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第一章免疫学概论GeneralityofImmunology第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：免疫的概念及免疫器官与组织的概念和组成熟悉：免疫系统的生理功能，了解：免疫学的发展简史及免疫学技术在临床医学检验中的应用。第二部分测试题一、选择题：1．机体免疫稳定功能低下，可导致（C）A．免疫缺陷病B．免疫增殖病C．自身免疫病D．恶性肿瘤2．免疫监视功能异常可导致（C）A．超敏反应B．自身免疫病C．肿瘤D．免疫缺陷病3．在现代免疫学中，免疫的概念是指机体免疫系统具有（B）

A．发现并排除有毒因子的能力B．识别和排除抗原性异物的能力

C．抵抗并清除传染性因子的能力D．发现和消除恶变细胞的能力

4．免疫防御、免疫稳定和免疫监视是D

A．免疫学的三大内容B．免疫细胞的三大功能C．免疫器官的三大功能

D．免疫系统的三大功能5．最早用人痘接种预防天花的国家是（A）A．中国B．美国C．英国D．俄罗斯6．免疫自稳功能是指：BA．抑制病原微生物在体内繁殖和扩散B．防止自身免疫病的发生C．清除体内病原微生物，防止感染D．清除体内突变细胞，防止肿瘤发生E．防止病毒的持续感染7．人体内最大的免疫器官是：CA．胸腺B．骨髓C．脾D．淋巴结E．法氏囊8．人类B细胞分化发育成熟的器官是：AA．骨髓B．脾C．淋巴结D．胸腺E．腔上囊9．免疫应答反应的过程是：EA．识别阶段B．活化阶段C．活化和效应阶段D．识别和效应阶段E．识别、活化和效应阶段10．CD4+T细胞与CD8+T细胞数的正常比是：BA．2～2.5B．1.5～2C．＞2.5D．＜0.5E．0.5～111．可非特异直接杀伤靶细胞的是：AA．NK细胞B．TH细胞C．Ts细胞D．Tc细胞E．TCRαβ＋细胞12．与抗体包被的红细胞相结合形成EAC玫瑰花环的物质是：AA．CD32B．CD35C．CD21D．CD40E．CD8013．T淋巴细胞与绵羊红细胞结合形成E花环的分子是：BA．CD8B．CD2C．CD28D．CD3E．CD414．新生儿从初乳中获得的Ig主要是：EA．IgEB．IgDC．IgGD．SIgAE．IgM15．具有调理作用的主要Ig是：AA．IgAB．IgMC．IgGD．IgDE．IgE16．Ig的生物学功能是：AA．调理作用B．呈递作用C．合成分泌细胞因子D．细胞毒作用E．参与T淋巴细胞在胸腺内的分化17．介导ADCC的主要细胞是：CA．T淋巴细胞B．B淋巴细胞C．NK细胞D．中性粒细胞E．嗜酸性粒细胞18.免疫应答反应的重要特征不包括EA.识别自己B.识别异己C.特异性D.记忆性E.遗传性19.特异性免疫效应功能不包括EA.浆细胞分泌特异性抗体，执行体液免疫功能B.Th细胞分泌细胞因子等效应因子，执行细胞免疫功能C.CTL细胞杀伤靶细胞D.产生记忆细胞E.中性粒细胞吞噬与杀灭细菌20.人中枢免疫器官包括EA.胸腺和脾B.骨髓和淋巴结C.胸腺和淋巴结D.骨髓和粘膜淋巴组织E.骨髓和胸腺E21.人体周围免疫器官不包括DA.淋巴结、脾B.脾、扁桃体C.粘膜淋巴组织、扁桃体D.胸腺、骨髓E.扁桃体、淋巴结22.免疫细胞发育、分化、成熟的场所是EA.胸腺和淋巴结B.骨髓和脾C.淋巴结和脾D.骨髓和淋巴结E.骨髓和胸腺23.粘膜伴随的淋巴组织主要的功能是EA.B、T淋巴细胞栖息和增殖场所B.各种免疫细胞的发源地C.T细胞分化成熟的场所D.B细胞分化成熟的场所E.主要产生IgA及分泌性IgA，执行体液免疫与局部特异免疫作用二、填空题：1．免疫功能包括(免疫防御)、(免疫监视)和(免疫自稳)。2．免疫的三大基本功能是(免疫防御)，(免疫监视)和(免疫自稳)。其中(免疫监视)功能低下，易发肿瘤。3．免疫防御功能异常可导致(感染)和(免疫缺陷)疾病。三、名词解释：1.免疫(immunity)：机体对“自己”或“非己”的识别，并排除“非己”以保持体内环境稳定的一种生理反应。2.免疫防御：机体防御外来病原生物的抗感染免疫，但异常情况下免疫反应过分强烈可引起超敏反应，或免疫功能过低则表现为易受感染或免疫缺陷病。3.免疫监视：体内细胞在增殖过程中，总有极少数由于种种原因而发生突变，这种突变的或异常的有害细胞可能成为肿瘤，机体的免疫功能可识别并清除这些有害细胞。4.免疫自稳：正常情况下机体对自身组织成分不发生免疫反应，处于自身耐受状态。5.中枢免疫器官（centralimmuneorgan）：免疫细胞发生、分化、成熟的场所，6.外周免疫器官(peripheralimmuneorgan)：免疫细胞产生应答的场所。7.淋巴细胞再循环：外周淋巴器官或淋巴组织中的淋巴细胞经淋淋巴管进入血液循环后，又通过外周淋巴器官或组织中的毛细血管后经内皮小静脉返回到外周淋巴器官或组织中的循环过程。8.免疫活性细胞：具有特异性抗原识别受体的免疫细胞，如T细胞、B细胞。9.补体：指存在于正常人和动物血清中辅助抗体溶细胞作用的不耐热具有酶活性的一组糖蛋白。10.免疫细胞：凡参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞统称为免疫细胞。按免疫细胞在体内的作用不同分为三大类：第一类为淋巴细胞，第二类为单核巨噬细胞，第三类为参与免疫应答的细胞，它们参与免疫应答中的某一环节。11．免疫分子：主要是由一些免疫活性细胞或相关细胞分泌的蛋白质及小分子多肽物质组成，它们参与机体的免疫反应或免疫调节。四、问答题1.免疫应答主要分为哪几个阶段？2.中枢免疫器官和外周免疫器官有哪些器官组成？各有什么功能？3.简述T细胞、B细胞和NK细胞的主要功能分别是什么？4.补体系统的主要激活途径有何不同？5.简述临床免疫的主要研究方向？6.根据作用方式及其特点的不同，机体存在两类免疫简述各自的概念和特征？四、问答题1.免疫应答主要分为哪几个阶段？1）识别阶段2）活化和增值阶段3）免疫效应2.中枢免疫器官和外周免疫器官有哪些器官组成？各有什么功能？1）中枢免疫器官（centralimmuneorgan）：免疫细胞发生、分化、成熟的场所，如骨髓，胸腺外周免疫器官(peripheralimmuneorgan)：免疫细胞产生应答的场所。如脾脏，淋巴结，黏膜，扁桃体等。3.T细胞、B细胞和NK细胞的主要功能分别是什么？1）T细胞：介导细胞免疫，辅助体液免疫。2）B细胞：产生体液免疫3）NK细胞：介导天然免疫，发挥细胞毒作用。4.补体系统的主要激活途径有何不同？比较项目经典激活途径MBL激活途径旁路激活途径激活物抗原抗体复合物MBL，C反应蛋白细菌脂多糖参与成份C1～C9C1～C9C3～C9，B因子，D因子，P因子所需离子Ca2+,Mg2+Ca2+,Mg2+Mg2+C3转化酶C4b2bC4b2bC3bBbC5转化酶C4b2b3bC4b2b3bC3bnBb作用参与特异性体液免疫的效应阶段参与非特异性免疫，感染早期发挥作用参与非特异性免疫，感染早期发挥作用5根据作用方式及其特点的不同，机体存在两类免疫简述各自的概念和特征？先天性免疫或固有性免疫，是个体出生是就具有的天然免疫，可通过遗传获得，是机体在长期进化过程中逐渐建立起来的主要针对入侵病原体的天然防御功能。其主要特征是反应迅速，针对外来异物的范围较广，不针对某个特定异物抗原，也称非特异性免疫。适应性免疫，是个体出生后，接触到生活环境中的多种异物抗原，并在不断刺激中逐渐建立起来的后天免疫，也称获得性免疫。其主要特征是针对某个特定的异物抗原而产生免疫应答，开始的应答过程比较缓慢，一旦建立清除该抗原的效率很高，特异性很强，也称特异性免疫。