药物的杂质检查第二军医大学

药物的杂质检查(二）Impuritytestofdrugs第一节概述一、药物纯度及其要求二、杂质的来源与种类三、杂质的限量第二节一般杂质的检查方法氯化物检查（ChP2010二部附录ⅧA）原理:利用药物中的微量氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银交替微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，判断供试品中氯化物是否符合限量规定。取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。操作方法氯化物取本品0.60g，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.01%）。《中国药典》葡萄糖中氯化物的检查

特别注意：带色供试品中氯化物检查内消色法取供试品溶液两份，于其中一份中先加入硝酸银试液，如显浑浊，可反复滤过（滤纸事先用含有硝酸的水洗净其上的氯化物），至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试溶液，再依法检查。

不同溶解性质的供试品

溶于水的有机药物，可直接依法检查；

不溶于水的有机药物，多数采用加水振摇，使所含氯化物溶解，滤除不溶物或加热溶解供试品，放冷后析出沉淀，滤过，取滤液依法检查；

溶于稀乙醇或丙酮中的有机药物，可加稀乙醇或丙酮溶解后依法检查。硫酸盐检查法（ChP2010二部附录ⅧB）硫酸钡白色浑浊纳氏比色管比浊铁盐检查法（ChP2010二部附录ⅧG）红色可溶性硫氰酸铁配离子纳氏比色管比色第二节一般杂质的检查方法重金属检查法LimitTestforHeavyMetalsChP2010二部附录ⅧH第二节一般杂质的检查方法1.重金属元素的危害定义：在实验条件下能与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡等。与体内酶蛋白上的SH和S=S键牢固结合,从而使蛋白质变性失活。铅:损害神经系统，造血系统，血管和消化系统；汞:损害肾脏，造成肾功能衰竭。重金属以铅为代表。2.硫代代乙酰胺胺法（第第一法））1）原理理硫代乙酰酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓缓冲液））条件下下水解，，产生硫硫化氢，，与微量量重金属属离子生生成黄色色到棕黑黑色的硫硫化物均均匀混悬液。CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2+PbS+2H+2）操作作方法取各药品品项下规定量的供试品品，加醋酸盐缓缓冲液(pH3.5)2ml与水适量量使成25ml，加硫代代乙酰胺胺试液2ml，放置2分钟后后，与标标准铅溶溶液一定量按同法制制成的对对照液比比较（置置白纸上上，自上上向下透透视），，以判断断供试品品中重金金属离子子是否超超过限量量。第一法适适用于溶溶于水、、稀酸和和乙醇的的药物，，为最常常用方法法。3）讨论论（1）适适宜目视视比色范范围为每每25ml溶液液中含10g-20g的Pb，相当当于每1ml含含10gPb的的标准铅铅溶液1ml-2ml。（2）溶溶液的pH值在在3-3.5，，硫化铅铅沉淀较较完全。。用醋酸酸盐缓冲冲液（pH3.5）控控制溶液液pH值值。（3）供供试品如如有色：：在对照溶溶液管中中滴加少少量稀焦焦糖溶液液或其它它无干扰扰的有色色溶液；；取两倍量量供试品品，分成成两等份份，在一一份中加加硫代乙乙酰胺试试液，用用滤膜滤滤除金属属硫化物物沉淀后后，加入入标准铅铅溶液作作为对照照溶液，，再与另另1份供供试溶液液比较。。