡黄色—方法：特点阳性结果说明含有酸性磷酸酶，可能是精斑。阴性结果说明检材不是精斑或精斑酸性磷酸酶被破坏。由于酸性磷酸酶非前列腺独有，因此阳性结果不可轻易认定为精斑。室温条件下酸性磷酸酶较稳定。特点阳性结果说明含有酸性磷酸酶，可能是精斑。阴性结果说明检材三）其他方法碘化碘甲结晶实验胆碱+碘碘胆碱结晶苦味酸结晶实验精素+苦味酸精素苦味酸结晶锌的检出精液中锌的含量最高三）其他方法三、精斑的确证实验一）形态学检查精子的检出二）免疫学检验抗人精沉淀实验抗P30沉淀实验其他三）生化检验LDH—XGD—DAP

三、精斑的确证实验一）精子的检出方法结果

HE染色顶部不着色蓝颈红尾品红-美蓝红头蓝尾藻红染色红色确证标准一个完整的精子数个典型的精子头一）精子的检出二）免疫学方法抗人精血清沉淀实验抗P30血清沉淀实验高度的种属特异性与器官特异性无精子的精斑亦可为阳性

P30性质稳定检出时间长其他抗β—微精蛋白沉淀实验抗P30单克隆抗体ELISA法二）免疫学方法方法环状沉淀免疫扩散酶标抗体方法单向扩散双向扩散单向扩散三）生化检验1、LDH—X带检测

LDH—1LDH—2LDH—3LDH—XLDH—4

LDH—5mw三）生化检验2、GP—DAP（甘氨酰脯氨酰二肽基氨肽酶）1）GP—DAP活性；精液4171Iu/L平均。阴道液、初乳、血清、唾液、尿液等<100Iu/L2、GP—DAP（甘氨酰脯氨酰二肽基氨肽酶）2）电泳区带精液阴道液初乳血清

2）电泳区带四、种属鉴定抗人精血清沉淀反应抗P30血清沉淀实验四、种属鉴定抗人精血清沉淀反应五、血型测定

ABO血型酶型

DNA五、血型测定一）ABO血型测定中和实验

ELISA法一）ABO血型测定二）酶型蛋白型测定

PGM1FuGLO1G6PDAKPePAORM1GcGmKmDIA3r—GGT二）酶型蛋白型测定精液Fu等电聚焦分型

1-12-12-2精液Fu等电聚焦分型精斑ORM1等电聚焦分型

1-12-12-2

精斑ORM1等电聚焦分型精斑DIA3电泳分型

1-12-12-2精斑DIA3电泳分型精斑r-GGT电泳分型

1-12-12-1精斑r-GGT电泳分型三）DNA分型混合斑（精子、阴道上皮细胞

SDS、蛋白酶K完整精子DNA（阴道上皮细胞）

DDT二次消化SDS、蛋白酶DNA（精子）三）DNA分型混合斑（精子、混合斑DNA提取

1)取适量含有混合斑的检测，剪碎后放入5ml小烧杯中，加入3ml纯水、300μl10%SDS及150μl5mg/ml的PK酶，用牙签搅拌后，放入37℃水浴6小时以上（最好过夜）。2)

将水浴好的检材移入1.5ml离心管（检材载体用一次性注射器挤压后去除），13,000rpm离心3分钟，去上清，每管加1.4ml纯水，振荡，13000rpm离心3分钟。洗三次后，移入0.5ml离心管中，13000rpm离心3分钟，弃上清。

混合斑DNA提取1)取适量含有混合斑的检测，剪碎后放入5混合斑DNA提取3)

向沉淀物的离心管中加入200μl5％的Chelex-100（可根据检材量的多少进行调节），4μl5mg/ml的PK酶及8μl1M的DTT（PK酶及DTT的终浓度分别为100μg/ml和0.039M），振荡后56℃保温过夜。次日取出振荡，100℃保温8分钟，振荡，13000rpm离心3分钟，上清用于PCR扩增或放4℃保存备用。混合斑DNA提取3)

