潘复旦细胞遗传学检测与

细胞遗传学检测与分 病-广义潘金基本结构：DNA+间期：染色质(DNA解螺旋成细丝，不易 色体上)。 细胞遗传学发展

确定

G、R等各

多色体46

CML +

中期间

高通 技：aCGH,SNP-非显带时 显带时非显带时期的重要发 45,X和47,XXY(1959年

18三体和13

疾 特异 异Nowell等发现的CML的48,XXXY显带期后肿 研究首先在白血病中取得突 ) 目的与要了解细胞遗传学中主要的显带原特过 优生优内容与方各 显带技术步细胞遗传学常见显带技术及原Q原理：用DNA烷化剂氮芥喹吖咽为荧光，增强，富含GC的DNA则荧光很弱，纵轴显示带纹(1970,Caspersson,瑞典)理后GiemsaG带原理：标本经过胰蛋白酶处理后，抽提了DNA上 纵轴显示带纹(1971,Seabright)。(340条R带原理：标本受热富含AT区段单链化，不易为 高分辨带原理：MTX阻滞细胞DNA合成，使细胞同步 各种显带技术特C带仅在着丝粒处有带纹，对识别 G带带型与Q带一致，普通显微镜下观察。与R带 R带大多带型与G带相反故得名。带纹较少(约 Q G G 高分辨G内容与方各 显带技术步核型分析在骨髓/外周血/ 细 分析流程方法(总论直接法骨• 短期培养法骨髓经有核细胞计数后按一定细胞密度(1-2×106/ml)接种到 细胞 同步法应用MTX(甲氨蝶呤)或氟脱氧尿嘧啶核苷(Fdu)处理17h后，收制片高中期相法骨髓细胞短期培养后，加入秋水仙酰胺再培养12-24h，再获制72h培养法一般外周血接种到培养基内后，加入PHA(植物血凝素)，培72h后收获制片较长期培养法羊水细胞接种至培养基后，培养10收获各步原 体很好分散。(0.075mol/LKCL,时间不能过长，应用固定液处理细①固定液处理细胞后可以防止细胞变抽提了与 结的组蛋白带后可产清晰带。甲醇：冰醋酸=3:，固定液新鲜配制，多次反复固)滴片使细胞膜破裂 分散气干法：从冰水中取出玻片，滴片后立即吹气，再通火焰干燥。(30CM高度下滴，2-3d/片)(G显带边缘着火法：从2030C高度下滴，3d/)Giemsa液染色：用磷酸盐缓冲液将原液1:10稀释，染10钟。(稀释后染液不稳定，易失效要新鲜配制各论---外 色具体操作步 后，置37℃温箱培养72h(每天摇匀)收获细加入秋水仙酰胺(0.05ug/ml终浓度)37℃吸去上清，加入37℃预温的0.075mol/LKCL8ml,混匀后置37℃温箱15分钟。预固定：加入固定液1ml，混匀离心：1000转/min，10离心离心第三次固定：同“第二悬液保存：短期保存于4℃冰箱各论-- 脐 色具体操作步 其余步骤同“外周具体操作步标 在B 下抽取羊水15-接离心(1000转吸去上清，保留细胞沉淀和约1ml羊水用吸管吹打混匀，吸至2瓶含3ml羊水培养基的25ml细胞培养瓶中(0.5ml/瓶)培混匀置37℃水平静止培养10天左右（不要挪动，以免影响细胞贴壁倒置显微镜观察见细胞贴壁生长并形成细胞群，此时可以换液收获培养至第10天，加入秋水仙酰胺(终浓度0.1ug/ml),37℃3-6h。培养结束后加1ml胰蛋白酶(0.25%)消化，37℃5分钟，终止消化，将细胞吸入离心管中离以下低渗、固定、细胞悬液配制和保存等步骤同“外周血各论---骨 (直接法具体操作步标 用肝素湿润针筒抽取骨髓2-5ml,立即注入1640培养基细胞接种直接法不需要进行培养，但需要进行骨髓有核匀置37℃温箱1h后.将细胞倒入离心管，1000转/min离心混匀后置37℃温箱30分钟