（4）铁铁盐存在在微量高铁铁盐：加抗坏血酸酸或盐酸酸羟胺供试品中中若有微微量高铁铁离子存存在，在在弱酸性性溶液中中将氧化化硫化氢氢而析出出硫，产产生浑浊浊，影响响比色。。可先加加抗坏血血酸0.51.0g，使使高铁离离子还原原为亚铁铁离子，，再按常常规步骤骤检查。。重金属与与有机药药物结合合怎么办办？重金属不不溶于酸酸水怎么么办？重金属量量很低怎怎么办？？重金属检检查法3.炽灼灼后的硫代乙酰酰胺法（（第二法））适用于含含芳环、、杂环及及难溶于于水、稀稀酸及乙乙醇的有有机药物物。1）操作作方法：：精密称取取规定量量供试品品置坩埚中，在电电炉上缓缓缓炽灼灼至完全全炭化，，放冷，，加硫酸0.5-1.0ml，，使恰湿湿润，用用低温加加热至硫硫酸除尽尽，加硝酸0.5ml，蒸蒸干，至至氧化氮蒸蒸气除尽尽后，放冷冷，在500-600℃（马福炉炉）炽灼灼使完全全灰化，，放冷，，加盐酸酸2ml，置水水浴上蒸蒸干后加加水15ml，，微热溶溶解，转转移入纳纳氏比色色管，滴滴加氨试试液至对对酚酞指指示液显显中性，，再加醋醋酸盐缓缓冲液（（pH3.5））2ml，依第第一法检检查。2）讨论论（1）炽炽灼温度度：温度度太低，，灰化不不完全；；温度太太高，重重金属损损失越多多，如铅铅在700℃经经6小时时炽灼，，回收率率仅为32%。。应控制制在500~600℃℃炽灼使使完全灰灰化。（2）炽炽灼残渣渣加硝酸酸加热处处理后，，必须蒸蒸干除尽尽氧化氮氮，否则则亚硝酸酸可使硫硫化氢氧氧化析出出硫。（3）为为了消除除盐酸或或其他试试剂中可可能夹杂杂重金属属的影响响，对照照溶液应应取同样样、同量量试剂在在坩埚中中蒸干后后，依法法检查。。(空白白试验)（4）含含钠盐或或含氟的的有机药药物在炽炽灼时能能腐蚀瓷瓷坩埚，，应改用用铂坩埚埚。4.硫化化钠法（（第三法法）适用于溶溶于碱性性水溶液液而难溶溶于稀酸酸或在稀稀酸中即即生成沉沉淀的药药物。操作方法法：取规定量量的供试试品，加加氢氧化化钠试液液5ml和水20ml使溶解解后，加加硫化钠钠试液5滴，再再与一定量标准铅溶溶液经同同样处理理后的颜颜色进行行比较。。司可巴比比妥钠中中重金属属的检查查取本品1.0g，依法法检查（（附录ⅧⅧH第三三法），，含重金金属不得得过百万万分之二二十（20ppm）。。硫化钠试试液对玻玻璃有一一定的腐腐蚀性。。硫化氢试试液有恶恶臭和毒毒性，不不稳定，，浓度也也难以控控制，应应临用新新配。5.微孔滤膜膜法（第第四法））重金属限限量低时时，用纳纳氏比色色管难以以观察，，用微孔孔滤膜滤滤过，重重金属硫硫化物沉沉积于微微孔滤膜膜上形成成色斑，，与一定定量的标标准铅溶溶液同法法处理后后产生的的色斑比比较，确确定重金金属是否否超过限限量。EUROPEANPHARMACOPOEIA6.0,(2008)HEAVYMETALSMETHODE滤器上盖盖部分连接头滤器下盖盖部分滤膜垫圈尼龙垫网网待测液注射器转转移、压压滤微孔滤膜膜过滤法法检重金金属装置置第一法法：硫代乙乙酰胺胺法，，适用用于溶溶于水水、稀稀酸和和乙醇醇的药药物。。第二二法法：有机机破破坏坏法法，，适适用用于于含含芳芳环环、、杂杂环环以以及及难难溶溶于于水水、、稀稀酸酸、、乙乙醇醇的的有有机机药药物物。。第三三法法：碱溶溶解解法法，，适适用用于于溶溶于于碱碱性性水水溶溶液液而而难难溶溶于于稀稀酸酸或或在在稀稀酸酸中中即即生生成成沉沉淀淀的的药药物物。。第四四法法：微孔孔滤滤膜膜法法，，适适用用于于含含2-5µµg重金属属杂质质的检检查。。