生化选择(考研版)

生化选择1.20种氨基酸的名称，分类含羟基：Ser，Thr，Tyr含酚基：Tyr含硫：Met，Cys最简单的氨基酸：Gly亚氨基酸：Pro杂环氨基酸：Pro,Trp，His（含吲哚环：Trp，含咪唑环：His）芳香族氨基酸：PheTrpTyr（老方本色）酸性氨基酸（含两个羟基）：AspGlu碱性氨基酸：Lys，Arg，His2.碱基DNA:A,T,C,GRNA:U,A,G,C3.必须氨基酸携一两本淡色书来（缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，色氨酸，苏氨酸，赖氨酸）4.蛋白质变性特点eq\o\ac(○,1)生物活性丧失eq\o\ac(○,2)理化活性突变：失去结晶能力，溶解度降低，粘度增加，易被水解5.核膜变性特点eq\o\ac(○,1)生物活性丧失eq\o\ac(○,2)理化活性改变：粘度降低，增色效应（260nm）eq\o\ac(○,3)如果核膜变性特点为热变性，变性特点:Tm值，跃变6.分子杂交Southern印迹法研究对象：DNANorthern印迹法研究对象：RNAWestern印迹法研究对象：蛋白质7.测定蛋白质含量的方法原理eq\o\ac(○,1)克氏定氨法（含氮量=16%）eq\o\ac(○,2)福林-盼试剂法eq\o\ac(○,3)双缩脲法eq\o\ac(○,4)紫外分光度法8.测定蛋白质分子量的方法原理eq\o\ac(○,1)凝胶过滤（测整个分子）eq\o\ac(○,2)SDS（测单链/亚基）eq\o\ac(○,3)生物质谱（最准确）9.蛋白质一级结构测定原理eq\o\ac(○,1)N末端氨基酸分析：二硝基苯胺法DNFB，二甲氨基萘磺酸氯法DNA-CL,Edman降解法（可以逐个切下AA）,氨肽酶法（理论可逐个切下AA，实际困难）eq\o\ac(○,2)C末端氨基酸分析：肽解法，羧肽酶法eq\o\ac(○,3)大分子多肽氨基酸分析：切成小肽片，找出重叠顺序eq\o\ac(○,4)核酸推导法10.蛋白质分离纯化原理eq\o\ac(○,1)根据分子形状和分子量的不同分离纯化方法透析和超滤凝胶过滤密度梯度离心eq\o\ac(○,2)根据分子电离和性质的分离纯化方法电泳离子交换层析eq\o\ac(○,3)根据分子极性大小和溶解度不同的分离方法等电点沉淀盐析沉淀低温有机溶剂测定eq\o\ac(○,4)根据分子配基特异性不同的分离纯化方法亲和层析凝胶过滤（利用蛋白质分子量的差异，使其通过具有分子筛性质的凝胶，小分子进入凝胶，大分子排阻其外，洗脱时大分子先流出，小分子后流出，洗脱液体积是分子量对数的线性函数）电泳（带电质点在电场中，向电荷相反的方向移动，蛋白质除在等电点时具有电泳性质）eq\o\ac(○,a)PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）：以聚丙烯酰胺凝胶带作为支持物，具有电泳和凝胶过滤的特点（电泳，浓缩，分子筛），分辨率高。eq\o\ac(○,b)等电聚焦电泳：以两性电解质作为支持物，形成PH梯度，蛋白质在此系统中电泳，在于其等电点相应的PH梯度集中，达到分离的目的，常用于蛋白质分离，纯化，分辨率高。