0.075mol/LKCL固定、悬液配制和保存同“外 色 各论---骨 (短期培养法具体操作步标 同“直接法”标本接种进行骨髓有核细胞计数后，再按细胞培养将培养瓶放入37℃温箱中持续培养或48h其余步骤同“直接各论---骨 (同步法培养法MTX法具体操标 和接种同“短期培养法培养接种后的细胞37℃温箱中培养，次日下午3:00左右加入MTX，终浓处 去上清，加入 640培养基10ml，混离心(1000转 收获细胞加入秋水仙酰胺，终浓度0.1ug/ml,37℃10min。将细胞倒入离心管，1000转/min离心10分钟。低渗、固定、悬液配制和保存以上方 适合G/R显各论---骨 (同步法培养法Fdu法具体操标 、细胞接种和培养同“MTX法处次日下午3:0d0ol终浓度4uol/L),37℃第三天上午8点加入BrdU(终浓度30ug/ml)，继续培养5-7h收获细胞加入秋水仙酰胺，终浓度0.05ug/ml,37℃10min细胞倒入离心管，1000转/min离心10 各论---骨 (高中期相法具体操作步细胞接种和培养同“骨髓短期培养处理及细胞收获细胞培养24h后加入秋水仙酰胺本 适合G/R显内容与方各 显带技术步Q显带步气干法滴片，室温下老化2标本在95%、70%和50%在MacⅠ1vaine’s缓冲液中漂洗20.005%芥子喹吖因(QM)溶液室温染色10-20mins缓冲液漂洗2-3加1-2滴缓冲液于载玻片，封片 质量要求高；易淬G显带步标本老化或烤片气干法滴片后于37℃温箱一周或将0.125%胰酶溶液置37℃水浴温将玻片投入胰酶溶液，轻轻振荡30-取出片子于PBS溶液中一过性漂洗2新鲜配制5%Giemsa染色液染5-自来水冲片龄短胰酶处理时间短，反之则长；BM标本处理时间较PBR显带步将pH6.5aes.育。将干燥玻片放入温育后的Earle’s溶液中显60-0i5i。新鲜配制10%Giemsa染色液染自来水冲洗，待干，镜检Earle’s显带液pH值和水浴温度对显带质量影响C显带步气干法滴片，置室温老化30.2NHCL室温处理去离子水冲洗，自然晾干标本于新鲜配制并过滤的1.5%Ba(OH)250℃水浴处理去离子水反复冲洗，依次70%和90%乙醇一过性漂洗，晾将玻片于60-65℃的2×SSC中孵育1-去离子5%Giemsa染色液染10-水洗，待干，镜C带主要鉴别1、9、16、Ba(OH)2要加盖，防止与空气中CO2生存G带型识四像鞭五黑腰，六号像个脸，十一低来十

二十头重脚二十一二十二头上十三，四，五一二一；X染色一十六长臂缢痕

Y染色长臂带黑Q带与GR带无口诀，与G带基本相核型命名(基本InternationalSystemforHumanCytogenetic 核型，其中有一个涉及9和22 的相互易位常用缩写符号：p短臂、q长臂、t易位、del缺失、inv倒位 内容与方各 显带技术步恶性血液 异常的基本特获得克隆性至少两个细胞有同样的 平衡型和不平衡平衡型易位或倒