重金属属检查查法砷盐检检查法法LimitTestforArsenicsChP2010二部部附录录ⅧJ第二节节一一般杂杂质的的检查查方法法砷元素素的危危害砷为毒毒性杂杂质，，扩张张毛细细血管管，麻麻痹血血管舒舒缩中中枢，，使腹腹腔脏脏器严严重充充血，，引起起肝、、肾、、心等等实质质器官官的损损害。。（一））古蔡蔡（Gutzeit）氏氏法原理利用金金属锌锌与酸酸作用用产生生新生生态的的氢，，与药药物中中微量量砷盐盐反应应生成成具挥挥发性性的砷化氢氢，遇溴化汞汞试纸纸产生黄黄色至至棕色色的砷斑，与一一定量量标准准砷溶溶液所所生成成的砷砷斑比比较，，判定定药物物中砷砷盐的的含量量。其其反应应式如如下：：As3++3Zn+3H+AsH3+3Zn2+AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2++3H2OAsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2黄色色AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3棕色色溴化化汞汞试试纸纸醋酸酸铅铅棉棉花花反应应液液标准准品品样品品Gutzeit法法检检砷砷装装置置ABC标准准砷砷斑斑的的制制备备：精精密密量量取取标准准砷砷溶溶液液2ml(1μg/ml)，置置A瓶瓶中中，，加加盐盐酸酸5ml与与水水21ml，，再再加加碘化化钾钾试试液液5ml与与酸性性氯氯化化亚亚锡锡试试液液5滴滴，，在在室室温温放放置置10分分钟钟后后，，加加锌锌粒粒2g，，立立即即将将装装妥妥的的导导气气管管C密密塞塞于于A瓶瓶上上，，并并将将A瓶瓶置置25~40℃℃水水浴浴中中，，反反应应45分分钟钟，，取取出出溴溴化化汞汞试试纸纸，，即即得得。。取按按各各品品种种项项下下规规定定方方法法制制成成的的供供试试品品溶溶液液，，置置A瓶瓶中中，，照照标标准准砷砷斑斑制制备备方方法法操操作作，，将将供供试试品品砷砷斑斑与与标标准准砷砷斑斑比比较较，，不不得得更更深深。。砷盐取本本品2.0g，加水5ml溶解后，，加稀硫酸5ml与溴化化钾溴试液0.5ml，，置水浴上加加热约20分分钟，使保持持稍过量的溴溴存在，必要要时，再补加加溴化钾溴试试液适量，并并随时补充蒸蒸散的水分，，放冷，加盐盐酸5ml与与水适量使成成28ml，，依法检查（（附录ⅧJ第第一法），应应符合规定（（0.0001%）。《中国药典》》葡萄糖中砷砷盐的检查Q1：供试品2.0g与标准砷溶液2ml形成的砷斑比比较的做法(1)，供试试品1.0g与标准砷溶液1ml形成的砷斑比比较的做法(2)，哪个个合适？Q2：为何加碘化化钾及氯化亚亚锡？Q3：醋酸铅棉花花的作用与注注意事项Q4：为何选用溴溴化汞试纸而而不选用氯化化汞试纸，注注意事项有哪哪些？（二）二乙基基二硫代氨基基甲酸银法(Ag-DDC法)原理砷化氢与Ag(DDC)吡啶溶液作用，使使Ag(DDC)中的银银还原为红色色胶态银，与与相同条件下下一定量标准准砷溶液所呈呈色用目视比比色法或在510nm处处测定吸收度度，进行比较较。（三）次磷酸酸法原理在盐酸酸性液液中，次磷酸酸将砷盐还原原为棕色的游游离砷，与一一定量的标准准砷溶液用同同法处理后所所显颜色比较较，来控制药药物中的砷限限量。——用于硫化化物、亚硫酸酸盐及含锑药药物等的砷盐盐检查时不产产生干扰，但但灵敏度比古古蔡氏法低。。各国药药典砷砷盐检检查法法ChP（2010））古古蔡蔡氏法法、Ag（（DDC））法Ph.Eur.(2008)古古蔡氏氏法、、次磷磷酸法法USP（2009））Ag（DDC）法法溶液颜颜色检检查法法（ChP2010二二部附录ⅨA）控制药药物中中有色杂杂质的含量量。与与标准准比色色液比比较、、分光光光度度法或或色差差计法法。