第二章抗原抗休反应AntigenandAntibodyReaction第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：抗原抗体反应的原理和特点，抗原抗体反应的带现象、前带、后带，亲和力、亲和性的概念；熟悉：抗原抗体反应的影响因素；了解：抗原抗体反应的基本类型。第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1．抗原抗体结合力中作用最大的是DA．静电引力B．范德华引力C．氢键结合力D．疏水作用力E．分子间结合力2．抗原抗体结合力中作用最小的是BA．静电引力B．范德华引力C．氢键结合力D．疏水作用力E．分子间结合力3．抗原自凝现象出现在下列哪种情况AA．反应pH达到或接近颗粒抗原的等电点B．反应pH达到或接近抗原的等电点C．反应pH高于颗粒抗原的等电点D．反应pH低于颗粒抗原的等电点E．反应pH高于抗原的等电点4．用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原，是由于抗原抗体反应具有AA．特异性B．比例性C．可逆性D．亲和性E．带现象5．外－斐试验的原理是利用了BA．过量抗原B．共同抗原C．过量抗体D．亲和性E．可逆反应6．免疫血清制备时，下列说法正确的是AA．早期获得的抗血清亲和力低，特异性好B．早期获得的抗血清亲和力高，特异性好C．早期获得的抗血清亲和力低，特异性低D．后期获得的抗血清亲和力低，特异性好E．后期获得的抗血清亲和力高，特异性低7．抗原抗体反应的特异性是指抗原决定簇和抗体分子什么区结合的特异性DA．可变B．恒定区C．高变区D．超变区E．低变区8．下列哪种免疫血清与相应抗原结合可形成可见免疫复合物CA．人B．马C．家兔D．猴E．牛9．抗原抗体反应中，抗体的合适浓度是CA．固定的B．规定的C．与抗原相对而言D．随便设定的E．人为规定的10．有补体参与的反应最适宜的pHCA．6.0～9.0B．7.0～9.0C．7.2～7.4D．6.0～8.0E．7.0～7.511．在抗原抗体反应中，通常使用什么溶液作抗原抗体稀释液DA．0.70%NaCl溶液B．0.60%NaCI溶液C．0.750%NaCl溶液D．0.85%NaCl溶液E．0.95%NaCl溶液12．静电引力大小DA．和两个电荷的距离成正比B．和两个电荷的距离的平方成比C．和两个电荷的距离成反比D．和两个电荷的距离的平方成反比E．和两个电荷的距离平方不成比例关系13．抗原抗体反应比例不合适出现的沉淀物减少的现象称为CA．前带B．后带C．带现象D．等价带E．等电点14．由于抗原过量导致抗原抗体结合物减少的现象为BA．前带B．后带C．带现象D．等价带E．等电点15．由于抗体过量导致抗原抗体结合物减少的现象为AA．前带B．后带C．带现象D．等价带E．等电点16．有关交叉反应的描述，正确的是BA．为非特异性抗原抗体反应B．由于不同抗原分子上存在共同抗原表位所致C．对免疫学诊断结果判断没影响D．利用交叉反应进行诊断典型例子是肥达试验E．利用交叉反应进行诊断典型例子是库姆试验17．抗原抗体结合反应最终出现肉眼可见沉淀现象，其原因是AA．从亲水胶体变为疏水胶体B．从疏水胶体变为亲水胶体C．抗原抗体结合反应导致蛋白变性所致D．抗原抗体结合作用和盐析作用共同作用所致E．蛋白质盐析所致18．一般抗原抗体反应的最适温度为AA．37℃B．25℃C．4℃D．56℃E．45℃19．平衡常数K是表示抗原抗体反应的DA．特异性B．亲合性C．比例性D．可逆性E．非特异性20．抗原抗体反应的最适pH值是CA．3～4B．5～10C．6～9D．9～10E．10～1221．下列关于抗原抗体反应的特点表述，正确的是CA．抗原抗体反应有交叉反应，故抗原抗体反应特异性不强B．抗原抗体反应必须在抗体量略大于抗原量时，形成的复合物最大C．抗原抗体反应形成的复合物又可解离为游离的抗原与抗体D．抗体与抗原结合牢固，不易被解离E．抗原抗体反应分为两个阶段，两个阶段之间有明显的界限22．下列哪类抗体与相应抗原表位的亲和力最强BA．IgG类B．IgM类C．IgA类D．IgEE．IgD23．利用抗原抗体反应的可逆性原理设计的免疫学技术是EA．酶免疫技术B．放射免疫技术C．金免疫技术D．荧光免疫技术E．亲合层析技术24．影响抗原抗体反应速度的因素是CA．电解质B．pH值C．温度D．抗体特异性E．抗原表位的数量25．下列哪种不属于抗原抗体反应的影响因素中反应物自身的因素CA．抗原的性质B．抗体的亲和力C．电解质D．抗体的浓度E．抗体的特异性二、填空题1．抗原抗体反应的特点有（特异性）、（比例性）和（可逆性）。2．抗原抗体反应的温度一般以（15～40℃）为宜，最适温度为（37℃）。3．影响抗原抗体反应的环境因素主要有（电解质）、（pH）与（温度）。4．某些特殊的抗原抗体反应对温度有一些特殊的要求，如冷凝集素在（4℃）左右与红细胞结合最好，（20％）以上反而解离。5．抗原抗体的结合分子间的引力包括（静电引力）、（范德华引力）、（氢键引力）和（疏水作用力）三、名词解释1．抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。它既可以发生在体内，也可以发生在体外。2．静电引力：是指抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力。3．范德华引力：原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。又称分子间引力。4．氢键结合力：是供氢体上的氢原子与氢受体原子间的引力。如分子中的氢原子和电负性大的氮、氧等原子相互吸引的力。当具有亲水基团(如一0H，一NH2及一C00H)的抗体与相对应的抗原彼此接近时，相互间即可形成氢键，使抗原与抗体相互结合。氢键结合力较范登华引力强。5．疏水作用力：在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子排斥而趋向聚集而产生的力称为疏水作用力。当抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步相互吸引，从而促进其相互结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体结合作用最大。6．等价带：抗原抗体反应曲线的高峰部分是抗原抗体分子比例合适的范围，称为抗原抗体反应的等价带。在此范围内，抗原抗体充分结合，沉淀物形成快而多。7．带现象：在抗原抗体反应等价带前后，由于抗体或抗原过量，上清液中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少，不出现可见反应，这种现象称为带现象。8．前带现象：抗原抗体反应当抗体量过时、不出现可见反应，称为前带现象。9．后带现象：抗原抗体反应当抗原量过剩时、不出现可见反应，称为后带现象。10．抗体亲和力：是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关。四、问答题1．简述抗原抗体反应的原理。DA抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合。简述抗原抗体反应的类型。