向沉淀物的离心管中加入200μl5％Y-STR基因座的特点12/12Y-STR基因座的特点12/12第16章法医物证检验第16章各种生物检材

血液血痕精斑唾液软组织硬组织（骨、牙）毛发指甲各种生物检材提取活体检材提取活体血样时，采集静脉或耳垂血。将新鲜血液滴在消毒纱布或中速滤纸上，约2cm2以上，在通风干燥的地方晾干。提取口腔脱落上皮细胞时，应先用清水漱口，然后用特制的口腔提取拭子或消毒棉签反复刮拭左右两侧颊粘膜，置通风干燥的处晾干。毛发应拔取1-3根，尽量取毛根。以上检材均用纸袋包装。提取活体检材血迹检材对衣裤、鞋帽以及刀、斧、石块等附着疑有血痕的小件物品要整件提取。附有血痕又可剪切的大件物品，如地毯、被褥、床单等，可将血痕连同其周边的部分一起剪下；衣柜、墙壁、地面等不能移动的物件上附着的血迹，可刮取或用生理盐水浸湿的纱布提取，血痕量少时，应用少量的棉纱线提取，以尽量提高棉纱线上血痕的浓度。血痕检材分别用纸袋包装，不能用塑料袋包装或放入密封容器内。血迹检材对衣裤、鞋帽以及刀、斧、石块等附着疑有血痕的小件物品精斑（ 混合斑）提取阴道内容物，应用棉签在阴道穹窿部提取，至少提取3支以上，并标明提取序号，分别晾干、分开包装。怀疑有性侵害的尸体，必要时还应注意会阴、下腹、口腔等部位有无精斑，并分别提取。怀疑有性侵害的现场，必须提取怀疑有精斑的所有检材，如床单、被褥、卫生纸、避孕套、内裤、衣物等。应该分别提取、分别晾干、分开包装。精斑（ 混合斑）提取阴道内容物，应用棉签在阴道穹窿部提取，至毛发毛发要用镊子夹取，每一根或一组毛发应分别用纸折叠后置纸袋内送检。唾液斑检材如烟头、果核、香口胶同样要用镊子夹取，分别包装。毛发毛发要用镊子夹取，每一根或一组毛发应分别用纸折人流组织及引产胎儿人流刮宫组织的提取，取确认为绒毛的组织5g以上；引产胎儿的取5g以上的组织；洁净容器包装、冰冻保存、冷藏送检。羊水取2ml以上，洁净容器包装、冷藏保存、冷藏送检。人流组织及引产胎儿人流刮宫组织的提取，取确认为绒毛的组织5g尸体检材新鲜尸体取心血。心血腐败者，取深部肌肉组织。腐败尸体，原则上尽量提取相对新鲜的深部肌肉组织组织。高度腐败尸体，可取肋软骨或者其它软骨、指甲（2枚以上）、带毛根的毛发（10根以上）。以上检材必须提取其中两种；白骨化的尸体取指甲、长骨、毛发均应提取。以上检材均应用洁净容器包装、冰冻保存、冷藏送检。尸体检材新鲜尸体取心血。对照检材根据案件需要，应提取对照样本检材，如已婚女性被人强奸，必须送该女子及其性伴侣的血样本作对照等。对照检材根据案件需要，应提取对照样本检材，如已婚女性被人强奸

血痕检验（BloodstainsTest）血痕检验血痕检验的目的：1．是否血痕2．是人血还是动物血3．血痕的个人识别4．与案情有关的其他问题血痕检验的目的：血痕检验的程序：1．肉眼检验2．预试验3．确正试验血痕检验的程序：

4．种属鉴定5．遗传标记测定6．其他检验4．种属鉴定肉眼检验预试验阴性不是血痕或被坏阳性可能是血痕确证试验（有时可省）肉眼检验预试验阴性阳性确证试验（阴性不是血痕或量太少或被破坏