易炭化化物检检查法法（ChP2010二二部附录ⅧⅧO））检查查药物物中遇遇硫酸酸易炭炭化或或易氧氧化而而呈色色的微量有有机杂杂质。溶液澄澄清度度检查查法（ChP2010二二部附录ⅨⅨB）澄清度度是检检查药药品溶溶液的的混浊浊程度度，反反映不溶性性杂质质的存在在情况况（特特别是是用作作注射射剂的的原料料药纯纯度控控制））。第二节节一一般杂杂质的的检查查方法法炽灼残残渣检检查法法（ChP2010二二部附录ⅧⅧN））有机药药物经经炽灼灼炭化化，至至完全全灰化化，使使非挥发发性无无机杂杂质（多为为金属属的氧氧化物物或盐盐类））成为为硫酸酸盐，，称为为炽灼灼残渣渣。(700-800℃℃)干燥失失重测测定法法（ChP2010二二部附录ⅧⅧL））药物物在规规定条条件下下经干干燥后后所减减失的的重量量，以以百分分率表表示。。主要要控制制药物物中的的水分，也包包括其他挥挥发性性物质质如乙醇醇等。。水分测测定法法（ChP2010二二部附录ⅧⅧM）药物中中的水水分包包括结结晶水水和吸吸附水水。ChP和USP均收收载费费休氏氏法和和甲苯苯法测测定药药物中中的水水分。。第二节节一一般杂杂质的的检查查方法法残留溶溶剂测测定法法（ChP2010二二部附录ⅧⅧP））苯/benzenebp80.1℃氯仿/chloroformbp61.2℃1,4-二二氧六六环/dioxanebp101.4℃℃二氯甲甲烷/dichloro-methanebp40.0℃吡啶/pyridinebp115℃℃甲苯/toluenebp110.6℃℃环氧乙乙烷/ethyleneoxidebp11℃种类多多，毒毒性大大，检检测要要求高高。残留溶剂剂测定法法确定残留留溶剂的的研究对对象残留溶剂剂分类残留溶剂剂表示方方法A.允许许日接触触量PDEB.浓度度限度(%)=药物中常常见残留留溶剂及及其限度度第一类溶溶剂（毒毒性大且且有致癌癌并对环环境有害害，避免免使用））溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)苯0.020.0002四氯化碳0.040.00041,2-二氯乙烷0.050.00051,1-二氯乙烷0.080.00081,1,1-三氯乙烷15.00.15第二类溶溶剂（对对人有一一定毒性性，限制制使用））溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙腈4.10.041氯苯3.60.036三氯甲烷0.60.006环己烷38.80.3881,2-二氯乙烯18.70.187二氯甲烷6.00.06第二类溶溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙二醇6.20.062甲酰胺2.20.022正已烷2.90.029甲醇30.00.3甲基环已烷11.80.118第二类溶溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)N-甲基吡咯烷酮5.30.053吡啶2.00.02甲苯8.90.089N,N-二甲氧基甲酰胺8.80.0881,4-二氧六环3.80.038第三类溶溶剂（对对人健康康危险性性较小，，推荐使使用）溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙酸50.00.5丙酮50.00.5正丁醇50.00.5二甲亚砜50.00.5乙醇50.00.5第三类溶溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙酸乙酯50.00.5乙醚50.00.5正丙醇50.00.5异丙醇50.00.5异丁醇50.00.5第四类溶溶剂（尚尚无足够够毒性资资料的溶溶剂）1,1-二乙氧氧基丙烷烷1,1-二甲甲氧基甲甲烷2,2-二甲氧氧基丙烷烷异异辛烷烷异异丙醚醚甲基异丙丙基酮甲甲基四氢氢呋喃石石油醚三氯乙酸酸三三氟乙乙酸残留溶剂剂测定法法——气气相色色谱法1.