DA抗原抗体反应分为五种类型：①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标记的抗原抗体反应等什么是带现象?DA在抗原抗体反应等价带前后，由于抗体或抗原过量(形成前带或后带)，上清液中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少，不出现可见反应，这种现象在做血清学试验时称为带现象。4．影响抗原抗体反应的环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素?DA环境条件包括：电解质，酸碱度和温度。稳定条件：①电解质：常用O．85％氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；②酸碱度：pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，抗原抗体反应一般在pH为6～8时进行；③温度：一般以15，40℃为宜，最佳反应温度为37℃。第三章免疫原和抗血清的制备Preparationofimmunogenandantiserum第四章特异性抗体的制备技术PreparationofSpeCifiCAntibody第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：抗原和抗体的概念类型、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理；熟悉：常用颗粒性和蛋白质抗原制备的方法、多克隆抗体制备的影响因素，常用佐剂种类；了解：抗血清的鉴定，基因工程抗体的类型。二、教学内容1．常见免疫原的种类和制备及佐剂。2．免疫血清的制备，抗血清的鉴定与保存。3．单克隆抗体制备技术。4．基因工程抗体技术。(一)单项选择题(A型题)1．配制绵羊红细胞免疫原一般细胞浓度为DA．102／mlB．104／m1C．105／mlD．106／mlE．108／ml2．细菌鞭毛免疫原常规的制备方法AA．0．5％甲醛处理B．100℃加温2h处理C．1％氯化钙处理D．75％乙醇处理E．2％氯仿处理3．细菌的菌体免疫原常规的制备方法BA．75％乙醇处理B．100℃加温2h处理C．0．5％甲醛处理D．1％氯化钙处理E．2％氯仿处理4．要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法AA．盐析法B．凝胶过滤法C．离子交换层析法D．免疫亲和层析法E．免疫电泳法5．制备人工抗原时，最常用于偶联半抗原的载体DA．免疫球蛋白B．人甲状腺球蛋白C．人血清白蛋白D．牛血清白蛋白E．葡萄球菌A蛋白6．蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔多长时间再进行第二次免疫BA．7～10天B．10一20天C．20～30天D．30—60天E．3个月7．鉴定抗体的效价，常用下列哪一种方法CA．间接凝集试验B．单向免疫扩散法C．双向免疫扩散法D．免疫亲和层析法E．聚丙烯酰胺凝胶电泳法8．纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体DA．盐析法B．凝胶过滤法C．离子交换层析法D．免疫亲和层析法E．免疫电泳法9．根据抗原分子所带电荷不同进行分离纯化的方法称为CA．盐析法B．凝胶过滤法C．离子交换层析法D．免疫亲和层析法E．免疫电泳法10．单克隆抗体目前效果较好的纯化方法AA．亲和层析法B．凝胶过滤法C．离子交换层析法D．超速离心法E．盐析法11．完全佐剂的组成EA．液体石蜡+羊毛脂B．羊毛脂+氢氧化铝C．液体石蜡+卡介苗+氢氧化铝D．卡介苗+氢氧化铝+羊毛脂E．卡介苗+液体石蜡+羊毛脂12．要使半抗原与载体结合具有免疫原性、半抗原分子的数目数至少要达到CA．10个以上B．15个以上C．20个以上D．50个以上E．100个以上13．颗粒性抗原免疫接种方法一般采用BA．淋巴结注射B．静脉注射C．皮内注射D．皮下注射E．肌肉内注射14．免疫小鼠采血通常采用DA．心脏采血或断尾法B．颈动脉放血或断尾法C．颈静脉或摘除眼球采血D．摘除眼球或断尾法E．耳静脉采血或摘除眼球15．较长时间(4—5年)保存抗体，通常采用EA．4℃保存B．一10℃保存C．一20℃保存D．一30℃保存E．真空干燥保存16．在HAT选择培养基中可长期存活者是BA．细胞多聚体B．融合的脾细胞与瘤细胞C．融合的瘤细胞与瘤细胞D．未融合的瘤细胞E．未融合的脾细胞17．属于颗粒性抗原的是EA．脂多糖B．球蛋白C．白蛋白D．DNAE．血小板18．属于可溶性抗原的是DA．荚膜B．菌毛C．鞭毛D．IgGE．SRBC19．最常用的半抗原载体为AA．牛血清白蛋白B．牛甲状腺球蛋白C．人血清白蛋白D．人甲状腺球蛋白E．球蛋白20．亲合层析支持物最常用的是BA．sepharose2BB．sepharose4BC．sepharose6BD．多孔玻璃球E．琼脂粉21．破碎组织细胞制备蛋白质抗原最常用的方法为AA．反复冻融法B．超声破碎法C．表面活性剂处理法D．自溶法E．酶处理法22．连接在载体上的半抗原数目应在多少以上,才能有效地产生抗体?EA．4B．8C．10D．15E．2023．制备抗重链血清时,用于裂解免疫球蛋白的酶最好选用AA．木瓜蛋白酶B．胃蛋白酶C．胰蛋白酶D．限制性核酸内切酶E．胰肽酶24．某抗原需制备10ml抗血清,应选择何种动物AA．家兔B．小白鼠C．马D．绵羊E．猴25．可有效激发机体抗肿瘤效应的佐剂为CA．福氏佐剂B．胞壁肽C．细胞因子D．羊毛脂E．多聚核苷酸26．从免疫血清中粗提γ球蛋白最简便的方法为EA．亲合层析B．离子交换层析C．凝胶过滤D．超速离心E．硫酸铵盐析27．具有免疫原性的佐剂为AA．脂多糖B．氢氧化铝C．石蜡油D．羊毛脂E．多聚核苷酸28．免疫接种后易引起局部持久溃疡和形成肉芽肿的佐剂为AA．福氏完全佐剂B．福氏不完全佐剂C．细胞因子佐剂D．内毒素E．多聚核苷酸29．制备人血清蛋白与福氏完全佐剂的乳化抗原时,两者比例最好为AA．1:1B．2:1C．3:1D．4:1E．0．5:130．某免疫原有10μg,制备抗血清应选择哪种途径免疫AA．淋巴结内注射B．皮内注射C．腹腔注射D．肌肉注射E．静脉注射31．首次与第二次免疫接种的时间间隔最好为CA．1W内B．7～10天C．10～20天D．20～30天E．30天以上32．第二次免疫接种后,免疫接种的间隔时间最好为BA．1W内B．7～10天C．10～20天D．20～30天E．30天以上33．分离亚细胞成分或大分子蛋白质最常用的方法为AA．超速离心法B．低速离心法C．高速离心法D．选择性沉淀法E．凝胶过滤法34．免疫小鼠的采血方法常为DA．静脉采血法B．心脏采血法C．颈动脉放血法D．断眼法或摘除眼球法E．股动脉放血法35．制备针对伤寒沙门菌H抗原的抗血清常选用的接种途径为AA．静脉注射B．淋巴结注射C．腹腔注射D．皮内注射E．肌肉注射36．厂家生产的抗IgG制剂一般的保存方法为CA．液体4℃保存B．液体-20℃保存C．真空干燥保存D．25℃保存E．加叠氮钠保存二、填空题1．根据抗体制备的技术方法不同进行区分，人工制备的抗体可分为(多克隆抗体),(单克隆抗体)和(基因工程抗体)三大类型。2．抗血清鉴定的主要内容包括(抗体效价)、(抗体特异性)、(抗体纯度)、(抗体亲和力)等四个方面。3．制备特异性免疫血清时，常用(亲和层析法)和(吸附法)两种方法去除杂抗体。4．HAT培养基中三种关键成分是(次黄嘌呤)、(氨基蝶呤)和(胸腺嘧啶)。5．单克隆抗体的批量生产方法主要有两种(小鼠体内诱生法)和(体外增殖培养法)。三、名词解释1．单克隆抗体：是指仅识别单一抗原表位的B细胞杂交瘤产生的同源抗体，具有特异性强、效价高、生物活性单一、理化性状高度均一等特点。