阳性肯定是血痕种属试验阴性不是人血或量太少或被破坏

阳性肯定是人血痕各种动物血鉴定个人识别非遗传标记测定出血部位出血时间出血量出血者年龄出血性别一人血或多人血阴性阳性种属试验阴性阳性各种动物个人识别遗传标记测定红细胞血型血清型红细胞酶型HLADNA多态性ABOMNPRhHpGcTfGmPGMEsDGLOIEAP

ABDRDQ

DNA指纹VNTRSTRRAPD遗传标记测定红细胞血型血清型红细胞酶型第一节肉眼检验第一节肉眼检验一．血痕的部位二．血痕的颜色一．血痕的部位三．血痕的形状1．滴状2．流注状3．擦拭状4．喷溅状三．血痕的形状高等院校医药类课件-法医物证检验高等院校医药类课件-法医物证检验高等院校医药类课件-法医物证检验5．血印痕6．血泊7．血水8．隐性血痕9．其他四．血痕的范围5．血印痕四．血痕的范围

第二节预试验（PreliminaryTest）第二节预试验预试验即筛选试验，要求：1．是血痕一定呈阳性反应，预试验阴性即可认定不是血痕或血痕已被破坏。2．所需的检材量少，灵敏度高，即使肉眼看不见，也呈阳性反应。3．操作简便快速。预试验即筛选试验，要求：

血痕Hb或正铁血红素过氧化物酶活性过氧化氢水新生态氧无色化学物质有色物质氧化血痕预试验的基本原理：过氧化物酶活性过氧化氢水无色化学物质有色物质氧化血痕预试验的一联苯胺试验1原理2试剂：冰醋酸联苯胺无水乙醇饱和溶液3%过氧化氢3操作：血痕少许，置与滤纸上冰醋酸1滴联苯胺无水乙醇饱和溶液1滴3%过氧化氢1滴1-2分种不出现兰色反应立即出现兰色反应阳性不出现阴性一联苯胺试验冰醋酸1滴联苯胺无水乙醇饱和溶液1滴3%过氧化4注意事项

二酚酞试验1原理2试剂3操作三鲁米诺试验1原理：鲁米诺的碱性溶液，在过氧化氢存在下，与血红素反应发出强荧光。2试剂：3操作：4注意：4注意事项四其他预试验邻联甲苯胺试验孔雀绿试验氨基比林试验四其他预试验第三节确证试验(ConclusiveTest)第三节确证试验

血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物，确证试验阳性，表明检材中含有血红蛋白或其衍生物，可以判定为血痕。确证试验灵敏度一般不太高。常用方法：1结晶试验2显微分光镜检查：光谱检查血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物，确证试验一血色原结晶试验1原理：血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白，在还原剂作用下，正铁血红素还原为血红素，后者与变性珠蛋白或其他含氮化合物（如吡啶烟碱）等，结合，形成血色原结晶。2试剂：高山氏试剂10%NaOH3ml混合置棕色瓶中30%葡萄糖10ml吡啶3ml试剂配置好第二日天使用较好，久置则反应缓慢，甚，至失效。3操作4结果桃红色的星状菊花状或针状结晶一血色原结晶试验高等院校医药类课件-法医物证检验二氯化血红素结晶试验1原理：在酸的作用下，血红蛋白分解为正铁血红素，后者与氯离子反应生成氯化血红素结晶。2试剂：10%NaCl2ml

冰醋酸10ml无水乙醇5ml3操作4结果:冷却后镜检出现菱形或瓦片状褐色结晶。5注意：加热须小心，若加热超过142度，血红素被破坏不能形成结晶。二氯化血红素结晶试验三显微分光镜检查1原理：有色物质能吸收一定波长的光，当日光通过有色物质时，再经过分光镜时，因其中某些波长的光被吸收，便会在光谱上相应波长区域内出现黑色吸收线。血红蛋白及其衍生物均系有色物质，具很强的选择性吸收光线的性质，再分光镜下检查是否有特定的吸收线，可确定是否是血痕。2方法