色谱谱柱毛细管柱柱、填充充柱2.系统统适用性性试验理论板数数N不低低于5000（（毛细管管柱）1000（填充充柱）相邻峰分分离度R大于1.5精密度RSD内标法不不大于5%外标法不不大于10%残留溶剂剂测定法法——气气相色色谱法3.供试试品溶液液的制备备顶空进样样0.1-1g供供试品，，水、DMF、、DMSO溶液直接接进样水水或或合适溶溶剂4.对照照品溶液液的制备备水作溶剂剂或50%DMF、、DMSO溶解解后再用用水逐步步稀释限量检查查：根据据限量配配制对照照品浓度度定量测定定：接近近供试品品残留量量的浓度度残留溶剂剂测定法法——气气相色色谱法5.测定定法第一法毛毛细细管柱顶顶空进样样等温法法检查有机机溶剂残残留的数数量不多多，且极极性差异异较小的供供试品第二法毛毛细细管柱顶顶空进样样系统程程序升温温法检查有机机溶剂残残留的数数量较多多，且极极性差异异较大的供供试品第三法溶溶液液直接进进样法可采用填填充柱，，亦可采采用适宜宜极性毛毛细管柱柱示例大孔树脂脂有机溶溶剂残留留大孔树脂脂是一种种不溶于于酸、碱碱及各种种有机溶溶剂的有有机高分分子聚合合物,应应用大孔孔树脂进进行分离离的技术术是20世纪纪60年年代末末发展起起来的继继离子交交换树脂脂后的分分离新技技术之一一物理化学学稳定性性高比表面积积大吸附容量量大选择性好好吸附速度度快解吸条件件温和再生处理理方便使用周期期长宜于构成成闭路循循环节省费用用溶剂残留留的引入入大孔吸附附树脂主主要以苯苯乙烯、、а-甲甲基苯苯乙烯、、甲基丙丙烯酸甲甲酯、丙丙腈等为为原料加加入一定定量致孔孔剂二乙乙烯苯聚聚合而成成,多为为球状颗颗粒,直直径一般般在0.3～～1.25mm之之间,通常分分为非极极性、弱弱极性和和中极性性。主要存在在正己烷、、苯、甲甲苯、对对二甲苯苯、邻二二甲苯、、苯乙烯烯、二乙乙烯苯（对于树树脂的检检测）洗脱过程程采用不不同比例例的乙醇醇，因此此也存在在乙醇的残留（（主要存存在于产产品中））乳癖消原原料药（（提取物物）中有有机溶溶剂残留留的测定定乳癖消原原料药的的制备取昆布、、漏芦等等14味味药材按按处方比比例称取取后加水水煎煮两两次，合合并两次次提取液液滤过，，滤液减减压回收收浓缩，，上样D-101大孔孔树脂，，静止吸吸附，采采用梯度度洗脱：：水—20％乙乙醇—75％乙乙醇。收收集醇洗洗部分，，减压回回收乙醇醇后喷雾雾干燥，，成细粉粉。可能残留留的溶剂剂——乙乙醇———第三类类溶剂，，限度0.5％％实验部分分色谱条件件仪器：岛岛津GC-14B气相相色谱仪仪色谱条件件：SIMPLICITY-530m×0.32mm××0.25m毛细管管柱FID检检测分流比30:1，进样样量1l。进样分析析开始毛毛细管60℃恒恒温6min，，而后程程序升温温40C/min至至200C，并维维持1min。。实验部分分系统适用用性试验验：理论塔板板数以乙乙醇、正正己烷、、苯、甲甲苯、对对二甲苯苯、苯乙乙烯和二二乙烯苯苯色谱峰峰计算应应不低于于5000；乙醇、正正己烷、、苯、甲甲苯、对对二甲苯苯、苯乙乙烯和二二乙烯苯苯与内标标物正庚庚烷的色色谱峰分分离度应应大于1.5；；以内标法法测定时时，所得得待测物物与内标标物色谱谱峰面积积之比的的相对标标准偏差差应不大大于5%。