2．佐剂：是指先于抗原或与抗原一起注入机体，能够增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。3．基因工程抗体：是指应用DNA重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，经导人适当的受体细胞后重新表达的抗体，主要包括人源化抗体、小分子抗体、双价特异性抗体和抗体融合蛋白等类型。4．嵌合抗体：又称人一鼠嵌合抗体，是从杂交瘤细胞中分离出鼠源单抗功能性V区基因，经基因重组与人抗体C区基因连接成嵌合基因后，插入适当的表达载体中，再共同转染宿主细胞，表达人一鼠嵌合抗体分子。嵌合抗体保留了单抗对抗原的特异亲和性，又含有人抗体C区的成分及其功能。5．改形抗体：是应用基因工程技术在嵌合抗体基础上用人抗体可变区的骨架区序列取代鼠源单抗CDR以外的骨架区序列，重新构成既有鼠源单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体，该抗体对人体几乎无免疫原性。6．双特异性抗体：又称双功能抗体，它不同于天然抗体，其两个抗原结合部位具有不同的特异性，可以同时与两种不同特异性的抗原发生结合。四、问答题1．简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。DA单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。试述免疫血清应如何进行纯化。DA免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的IgG并去除无关的杂抗体。提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法提取IgG时，可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交联sephamse4B制成层析柱。另外，还可通过吸附法获得单价特异性抗血清。方法是将不含特异性抗原的杂抗原与戊二醛等双功能试剂混合制成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse4B上，通过亲和层析去除杂抗体。3．叙述杂交瘤技术的基本原理。DA杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，即既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。第五章凝集反应AgglutinationTest第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：凝集反应的原理、类型及临床应用；熟悉：凝集反应的技术要点、实验影响因素、方法评价、间接凝集常用的载体；了解：凝集反应各阶段的特征。二、教学内容1．凝集反应的特点与类型。2．直接凝集反应：玻片凝集试验，试管凝集试验。3．间接凝集反应：间接凝集反应的类型，间接血凝试验，胶乳凝集试验，间接凝集试验的临床应用。4．自身红细胞凝集试验。5．抗球蛋白试验。第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1_直接抗球蛋白实验用于检测CA．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体2．玻片凝集试验BA．只能检测抗原，不能检测抗体B．既能检测抗原，又能检测抗体C．只能检测抗体，不能检测抗原D．为半定量实验E．不能用于ABO血型鉴定3．下列哪一项不属于玻片凝集试验EA．菌种鉴定B．血清学分型C．人类ABO血型鉴定D．受检者未致敏红细胞E．受检者致敏红细胞4．试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝集现象CA．+B．+或++C．++D．+++E．++++5．间接抗球蛋白实验用于检测BA．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体6．协同凝集试验所用的载体是EA．新鲜红细胞B．洗涤红细胞C．醛化红细胞D．聚苯乙烯颗粒E．金黄色葡萄球菌7．自身红细胞凝集试验红细胞是DA．标准新鲜红细胞B．标准洗涤红细胞C．标准醛化红细胞D．受检者未致敏红细胞E．受检者致敏红细胞8．关于醛化红细胞，说法错误的是CA．保存时间较长B．血凝反应效果较新鲜红细胞强C．可反复冻融不易破碎D．能耐60℃加热E．有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的能力9．下列试验不属于凝集试验的是CA．外斐试验B．肥达试验C．RPRD．TRUSTE．MHA-TA10．关于凝集反应，说法正确的是AA．IgM类抗体的作用比IgG类抗体要强B．IgM类抗体常出现不完全反应C．IgG类抗体不易出现不完全反应D．反应的发生可分为四个阶段E．可进行定量检测11．在实验时为促使凝集现象的出现，下列措施无效的是DA．离心B．增加电解质或蛋白质C．加入右旋糖苷或葡聚糖D．胰酶处理E．加入抗原12．关于正向间接凝集试验说法错误的是DA．抗原致敏载体B．用于检测标本中抗体C．出现凝集为阴性D．敏感性高E．特异性强13．关于反向间接凝集试验说法错误的是CA．抗体致敏载体B．用于检测标本中抗原C．现凝集为阴性D．感性高E．异性强14．关于正向间接凝集抑制试验说法错误的是BA．检测标本中抗原B．出现凝集为阳性C．抗体为诊断试剂D．原致敏载体E．不出现凝集为阳性1５．关于反向间接凝集抑制试验说法错误的是DA．抗体致敏载体B．抗原为诊断试剂C．检测抗体D．出现凝集为阳性E．不出现凝集为阳性16．关于SPA说法错误的是CA．为金黄色葡萄球菌的细胞壁成分B．能与IgG的Fc段结合C．能与IgG的F(abˊ)2段结合D．不能与IgG3结合E．与IgG结合后不影响其活性17．关于间接血凝试验说法错误的是BA．红细胞作为载体B．不能检测抗原C．可检测抗体D．可判断阳性反应的强弱E．应用广泛18．关于胶乳凝集试验，说法错误的是EA．是一种间接凝集试验B．敏感性较血凝试验要高C．可进行定性检测D．可进行半定量检测E．可进行定量检测19．关于明胶凝集试验，说法错误的是BA．抗原致敏载体检测抗体B．抗体致敏载体检测抗原C．是一种间接凝集试验D．凝集为阳性E．常常用于检测病毒20．间接凝集反应不能检测CA．抗体B．AFP抗原C．伤寒沙门菌菌体抗原D．类风湿因子E．HCG抗原21．关于自身红细胞凝集试验，说法错误的是AA．红细胞为致敏载体B．可检测抗体C．可检测抗原D．诊断试剂为抗O型红细胞的单克隆抗体E．检测标本为全血22．关于直接Coombs试验，说法错误的是AA．检测血清中游离的不完全抗体B．可定性检测C．可作半定量分析D．可用于新生儿溶血检测E．可用于自身免疫性溶血性贫血的检测23．关于间接Coombs试验，说法错误的是AA．检测红细胞上的不完全抗体B．出现凝集为阳性C．抗原致敏红细胞D．用于检测母体Rh抗体E．可检测因红细胞不相容性输血而产生的血型24．抗球蛋白试验不能应用于BA．配血试验B．立克次体的抗原检查C．诊断新生儿溶血性贫血性疾病D．细菌的不完全抗体的检测E．抗D抗体25．关于协同凝集试验，说法错误的是EA．致敏颗粒为金黄色葡萄球菌B．桥连物为SPAC．检测抗原D．是一种反向间接凝集试验E．抗体为IgM类二、填空题1．