eq\o\ac(○,c)免疫电泳：把电泳技术和抗原抗体反应相结合，以琼脂或琼脂凝胶作为支持物，先将抗原中各蛋白质组分经凝胶电泳分开，然后加入特异性抗体，经扩散可造成免疫沉淀反应，常用于蛋白质鉴定，纯度检查。eq\o\ac(○,d)二维电泳：第一向为等电聚焦（等电点信息），第二向为SDS（分子量信息），样品经过电荷和质量的两次分离后，得到分子的等电点和分子量信息，一次可分离成千上万种蛋白质，是目前电泳技术中分辨率最高，信息量最多的技术。离子交换（以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时，结合力大小差别而达到分离目的，常用于大分子武职的分离纯化）11.连接键，结构稳定的键糖（直连：α-1，4糖苷键；支链：α-1，6糖苷键）蛋白质（一级：肽键/二硫键；二级：氢键；三级：疏水键/离子键/氢键/范德华力；四级：疏水键为主）核酸（一级：3’，5’-磷酸二酯键；二级：碱基堆积为主/氢键/离子键）12.糖代表物，及特点eq\o\ac(○,1)淀粉（植物多糖）eq\o\ac(○,2)糖原（动物多糖：主要储存于肌肉/肝脏）eq\o\ac(○,3)葡聚糖（酵母菌/细菌多糖；代血浆）eq\o\ac(○,4)纤维素（植物细胞壁/支撑组织；如二乙氨基乙基纤维素（DEAE）为阴离子交换纤维素（阳离子光被洗脱），羧甲基纤维素（CMC）为阳离子交换纤维素（阴离子光被洗脱）；β-1，4糖苷键，哺乳动物不能水解，反刍动物可以水解；吸附物质维持正常菌群平衡，保水刺激肠道促进排便）eq\o\ac(○,5)琼脂（凝固剂）eq\o\ac(○,6)粘多糖（透明质：酸粘合保护细胞；硫酸软骨素：降血脂；肝素：抗凝血）eq\o\ac(○,7)几丁质（甲壳素/壳多糖）eq\o\ac(○,8)细菌多糖（肽聚糖：细菌细胞壁，青霉素抑菌靶点；脂多糖：革兰阴性菌细胞壁）13.脂肪代表物及其特点eq\o\ac(○,1)磷脂（卵磷脂：抗脂肪肝；脑磷脂：与血液凝固有关；鞘磷脂：磷酸胆碱为主要成分）eq\o\ac(○,2)糖脂（脑苷脂：细胞膜重要组分；神经节苷脂：酸性，人类唾液酸，存在于大脑灰质/神经节/脾/红细胞）eq\o\ac(○,3)类脂（胆固醇：动脉粥样硬化/冠心病/胆结石，7-脱氢胆固醇经紫外线照射生成VD3帮助Ca2+吸收；胆酸：熊去氧胆酸为胆结石溶解药，去氢胆酸为利胆药；胆汁酸：酰胺键，胆固醇主要代谢终产物，肝合成胆分泌，胆汁有苦味的主要原因，以胆盐形式存在，胆盐为乳化剂帮助脂肪消化吸收）14.结构及特点eq\o\ac(○,1)蛋白质蛋白质一级结构=共价结构=基本结构：（连接键：肽键，少量二硫键）不同种类，不同数量的氨基酸在多肽链中的连接方式和排列顺序。蛋白质二级结构：（主要次级键：氢键）指多肽链的主骨架中，若干肽单位各自沿一定的轴盘旋或折叠，以氢键为主要次级键而形成的有规则的构象。主要包括：α-螺旋：右手螺旋，一周3.6个AA残基，螺距0.54nm；氢键在第一与第四个肽单位之间，平行于中心轴；R侧链在外侧β-片层：结构伸展；折叠成锯齿状；两条或两条以上肽键平行或反平行排列；氢键形成于相邻肽链之间；R侧链在片层上下β-转角：回折180度，4个AA组成；氢键在第一与第四个AA之间；常出现在连接反平行β一片层端头无规线团：肽平面不规则排列蛋白质三级结构:(稳定三级结构的次级键：疏水键，氢键，盐碱，范德华力)蛋白质在二级结构，超二级结构，结构域的基础上，进一步的盘绕、折叠，从而产生特定的空间结构。