三显微分光镜检查高等院校医药类课件-法医物证检验

第四节种属鉴定（SpsciesIdentification)第四节种属鉴定种属鉴定

环状沉淀反应沉淀反应免疫扩散试验血清学方法对流电泳抗球蛋白消耗试验酶联免疫吸附试验细胞学方法生化方法血红蛋白等电聚焦种属鉴定一沉淀反应1原理用异种动物学清蛋白作为抗原，免疫动物，可刺激动物产生血清抗体，后者能与相应的血清抗原发生特意性沉淀反应，而与不相应的血清蛋白则不发身生反映。用已知抗血清与被检血痕的生理盐水寝液反应，确定血痕的种属。2抗血清：抗人血红蛋白血清抗人血清蛋白血清（1）要求（1）特异性好。（2）效价达10000倍以上，10分钟内出现明显沉淀。（3）澄清透明。一沉淀反应（2）抗血清的种属特异性：

a近缘反应:

b抗血清交叉反映的消除：以纯化的抗原免疫动物，获得特异性血清。用吸收法除去血清中的交叉反应抗体。稀释抗原条整抗原抗体比例，消除抗血清的交叉反映。（3）抗血清的器官特异性

（2）抗血清的种属特异性：3检材处理4影响沉淀反应的因素5方法（1）环状沉淀反应（2）琼脂扩散实验（3）对流免疫电泳3检材处理二抗人球蛋白消耗试验1原理：人血痕浸液与抗人球蛋白血清相遇时，血痕浸液中的球蛋白就会与抗球蛋白特异性结合，抗人球蛋白血清的效价就会减少或丧失。再用经不完全抗D

（球蛋白）致敏的红细胞做指示剂，观察经吸附后的抗人球蛋白血清的效价是否下降或消逝。如已消耗，则指示细胞呈现凝集抑制，即为阳性反应。本试验是检测人血清的球蛋白，此球蛋白在人体液或分泌液中存在极少，对抗人球蛋白血清无抑制作用。二抗人球蛋白消耗试验2方法（1）红细胞致敏（2）抗人球蛋白血清的标化（3）抗人球蛋白血清浸泡血痕（4）测定吸收后抗人球蛋白血清的效价三薄层凝胶等电聚焦四其他方法2方法第五节血痕的血型测定第五节血痕的血型测定一血痕的红细胞血型测定（一）血痕的ABO血型测定1.凝集素的测定2凝集原的测定A.B.H血型物质是一种多糖体，对干燥和高温有较强的抵抗力，当红细胞变形或细胞膜碎裂，其上血型物质仍能保持与相应凝集素特异结合的能力。应此，A.B.H血型物质的检测就成为血痕ABO血型鉴定的重点。

一血痕的红细胞血型测定A吸收试验原理：血痕中的血型物质可以从抗血清中吸收相应的凝集素，如A型物质可以吸收A凝集素,B型物质可以吸收B凝集素。将被检血痕分别与已知效价的抗血清进行反应，血痕中的血型物质与相应的凝集素特异性结合，使抗血清中该凝集素效价减低或消失。吸收后再用相应红细胞测定其效价，看其效价的变化，便可判断血痕的血型。

A吸收试验各种各样的生物检材分泌物获得检材中细胞经物理化学作用释放DNA经过一系列实验操作及仪器分析得到分型结果应用PCR反应的对DNA进行几何级数放大统计学计算得出结论各种各样的生物检材分泌物获得检材经物理化学作用释放DNA经过