凝集反应的类型分为(直接凝集反应)和(间接凝集反应)两种类型。2.间接凝集反应的类型包括(正向间接凝集反应)、(反向间接凝集反应)、(间接凝集抑制反应)和(协同凝集反应)四种类型。3．参与凝集反应中的抗原称为(凝集原)，抗体称为(凝集素)试验有(玻片法)和(试管法)两种方法。4．在间接凝集反应中，正向凝集反应是用(抗原)致敏载体以检测标本中相应的(抗体)；而反向间接凝集反应是用(抗体)致敏载体以检测标本中相应的(抗原)。5．间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中的(不完全抗体)；可用于输血前的(交叉配血)试验。三、名词解释1．滴度(效价)：血清标本进行一系列倍比稀释后进行反应，以出现明显凝集反应的血清最高稀释度、即滴度(效价)。2．凝集反应：凝集反应是指细菌或红细胞等颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下结合形成凝集的现象。现也指颗粒化抗原或抗体与相应抗体或抗原的反应。3．直接凝集反应：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。4．凝集原：指凝集反应中的抗原。5．凝集素：指凝集反应中的抗体。6．试管凝集试验：是在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合，在一定条件下，会出现肉眼可见的凝集现象。7．间接凝集反应：将可溶性抗原(或抗体)先吸附于适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体(或抗原)作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象称间接凝集反应或被动凝集反应(passiveagglutinationtest)。四、问答题1．简述间接血凝试验的基本原理。DA间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称被动血凝试验。2．简述抗人球蛋白试验的原理(又称Coombs试验)、类型及其在临床上的应用。DACoombs试验又称抗人球蛋白试验，其原理是不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。Coombs试验有二种类型：(1)直接Coombs试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。(2)间接Coombs试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。3．抗球蛋白试验主要应用于那些方面？DA①输血：对于“危险”受体（指曾经输血、肌肉注射过血液制品或母子间血型不合的妊娠而可能产生免疫性血型抗体的人）的配血试验必须包括各种不完全抗体的检查，以抗球蛋白法最为可靠。②血型抗原抗体的检查：主要检查Rh—者，其体内是否有抗-D抗体，应用抗球蛋白试验对外表为D阴性的供体血液作常规检查。最可靠和灵敏的方法是将待检D阴性的红细胞与高效价的不完全抗-D血清混合，然后加抗球蛋白血清检查细胞上有无致敏抗体。③对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断：母体产生的最常见的免疫性抗体为Rh抗体和ABO抗体，一般为7S的IgG，可通过胎盘屏障，作用于胎儿红细胞，引起新生儿溶血性疾病，可借抗球蛋白试验检出而采取预防性措施。④对溶血性贫血的研究：获得性溶血性贫血患者大多数可借助该方法证实有自身红细胞的抗体存在。⑤对细菌或立克次体的不完全抗体的检查。Coombs试验还可采用专一性特异性的抗球蛋白的血清，如抗IgG血清、抗IgM、抗IgA以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体免疫球蛋白的亚类。4．什么是协同凝集试验？主要用于何种检测？DA协同凝集试验与间接凝集反应的原理相类似，但所用的载体为金黄色葡萄球菌。这种细菌的细胞壁中含有A蛋白（SPA），SPA能与特异性抗体IgG的Fc段结合（IgG3除外）。抗体的F(abˊ)2段暴露在葡萄球菌的表面，仍保持与相应抗原特异性结合的特性。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的检测。5．何谓间接凝集反应？DA将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶联于与免疫无关大小适当的颗粒表面，使之成为致敏载体颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在条件下，出现特异性的凝集现象，称为间接凝集反应（inderectagglutination）。五、论述题1．间接凝集反应如何进行分类？各试验的原理是什么DA间接凝集应有多种分类方法，根据致敏载体用的是抗原或抗体分为正向间接凝集试验和反向间接凝集试验；根据载体种类，分为间接血凝试验和胶乳间接凝集试验；根据反应方式分为间接凝集试验、间接抑制凝集试验和协同凝集试验。间接凝集试验是用抗原致敏载体检测标本中的相应抗体。将可溶性抗原与载体颗粒结合，再与标本中的抗体反应，通过抗体桥联，形成肉眼可见的凝集颗粒或凝集块，为阳性反应。反向间接凝集试验选用已知特异性抗体致敏载体检测标本中的相应抗原。用特异性抗体致敏颗粒，与样品中的待检抗原反应，通过抗原桥联，形成肉眼可见的凝集为阳性。临床上用于检测HbsAg、AFP等。间接凝集抑制试验诊断试剂为已知抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体，用于检测标本中与致敏抗原相同的抗原。将标本与抗体试剂相反应，然后加入致敏抗原，若出现凝集现象，说明标本中不存在相应抗原，抗体试剂未被结合，仍与载体上的抗原起反应。如未出现凝集现象，则说明待检标本中含有相应抗原，凝集反应被抑制。同理，用抗体致敏载体颗粒及相应抗原作为诊断试剂，检测标本中的抗体，称为反向间接凝集试验。协同凝集试验与间接凝集反应的原理相似，但所用载体为金黄色葡萄球菌，该菌细胞壁上的SPA能与特异性抗体的IgG的Fc段结合（IgG3除外），抗体的F(abˊ)2段暴露在葡萄球菌的表面，仍能与相应抗原特异性结合。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。间接血凝试验是以红细胞作为载体的间接凝集试验，用已知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与样品中的抗体或抗原在适宜条件下反应，出现红细胞凝集者为阳性。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱。胶乳凝集试验是以聚苯乙烯胶乳微粒作为载体的间接凝集试验。第六章沉淀反应PreCipitation第一部分目的要求和教学内容一、目的要求，掌握：凝胶内沉淀试验、免疫浊度分析、免疫电泳法的原理；熟悉：凝胶内沉淀试验、免疫浊度分析、免疫电泳的应用；了解：液相沉淀试验的原理，各种沉淀反应方法的技术要点和影响因素。二、教学内容1．液相沉淀试验：絮状沉淀试验，环状沉淀试验。2．凝胶内沉淀试验：单向琼脂扩散试验，双向琼脂扩散试验。3．免疫电泳技术：免疫电泳，火箭免疫电泳，对流免疫电泳，免疫固定电泳。4．