蛋白质的四级结构：（稳定的四级结构的次级键：主要为疏水键）两个或者两个以上的结构可以相同也可以不同的亚基之间相互作用，彼此以非共价键相连而形成的更复杂的构象。eq\o\ac(○,2)核酸DNADNA一级结构：（连接键3’，5’-磷酸二酯键）比较真核生物染色质DNA与原核生物DNA一级结构特点真核生物：a.重复顺序（高度重复顺序不编码蛋白质，中度重复顺序编码组蛋白，单一顺序编码其他蛋白质）；b.间隔顺序与插入顺序；c.回文结构原核生物：a.基因重叠；b.基因连续；c.转录得到的mRNA为多顺贩子DNA二级结构：（二级结构稳定因素：碱基堆积力为主/氢键/离子键）DNA二级结构-双螺旋结构模型结构要点：watson和crick1953年提出；DNA二级结构的主要模型，主链由两条右手螺旋、反向平行的脱氧核苷酸链构成，两条链由碱基间氢键相连，A=TC≡G；磷酸基和脱氧核苷酸在外侧，碱基在内侧，糖环平面与碱基平面相互垂直；直径2nm，相邻碱基对距离0.34nm，相邻核苷酸夹角36度，一圈10个碱基对，螺距3.4nm；表面有大沟和小沟；碱基堆积力，氢键，离子键使其结构稳定；与生物学功能的关系：第一次阐述了遗传信息的储存、传递方式，DNA复制机理，大沟和小沟有利于DNA和蛋白质的相互识别DNA三级结构：超螺旋eq\o\ac(○,3)核酸RNAtRNA一级结构：70-90个核苷酸；较多稀有碱基；3’端有-CCA-OHtRNA二级结构-三叶草形：氨基酸臂，DHV环，反密码环，额外环，TψC环tRNA三级结构-倒L形：横（氨基酸臂，TψC臂），竖（DHV臂，反密码臂）比较真核生物mRNA与原核生物mRNA结构特点真核mRNA单顺反子转录翻译分开3端有polyA,5＇端有帽子结构代谢慢，半衰期长原核mRNA多顺反子转录翻译耦合包括光导区，翻译区，非翻译区代谢快，半衰期短rRNA（略）eq\o\ac(○,4)其他比较DNA与RNA的结构特点DNARNA名称脱氧核糖核酸核糖核酸分布细胞核（主），线粒体细胞质(主)，细胞核分类绝大多数生物：双链，线性DNA少数病毒：单链，环状DNA细胞质：mRNA，tRNA，Rrna细胞核：HnRNA，SnRNA,ChRNA功能遗传的物质基础，贮存生物信息参与蛋白质的生物合成组成脱氧核糖TACG核糖UACG连接键3＇，5＇-磷酸二酯键3＇，5＇-磷酸二酯键分子结构一级结构是指脱氧核糖核苷酸的数量和排列顺序二级结构为双螺旋结构三级结构为超螺旋结构，真核细胞中为核小体结构一级结构指核糖核苷酸的数量和排列顺序二级结构是发卡型的单链结构，也有局部的小双螺旋结构。tRNA的二级结构为三叶草型tRNA的三级结构为倒L型对碱的稳定性没有2＇-OH，不易被碱水解有2＇-OH，易被碱水解生物学功能遗传物质的储存和携带者参与蛋白质合成哪些方法可以区别分子量相同的DNA和RNA？1.用专一性的核糖核酸酶（RNase）和脱氧核糖核酸酶（DNase）区分2.用碱水解，RNA有2＇-OH，易被碱水解；DNA没有2＇-OH，不易被碱水解3.