tR5.355对对二甲苯苯tR5.982苯苯乙烯tR9.008、9.0979.338、9.462二二乙烯烯苯tR2.170乙乙醇tR2.410正正己烷tR2.682苯苯tR2.845正正庚烷（（内标））tR3.487甲甲苯峰号保留时间半峰宽理论塔板数分离度12.1700.03521361.2380.00022.4100.02840248.4023.81632.6820.03729817.5144.23142.8450.03536690.6412.20953.4870.05522306.6957.13065.3550.08721163.8541.54675.9820.10318615.8323.33389.0080.032448989.93822.40799.0970.033412739.3751.282109.3380.030536983.6253.816119.4620.033446676.9691.974乙醇、正正己烷、、苯、甲甲苯、对对二甲苯苯、苯乙乙烯、二二乙烯苯苯和正庚烷烷气相色色谱分离离系统评评价线性范围围与最低低检测限限序号浓度（g/ml）峰面积比(A乙醇/A内标)110.380.03140.003220.760.06240.002351.900.15370.0044103.80.30750.0015207.60.59470.0446519.01.51800.024710383.05660.045Y=-0.0024+0.0029Cr=0.9999取标准曲曲线线性性方程制制备项下下的最低低浓度标标准溶液液，通过过不同比比例稀释释后进行行测定，，在信噪噪比值约约为3的的条件下下，最后后一次测测得积分分值的浓浓度为最最低检出出浓度，，其中乙醇醇最低检检测限约约为5.190g/ml线性范围围与最低低检测限限乙醇标准准曲线线线性方程程(n=5)Y=-0.0024+0.0029Cr=0.9999正己烷标标准曲线线线性方方程(n=5)Y=0.0159+0.0048Cr=0.9997苯标准曲曲线线性性方程(n=5)Y=-0.000016+0.0077Cr=0.9998甲苯标准准曲线线线性方程程(n=5)Y=0.0009+0.0055Cr=0.9999对二甲苯苯标准曲曲线线性性方程(n=5)Y=0.0037+0.005Cr=0.9999苯乙烯标标准曲线线线性方方程(n=5)Y=0.0024+0.0044Cr=0.9999二乙烯苯苯标准曲曲线线性性方程(n=5)Y=0.006+0.0063Cr=0.9999最低检测测限乙醇约为为5.190g/ml正己烷约约为5.380g/ml苯约为0.7350g/ml甲苯约为为5.000g/ml对二甲苯苯约为5.420g/ml苯乙烯约约为6.340g/ml二乙烯苯苯约为6.400g/ml精密度试试验(重重复性)取上述标标准溶液液系列中中的4号号标准溶溶液，按按气相色色谱测定定条件连连续进样样5次，，计算乙乙醇、正正己烷、、苯、甲甲苯、对对二甲苯苯、苯乙乙烯、二二乙烯苯苯和内标标物正庚庚烷的峰峰面积比比值序号A乙醇

/A内标A正己烷

/A内标A苯

/A内标A甲苯/A内标A对二甲苯/A内标A苯乙烯/A内标A二乙烯苯/A内标10.29720.49480.19740.53720.54330.56330.809720.30450.50700.19860.54010.54220.56480.807230.30150.50120.20170.53900.53990.55950.792740.30210.50270.20130.54100.53710.56460.801550.29870.49560.19890.54890.53930.56170.7958mean0.30080.50030.19960.54120.54030.56280.8014RSD(%