免疫浊度分析技术：透射免疫比浊法，散射免疫比浊法，速率抑制免疫比浊法，免疫胶乳浊度测定法，免疫浊度分析的影响因素和免疫浊度测定法的应用。第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1．Fahey曲线适用于BA．小分子抗原，长时间扩散(48h)B．小分子抗原，短时间扩散(24h)C．大分子抗原，长时间扩散(48h)D．大分子抗原，短时间扩散(24h)E．不论分子大小2．ManCini曲线适用于CA．小分子抗原，长时间扩散(48h)B．小分子抗原，短时间扩散(24h)C．大分子抗原，长时间扩散(48h)D．大分子抗原，短时间扩散(24h)E．不论分子大小3．ManCini曲线DA．适用于小分子抗原，扩散时间大于48hB．适用于小分子抗原，扩散时间小于24hC．适用于大分子抗原，扩散时间小于24hD．抗原浓度与沉淀环直径的平方呈线性关系E．使用半对数坐标纸作图4．Fahey曲线DA．适用于大分子抗原，扩散时间大于48hB．适用于小分子抗原，扩散时间大于48hC．适用于大分子抗原，扩散时间小于24hD．抗原浓度的对数与沉淀环直径呈线性关系E．使用普通坐标纸作图5．单向琼脂扩散试验，抗体与融化琼脂混合的温度CA．约37℃B．约45℃C．约50℃D．约60℃E．室温6．单向琼脂扩散法可用于DA．抗体定性B．抗体定量C．抗原定性D．抗原定量E．抗体效价滴定7．双向琼脂扩散试验出现多条沉淀线的原因DA．抗原抗体过剩B．抗原抗体相等C．抗原抗体缺乏D．抗原抗体不纯E．抗原抗体分子量不等8．双向琼脂扩散试验测量两种有相关成分的抗原时?沉淀线出现CA．二条直线相交叉B．二条弧线完全融合C．二条弧线部分融合D．二条弧线不连接E．二条相交弧线靠近抗体孔9．双向琼脂扩散试验中，抗原含量较大，反应沉淀线应BA．靠近抗原孔B．靠近抗体孑LC．在两孔之间D．沉淀线弯向抗原孔E．呈多条沉淀线10．速率散射比浊法测定的散射信号值产生于BA．单位时间内最大量的免疫复合物B．单位时间内免疫复合物形成的最快时间段C．单位时间内免疫复合物形成的最稳定期D．抗体过剩期形成的免疫复合物E．小分子不溶性免疫复合物颗粒11．三角孔型模式双向琼脂扩散试验，若沉淀线为二条直线交叉，说明两种受检抗原性质BA．完全相同，抗体双价B．完全不同，抗体双价C．完全相同，抗体单价D．完全不同，抗体单价E．部分相同，抗体双价12．三角孔型模式双向琼脂扩散试验，若二条沉淀线部分相融，说明两种受检抗原性质EA．完全相同，抗体双价B．完全不同，抗体双价C．完全相同，抗体单价D．部分相同，抗体单价E．部分相同，抗体双价13．三角孔型模式双向琼脂扩散试验，若二条沉淀线完全相融，说明两种受检抗原性质AA．完全相同，抗体双价B．完全不同，抗体双价C．完全相同，抗体单价D．部分相同，抗体单价E．部分相同，抗体双价14．双向琼脂扩散试验，两种受检抗原的性质完全相同时，沉淀线出现BA．二条直线相交叉B．二条弧线完全融合C．二条弧线部分融合D．二条弧线不连接E．二条相交弧线靠近抗体孔15．双向琼脂扩散试验，两种受检抗原的性质完全不同时，沉淀线出现AA．二条直线相交B．二条弧线完全融合C．二条弧线部分融合D．二条弧线不连接E．二条相交弧线靠近抗体孔16．双向琼脂扩散试验中，抗体含量较大，反应沉淀线应AA．靠近抗原孑LB．靠近抗体孔C．在两孔之间D．沉淀线弯向抗原孔E．呈多条沉淀线17．比较两种抗原异同时，常选用的双向琼脂扩散试验的模式为CA．单孔型B．双孔型C．三角孔型D．双排孔型E．梅花孔型18．滴定抗血清效价时，常选用的双向琼脂扩散试验的模式为EA．单孔型B．双孔型C．三角孔型D．双排孔型E．梅花孔型19．散射比浊法的特异性好于透射比浊法，其原理是EA．散射比浊法的入射光波长较短B．检测点接近光源C．IC的体积大D．IC的折射率大E．避免了杂信号的影响20．测定半抗原或药物，常用DA．透射免疫比浊法B．终点散射比浊法C．速率散射比浊法D．速率抑制免疫比浊法E．免疫胶乳浊度测定法21．单向琼脂扩散试验是将AA．抗体混入琼脂板内，然后打孔加入抗原B．抗原混入琼脂板内，然后打孔加入抗体C．抗原与抗体均不混入琼脂板内，而是在一定位置打孔后，分别加入D．抗原与抗体均不混入琼脂板内，而是在一定位置打孔后，分别加入，再进行电泳E．抗体混合琼脂板内，然后打孔加入抗原，再进行电泳22．哪种沉淀试验常用于两种抗原的性质分析CA．单向扩散试验B．环状沉淀试验C．双向扩散试验D．絮状沉淀试验E．对流免疫电泳23．对于血清中数种蛋白质抗原成分的分析，常可采用AA．免疫电泳法B．双向扩散试验C．单向扩散试验D．火箭免疫电泳E．对流免疫电泳24．免疫电泳(IEF)是AA．区带电泳与双向免疫扩散相结合的技术B．电泳与单向免疫扩散相结合的技术C．电泳与双向免疫扩散相结合的技术D．区带电泳与免疫沉淀反应相结合的技术E．电泳与环状沉淀反应相结合的技术25．免疫电泳法常用于BA．IgG定量测定B．抗原组分鉴定C．IgG类别鉴定D．抗原分子量测定E．抗体效价测定26．免疫电泳的结果，主要是观察DA．沉淀环的直径B．沉淀弧的长短C．沉淀峰的高低D．沉淀线的数目、形状和位置E．沉淀弧的方向27．对流免疫电泳是BA．定向加速的单向扩散试验B．定向加速的双向扩散试验C．区带电泳与双向免疫扩散相结合的技术D．区带电泳与免疫沉淀反应相结合的技术E．电泳与环状沉淀试验相结合的技术28．对流免疫电泳中，抗体向阴极移动原因是CA．抗体带正电B．抗体带负电C．电渗作用D．电泳作用E．抗原与抗体的相互吸引29．火箭免疫电泳的火箭峰呈圆形是因为BA．琼脂凝胶的电渗过大B．电泳时间未达终点C．抗原为IgG类蛋白质D．加样速度慢E．抗原含量过低30．火箭免疫电泳的火箭峰呈纺锤状CA．琼脂凝胶的电渗过大B．电泳时间未达终点C．抗原为IgG类蛋白质D．加样速度慢E．抗原含量过高31．火箭免疫电泳的火箭峰基底过宽DA．琼脂凝胶的电渗过大B．电泳时间未达终点C．抗原为IgG类蛋白质D．加样速度慢E．抗原含量过高32．采用放射免疫自显影技术进行火箭电泳可使火箭电泳技术CA．大大缩短实验时间B．简化试验步骤C．大大提高抗原定量的敏感度D．由定性试验变成定量试验E．大大提高试验的准确性33．与免疫固定电泳最类似的沉淀试验是AA．免疫电泳B．火箭电泳C．对流电泳D．交叉免疫电泳E．火箭电泳+放射免疫自显影技术34．火箭免疫电泳终点应CA．火箭峰呈云雾状B．火箭峰呈圆形C．火箭峰尖而清晰D．火箭峰顶部与基底同宽E.火箭峰呈纺锤状35．速率散射比浊法之所以能比传统的沉淀反应试验大大地缩短时间，主要是因为AA．在抗原抗体反应的第一阶段判定结果B．不需复杂的仪器设备C．使用低浓度的琼脂或琼脂糖D．反应的敏感度高E．速率散射比浊法反应速度快36．透射免疫比浊法CA．测定光线通过反应混合液时，被其中IC反射的光的强度B．测定光线通过反应混合液时，被其中IC折射的光的强度C．测定光线通过反应混合液时，被其中IC吸收的光的强度D．测定光线通过反应混合液时，透过的光的强度E．测定光线通过反应混合液时，透射光的强度37．散射免疫比浊法检测的原理BA．测定光线通过反应混合液时，被其中IC反射的光的强度B．测定光线通过反应混合液时，被其中IC折射的光的强度C．测定光线通过反应混合液时，被其中IC吸收的光的强度D．测定光线通过反应混合液时，透过的光的强度E．测定光线通过反应混合液时，透射光的强度38．根据海德堡曲线，下列说法错误的是EA．抗原过量时产生钩状效应，沉淀物少B．抗体过量时，沉淀物也少C．抗原抗体比例适当时产生沉淀量最多D．免疫比浊法中抗原过量导致测量失败E．免疫比浊法中抗体过量导致测量失败39．