DNA分型的应用以人找物

发现犯罪嫌疑人在先，获取证实及犯罪事实的物证再后。以物找人

发现证实犯罪的物证在先，获取犯罪嫌疑人再后。以物找物

对发生在不同时间、不同地点的案件所获取的犯罪物证进行串并。（如精斑、血迹、毛发等检材的串并）以人找人

尸源的寻找与认定。（如无名尸、碎尸、空难、焚尸等的认定）DNA分型的应用

精斑检验

SEMINALSTAINTEST精斑检验案情

强奸猥亵非法性关系离婚检材

裤头卫生纸床单毛巾阴道拭子新鲜精液鉴定

是否精斑

个人识别生育能力鉴定案情一、精液的组成精子精浆

一、精液的组成

精浆水90%

有机物精素黄素胆碱卵磷脂蛋白质氨基酸酶离子Na+K+Ca++P++Cl-Zn+SO4=特有蛋白P30

β—MSPβ—SM

α2

–SGP血型物质ABHGcTfGmKmAcpPGM1DIA3

二、检材处理精液4度保存晾干制成精斑

精斑提取

晾干纸袋保存对照检材唾液血液（血痕）女子、丈夫、嫌疑人。二、检材处理精子的形态正常精子分头、体、尾三部分，长50－60um,外形似蝌蚪。头部正面观呈卵圆形，侧面观呈扁平形，由细胞核和顶体组成。头长3-5um，宽2-3um，厚1-2um。颈部圆柱形，长约6um。尾部细长而弯曲，长达40-50um。HE染色：精子头呈蓝色，头前半部不着色或浅染，尾部呈红色。可见异型精子。精子的形态正常精子分头、体、尾三部分，长50－60um,外形高等院校医药类课件-法医物证检验精子在女性生殖道的检测时限性交后阴道内3-8H,宫颈2-5天，子宫、输卵管1-10天可检活精子。阴道内3-9天，宫颈17天可检见死精子。精子检出时限与被害人的体位、活动情况有关。精子检出率的高低与阴道内容物的提取部位有关，宫颈刮片和阴道后穹隆擦拭物的精子检出率较高。精子在女性生殖道的检测时限性交后阴道内3-8H,宫颈2-5天

三、精液检验

一般性状

乳白色，粘稠状液体,PH7.2—8.9

比重：1.021—1.040，渗透压：0.55—0.58数量

2-2.5ml/次，1-1.5亿个/ml，总数4-6亿个形态、活动度。

头、体、尾，50-60um。三、精液检验

不正常的标准

数量：<0.6亿/ml，总数<1亿总量<1.5ml

活动不良的精子>40%

畸型精子>15%不正常的标准四、精斑检验一）肉眼检查

二）预实验三）确证实验四）血型测定

四、精斑检验一）肉眼检查

颜色形态数量分布陈旧度一）肉眼检查二）精斑预示验1.紫外线检查原理：紫外线黄素银白色荧光

400-500nm方法及结果二）精斑预示验特点：简单、快速，不破坏检材；确定精斑的分布，范围。特异性差。特点：2.Acp实验原理

Acp

磷酸苯二钠萘酚

+

氨基安替比林结果铁氢化钾红色醌类2.Acp实验试剂缓冲液枸橼酸1.4g1N氢氧化钠12.5ml

磷酸苯二钠0.2g4-甲基安替笔林0.6g

加蒸馏水至100ml

显色液

1N氢氧化钠17.7ml

碳酸氢钠1.4g

铁氰化钾3.6g

加蒸溜水至100ml

试剂方法：检材+缓冲液

37℃

，5min。显色液深红色+淡黄色—方法：特点阳性结果说明含有酸性磷酸酶，可能是精斑。阴性结果说明检材不是精斑或精斑酸性磷酸酶被破坏。由于酸性磷酸酶非前列腺独有，因此阳性结果不可轻易认定为精斑。室温条件下酸性磷酸酶较稳定。特点阳性结果说明含有酸性磷酸酶，可能是精斑。阴性结果说明检材三）其他方法碘化碘甲结晶实验胆碱+碘碘胆碱结晶苦味酸结晶实验精素+苦味酸精素苦味酸结晶锌的检出精液中锌的含量最高三）其他方法三、精斑的确证实验一）形态学检查精子的检出二）免疫学检验抗人精沉淀实验抗P30沉淀实验其他三）生化检验LDH—XGD—DAP

三、精斑的确证实验一）精子的检出方法结果

HE染色顶部不着色蓝颈红尾