酸水解后，层析法或者电泳法分析单核苷酸，含U为RNA，含T为DNA4.颜色反应，RNA中核糖脱水后，与地衣酚反应，呈深绿色；DNA中的脱氧核糖脱水后，与二苯胺反应，呈蓝色15.P/O比H原子经过呼吸链传递最终与氧结合生成水，同时释放能量用于ADP磷酸化生成ATP，经此过程没消耗1mol氧原子所需消耗无机磷的摩尔数（也是生成ATP的摩尔数）称为P/O比值，如NADH的磷氧比值是3，FADHZ的磷氧比值是216.蛋白质/氨基酸等电点（PI），及其计算1.使蛋白质所带正负电荷相等，净电荷为0时的溶液PH值。2.酸性，碱性氨基酸比例不同，PI不同3.PH<PI,蛋白质带正电；PH=PI蛋白质不带电/沉淀；PH>PI,蛋白质带负电17.疾病原因eq\o\ac(○,1)分子病-镰刀状红细胞贫血症（红血蛋白的β链第6位，正常应为谷氨酸（亲水性），患者为缬氨酸（疏水性），表现为患者血红蛋白带氧能力降低，易粘合沉淀，红细胞被扭曲成镰刀状，易溶血）eq\o\ac(○,2)酶缺陷病苯丙酮尿症（缺乏苯丙氨酸羟化酶）白化病（缺乏酪氨酸酶）尿黑酸症（缺乏尿黑酸氧化酶）eq\o\ac(○,3)高血氨症病因：肝功能损伤，尿素合成受阻18.重要药物及符号SOD超氧化物歧化酶（防御超氧离子对人体的侵害）1.人体防御的内外环境中，超氧离子对人体侵害的酶2.半衰期短，以Cu2+Zn2+为辅基3.可用于治疗由于超氧离子而引起的疾病GSH谷胱苷肽（抗氧剂，保护-SH基，保护红细胞膜的完整性）1.还原型GSH体内重要的抗氧化剂，其还原量由NADPH+H+提供2作用：保护-SH基的还原性。在红细胞内，它保护红细胞膜蛋白的完整性（若GSH不能保持还原态，红细胞易于破裂，发生溶血性黄疸，常在食用黄豆后诱发，故称为蚕豆病）19.酶活力1.酶催化一定化学反应的能力2.其大小用一定条件下他所催化的化学反应速率（酶活力单位）表示，反应速度越大，酶活力越大20.比活力1.酶的纯度用比活力表示，比活力越高，酶越纯2.每毫克蛋白所具有的酶的活力单位数21.米氏常数1.用Km值表示2.酶促反应速度达到最大反应数独一半时底物的浓度3.Km为酶的特征性常数，只与酶的性质有关，与酶浓度无关，不同的酶有不同的Km4.Km越小，表示酶对底物的亲和力越大22.竞争性抑制及其动力学效应1.抑制剂（I）和底物（S）竞争酶（E）的同一个部位结合，相互排斥，E只能与I,S之一结合，ES减少，导致产物减少2.酶不能同时与I和S结合，不存在IES复合体3.I存在时,Vmax不变，Km增加4.抑制程度只与【I】成正比，与【S】成反比，增加【S】可解除抑制5如，磺胺类药物23.非竞争性抑制，及其动力学效应1.抑制剂（I）和底物（S）竞争酶（E）的不同部位结合，I与S互不相关，记不排斥也不促进，S能与游离E结合也能与EI结合，但IES不能释放出产物2.I存在时，Vmax变小，Km不变3.抑制程度只与【I】成正比，与【S】无关24.酶专一性（第六版书P133-134）25.转氨酶的辅酶磷酸吡哆醛（=VB6的磷酸酯）26.代谢限速酶场所转运重要联系点代谢物（丙酮酸、乙酰COA、α酮戊二酸、6-磷酸葡萄糖）抗代谢物（什么代谢物？抑制什么酶）一碳基团合成原料水解酶作用点酶作用位点胃蛋白酶酸性-芳香胰蛋白酶碱