免疫比浊法测定的影响因素不包括CA．抗原抗体的比例B．抗体的质量C．抗原的质量D．反应溶液E．使用增浊剂40．双向扩散试验不能分析EA．抗原或抗体是否存在B．抗原或抗体的相对含量C．抗原或抗体的相对分子量D．抗原的性质E．抗体的性质41．下列哪项不是沉淀反应的特点EA．其特性与经典抗原抗体反应相同B．抗原是可溶性抗原C．反应可分为两个阶段D．抗体是McAbE．需一定电解质42．免疫浊度法的优点不包括DA．校正曲线比较稳定B．适应于大批量标本C．无放射性核素污染D．易于自动化E．能快速检测可溶性抗原二、填空题1．免疫沉淀反应是（可溶性抗原）与（相应抗体）特异性结合，在适当条件下出现沉淀物的现象。2．棋盘格法，又称方阵法，（抗原）和（抗体）同时稀释，可一次完成（抗原）和（抗体）的滴定，并找出最适比。3．单向琼脂扩散是待测抗原从含有定量（抗体）的（凝胶）内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成沉淀环。4．Maneini曲线适用于大分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，抗原浓度与（扩散环直径的平方）呈线性关系，常用（普通）坐标纸作图。5．Fahey曲线适用于小分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，沉淀环直径与（抗原浓度的对数）呈线性关系，常用（半对数）坐标纸作图。6.双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体的存在、含量和相对分子量进行分析，沉淀线靠近抗原孔指示（抗体含量）较大；靠近抗体孔则指示（抗原含量较高）；不出现沉淀线则表明（无对应的抗原和抗体）7.免疫电泳是将（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的一种免疫化学分析技术。8.火箭电泳是（电泳）与（单向免疫扩散）相结合的免疫技术。9.对流免疫电泳是（电泳）与（双向免疫扩散）相结合的免疫技术。10.对流免疫电泳中，抗体流向负极，是因为（抗体分子量大），（电泳）速度小于（电渗）速度。1l.免疫浊度测定的基本原理是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成（免疫复合物），使反应液出现（浊度），并可根据其推算出抗原或抗体的量。12.根据Rayleigh方程，散射比浊法中的散射光强度与入射光波长成（反）比，与粒子的浓度和体积成（正）比。13.速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的（最快时间段）的散射信号值，此时的散射信号最强，速率散射信号值最大。14.免疫胶乳浊度测定的原理与透射比浊法相似。载体为大小适中、均匀的胶乳颗粒，其直径应稍（小于）入射光波长，目前多用（200）nm的胶乳颗粒。15.免疫浊度测定的基本原则之一是反应体系中必须始终保持（抗体）过量。为此，掌握抗体的浓度是关键。16.凝胶内沉淀试验包括（单向扩散试验）和（双向扩散试验）。抗原抗体最适比的基本测定方法为（抗原稀释法）和（抗体稀释法）。三、名词解释1．沉淀反应：沉淀反应是指可溶性的抗原和抗体特异性结合后，所形成的复合物以沉淀的形式出现。2．凝胶内沉淀试验：又称凝胶扩散，是将可溶性抗原与相应抗体分别放人凝胶内进行扩散，两者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。3．免疫电泳：是凝胶电泳和凝胶扩散相结合。在电场作用下，位于琼脂凝胶中的抗原样品因各组分的电泳迁移率不同而彼此分开形成不同的区带。电泳结束后，在琼脂板中间所挖的长形槽内加人相应的抗血清，由于经电泳分离后的各种抗原成分在琼脂中呈放射状扩散，而抗体呈直线扩散，因而形成的沉淀线多呈弧状。4．对流免疫电泳：是在电场作用下的免疫双扩散。抗原向阳极移动，而抗体向阴极移动，在一定时间内，相向移动的抗原和抗体在两孔间相遇，在浓度比例适当处形成沉淀线。5．带现象:在抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关，当抗原与抗体达到最适比时，沉淀物形成最多。如果抗原或抗体极度过剩则无沉淀物形成，这种现象称为带现象。出现在抗原过量时，称为后带。出现在抗体过量时，称为前带。四、问答题1．决定抗原抗体最佳配比的方法有几种?答(1)抗原稀释法：将可溶性抗原作一系列倍比稀释，然后向各管中加入一定浓度的适量抗血清，37℃反应后，产生的沉淀量随抗原量变化而不同，以沉淀物最多的管为最适比例管。(2)抗体稀释法：是将恒定量抗原与不同倍比稀释的抗体反应，出现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。(3)棋盘格法：亦称方阵法。抗原抗体同时稀释，可一次完成抗原和抗体的滴定，并找出抗原、抗体的最适比。是前二法的结合。2．简述单向免疫扩散试验的基本原理和技术要点。答(1)原理：待测抗原从局部含有定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。(2)技术要点：将抗体和热融化琼脂(约50％)混合，倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品，置37~12温箱，24～48h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。3．在双向免疫扩散试验中，如何判定结果?答：双向免疫扩散中，出现沉淀线，表明存在相应的抗原、抗体，不出现沉淀线则表明缺乏抗原或抗体。沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致，沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；靠近抗体孔，提示抗原含量较多。4．在双向免疫扩散试验中，如何分析抗原或抗体相对分子量大小?答：抗原或抗体在琼脂内扩散的速度受分子量影响。分子量大，则抗原抗体扩散慢、扩散圈小、局部浓度较大，因此形成的沉淀线弯向分子量大的一方。如二者分子量相等，则形成直线。抗体多为IgG，分子量约150000，据此可粗略估计未知抗原的分子量。5．免疫电泳技术的优点是什么?免疫电泳有哪些用途?答(1)优点：免疫电泳技术是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术，既有抗原抗体反应的高度特异性，又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力，广泛应用于牛物医学领域。(2)用途：①纯化抗原或抗体的成分分析，分析其纯度；②正常及异常体液中蛋白质成分的分析，如无丙种球蛋白血症、冷球蛋白血症、多发性骨髓瘤、白血病、系统性红斑狼疮、肝病等病人的血清蛋白成分的分析，多发性骨髓瘤血清M蛋白的检测和鉴定；③免疫后不同抗体组分的动态变化研究。6．对流免疫电泳时，抗体为什么流向负极?答：大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，电泳时从负极向正极泳动，而抗体IgG分子量大，暴露的极性基团较少，在缓冲液中解离的也少，向正极的泳动速度较慢，电泳时由电渗引向负极的液流速度超过了IgG向正极的泳动，带动抗体流向负极，使抗原和抗体定向对流并发生反应，出现肉眼可见的沉淀线。