融 高表 畸变导致融 的4种机恶性血液病 畸变的类数目畸变多倍体(>69非整倍体(三体、多体或单体结构畸内缺失、重复、倒位、等臂、环状间易位、插入其 标 、双微体、均匀CML 改 为CML的标 ，1960年Nowell等 Philadelphia所发现因而得1973年Rowley同时用Q带和G带证实 t(9;22)(q34;q11)CLL常见 异 常规核型三体- 异常检出总的异常检出率：40-检出率随病程进展而增加RA、RASRAEB正常核型不能否定MDS诊 畸变类缺丢失/增易其+4,-1q-7,+9,-17,-del(20)(+21,-畸变在MDS5q-综合征RA7q- 46,XX,AML 异 40%-49%的AML显示正常核型。后者在分子 AML常见的再现 重伴t(8;21)(q22;q22)(AML1/ETO)的伴t(15;17)(q24;q21)(PML/RAR)的伴inv(16)(p13q22)(CBFB/MYH11)和骨髓嗜酸粒细胞异伴11q23(MLL)重排的AML-M2t(8;21)(q22;q22),-AML-M2t(8;21),-AML-M3AML-M3+8,AML-M4Eo涉及11q23/MLL易位 断裂点的分AML-M5a 异>50条超二前体B- 前体T->50>50条的超二倍体ALL急 核型的预后分预后等 核型类 t(8;21)、t(15;17) 正常、+8、+21、+2211q23异常、del(9q)、

数目>50条的超倍正常、47-50的超二倍体、 -5、del(5q)、-7、3q异常复杂异

亚二倍体、近单倍体、t(9;22)t(4;11)、t(1;19)、贫血(Fanconi断裂种阳性结果ApositiveFAresultwaschromosomebreakageincreased>10foldcomparedwithcontrol.Chromosomebreakagesingleordoublechromatidbreakages,tri-andquadri-radials,rings,dicentricsandfragments).分析的临床和生物学克隆 异常有助于白血病的诊断和鉴别诊特异 重排有助于急白分监测急白缓解或复发和慢粒急变的重要指 标志验证BMT是否成为独立的预后指协助选择适当的治疗方为分子学研究提供重要线内容与方各 显带技术步 各种实体瘤 异淋巴瘤的主 异核 改 病理类

伯基特淋巴

70%-

粘膜相关组织淋巴 25%-

间变大细胞淋巴 t(2;8)、t(8;14)及多发性骨髓瘤14q+见于74%的MM，包括 (q13;q32)

、 及del(13)(q14)见于40%的del(17)(p13)见于55%的其它实体实体瘤的 改变极为复杂，多倍体、双微体、均匀染 、等臂 、环 和标记 等尤为多见，其中 胚胎性肿瘤 改肿瘤类 改 发生视网膜Wilm神经母细胞恶性黑色素骨外粘液样的软骨肉

，DMs/HSRst(11;22)(q24;q12)(EWS-t(12;22)(q13;q12)(EWS-t(9;22)(q22;q11)(EWS-t(9;17)(q22;q11.2TAF2N- (TCF12-

神经母细胞瘤透明细胞肉瘤t(12;22)骨外骨外粘液样软骨肉瘤t(9;22)实体肿 研究的临床和生物学意 研究提供了重要线内容与方各 显带技术步遗传病的概念及特概念由于生殖细胞或卵内的遗传物质发生特征垂直遗传为遗传病的主要特征，常表现出 遗传病的发病概率及其分遗传病类 概率遗传① 显② 隐 病 合

4.5-2-2-0.5-5-7-21-病(狭义 病患儿。数目畸变：减 不分离 后期延迟结果。(较多见结构畸变：细 过程 断裂而引起各种结重排数目畸 结构畸非整倍 缺多倍 重三 易单 倒环Down’s正常儿童高出00号12为D15和D14座位间平均M大三体导致)机理：卵细胞减 21号不分离 卵有 中不分 Down综合征患Down综合征患儿核 18三体(Edwards综合征)(1/3500-13三体(PatauKlinefelter综合 发育不全综合：1/1000-表型特征：外表 高身材，皮肤细腻，无明显 核型异常：80%为47,XXY，20%为其它异常，包49,XXXXY，嵌合体机理 形成时不分离 形成时不分治疗：雄激素替代治疗甲 酮 1-2次/日，可善第二性征，但不能恢复发育。(极少数 T