7．简述火箭免疫电泳的原理和主要用途。答(1)原理：火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作用下，在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀，峰形高低与抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。(2)主要用途：①抗原蛋白定量，如IgA、IgG、IgM和sIgA检测；②C3、C4及其裂解产物检测；③AFP等检测。8．免疫浊度测定的基本原理是什么?有哪些类型?答(1)基本原理：免疫浊度测定是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。当可溶性抗原与相应的抗体特异结合，在二者比例合适、并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。这种浊度可用肉眼或仪器测知，并可通过浊度推算出复合物的量，即抗原或抗体的量。(2)类型：按测量方式可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。按测定速度可分为速率比浊法和终点比浊法。9．散射免疫比浊法的基本原理是什么?答：沿水平轴照射的一定波长的光，在通过溶液时，光线可被其中的免疫复合物粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光。根据Rayle培h散射方程，散射光强度与粒子(免疫复合物)的浓度和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓度。10．速率散射比浊法中的“速率”是指什么?答：所谓速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度，在每个单位时间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时问的延长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在25s时出现一个反应最快的速率峰。峰值与抗原量呈正相关。11．速率散射比浊法中，测定的是单位时间内什么时间段的散射信号值?答：速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的最快时间段(而不是测定免疫复合物的最大量及最稳定期)的散射信号值，此时因抗体量大于抗原量，形成的免疫复合物为小分子不溶性颗粒，产生的散射信号最强，形成的速率散射信号值最大。12．免疫浊度测定的反应体系中，为什么必须始终保持抗体过量?答：抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。当抗原过量时，由于钩状效应，形成的免疫复合物分子小，而且会发生再解离，使浊度下降，光散射减少。当反应液中抗体过量时，免疫复合物的形成随着抗原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增，因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基本原则。13．全自动免疫浊度测定仪均具有抗原过量的自动监测功能，其设计的基本原理是什么?答：在抗体过量的前提下，待测抗原在反应液中与抗体快速反应形成稳定的小复合物颗粒，产生散射光信号，该信号随复合物的增加和时间的延长(在抗体过量阶段)而动态性增强，形成速率峰值信号。在规定时间内反应介质中的抗体应将待测抗原全部结合，无游离抗原存在，此时再次加入已知的相应抗原，该抗原与剩余游离抗体结合反应形成复合物，可出现第二个速率峰值信号，表明第一次速率峰值信号是由全部的待测抗原产生，可以此速率峰值计算待测抗原的量。如再次加入已知相应抗原后不出现第二速率峰值信号，说明反应介质中已无游离抗体存在，第一速率峰值信号是由部分待测抗原产生，其测定结果有不准确因素，提示应将待测样本进一步稀释，重新进行检测，以获取检测全部抗原的真实浓度，保证检测的准确性。14.单向琼脂扩散试验有那些影响因素？答：单向扩散试验有下列影响因素：①抗血清的亲和力、特异性、及效价。要求亲和力强，特异性好、效价高。注意存放的方法，防止效价下降。②标准曲线必须在每次测定时同时制作，绝不可一次作成，长期应用。③测定时必须加测质控血清，以保证定量的准确性。④有时出现扩散环呈现两重的双环现象，这是出现了抗原性相同的两个组分，其扩散率不同，例如α重链病血清中出现的α重链和正常的IgA两种成分并存，皆与抗IgA抗体发生反应，就形成内外两重环。⑤在单扩试验时，有时回出现结果与真实含量不符，这主要出现在Ig测定中。如用单克隆抗体或骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在单一结合价的现象，若用此作为单扩试剂测量正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，是沉淀圈直径变小，测量值降低。⑥测得假阳性升高现象与上面相反，如用多克隆抗体测定单克隆病，则抗原相对过剩（单一抗原决定簇），致使沉淀圈呈不相关扩大，从而造成某一成分的伪性增加。15．沉淀反应可应用在那些方面？答：沉淀反应主要应用于体液内包括血液、尿液、脑脊液、胸水、泪液、关节腔液等内的蛋白质（如MW10000~50000，标本浓度为1mg/L~100g/L）测定，应用最广泛的是可以准确定量的免疫浊度法，也可用于药物的测定。16．双向琼脂扩散试验的原理是什么？答：双向琼脂扩散试验的原理为可溶性抗原和抗体在含有一定电解质的琼脂凝胶板的对应孔中各自向对方扩散，在最适当的比例处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的位置、形状及对比关系，可作出对抗原或抗体的定性分析。五、论述题1．试对沉淀反应各类试验方法进行评价。答：沉淀反应可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、絮状沉淀试验、免疫浊度测定等试验。（1）单向免疫扩散试验是一种稳定、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用的常规方法。敏感性高，检测限为1.25μg/ml。起其结果可经干燥、染色后长期保存。但该法需要时间较长，每次测定时须制作标准曲线比较麻烦。（2）双向免疫扩散试验简单易行，结果可靠，特异性高，分辨率高于对流免疫电泳，成本低廉，结果可经染色干燥后长期保存；缺点是敏感性较低（如检测甲胎蛋白敏感度为30μg/ml），扩散缓慢，不能精确定量。（3）免疫浊度法①快速、检测不必等到抗原抗体反应达到平衡，而是在起始阶段测定，大大节约了反应时间，每小时可检测数十份标本。②敏感，最小检出量可达ng水平。③检测范围广，理论上任何能形成抗原抗体沉淀反应的物质均可用此法检测。④缺点是所用抗血清质量要求高，仪器须装电脑，价格较贵。（4）絮状沉淀试验较实用、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用，但须稀释标本比较麻烦。第七章放射免疫技术一、选择题：1．放射免疫技术间接标记法的缺点是AA．添加基团可能影响被标记物的免疫活性B．标记物化学纯度低C．降低标记物的免疫活性D．标记物的比放射性低E．降低标记物的亲和力2．125