)0.96051.01810.92780.83540.45470.39610.9039<5％样品测定定取3个批批号的样样品1.2～1.3g，用N,N-二甲基基甲酰胺胺超声溶溶解，过过滤，收收集滤液液，并定定容至50ml容量瓶瓶内，上上机测定定比值浓浓度度（g/ml）限限量（％％）对照0.061320.25批号10.045314.960.062（1.213g）批号20.049816.450.067（1.226g）批号30.055318.270.073（1.247g）实际样品品中主要要残留的的是乙醇第三节特特殊殊杂质检检查检查药物物中存在在的微量量杂质，，首要的的问题是选选择一个个专属性性强的方方法。一、利用用药物和和杂质在在物理性性质上的的差异二、在化化学性质质上的差差异三、在色色谱性质质上的差差异四、在光光谱性质质上的差差异一、色谱谱分析法法色谱法具具有高分分离效能能，专属属性强，，是检查查有关物物质的首首选方法法。TLCHPLCGC……TLC1.杂质质对照品品法制备一定定浓度的的供试品品溶液和和相应的的(浓度度符合限限度规定定的)杂杂质对照照品溶液液或系列列杂质对对照品溶溶液，点点样、展展开、检检测并比比较。供供试品溶溶液色谱谱图中除除主斑点点外的其其他斑点点(杂质质斑点)与相应应的杂质质对照品品溶液或或系列杂杂质对照照品溶液液色谱图图中的主主斑点比比较，颜颜色(或或荧光)不得更更深。TLC2.自身身稀释对对照法制备一定定浓度的的供试品品溶液；；取供试试品溶液液一定量量，按照照限度规规定，稀稀释制成成另一低低浓度溶溶液或系系列溶液液，作为为对照溶溶液，点点样、展展开、检检测并比比较。供供试品溶溶液色谱谱图中除除主斑点点外的其其他斑点点(杂质质斑点)与相应应的自身身稀释对对照溶液液或系列列自身稀稀释对照照溶液色色谱图中中的主斑斑点比较较，颜色色(或荧荧光)不不得更深深。TLC3.杂质对照照品法与与自身稀释释对照法法并用即特定杂杂质限度度采用杂杂质对照照品法，，其他杂杂质限度度采用供供试品溶溶液自身身稀释对对照法控控制。通通常应规规定杂质质的斑点点数和单单一杂质质量，当当采用系系列自身身稀释对对照溶液液时，也也可规定定估计的的杂质总总量。4.对照药物物法当无适合合的杂质质对照品品或供试试品中杂杂质斑点点颜色与与主成分分斑点的的颜色有有差异，，难以判判断其限限量时，，可用与与供试品品相同的的药物作作为对照照品，此此对照药药物中所所含待检检杂质需需符合限限量要求求，且稳稳定性好好。ChP采采用TLC检查查马来酸酸麦角新新碱中的的有关物物质样品溶液液：供试品品溶液（（1）5mg/ml、、供试品品溶液（（2）0.2mg/ml，，对照品品溶液5mg/ml；；试验结论：供试品溶溶液（1））主斑点的的位置和颜颜色应与对对照品溶液液的主斑点点相同；如如显杂质斑斑点，其颜颜色与对照照品溶液对对应的杂质质斑点比较较，不得更更深，并不不得显对照照品溶液以以外的杂质质斑点；供供试品溶液液（2）除除主斑点外外，不得显显任何杂质质斑点。HPLC高效液相色色谱法分离离效能高、、专属性强强和检测灵灵敏度高，，可以准确确地测定供供试品各组组分的峰面面积，在杂杂质检查中中的应用日日益增多。。特别是选选择HPLC测定含含量的药物物，可采用用同一色谱谱条件进行行杂质检查查。1.峰面积积归一化法法样品峰溶剂峰ChP采用用HPLC法对胰岛岛素中相关关蛋白质的的检查，按按面积归一一化法计算算，A21脱氨胰岛岛素不得大大于5.0%，其他他相关蛋白白质不得大大于5.0%。2.不加校正因子子主成分自身身对照法3.加校正正因子的主主成分自身身对照法样品液稀释释样品液溶剂峰样品峰HPLC不加校正因因子的主成成分自身对对照法ChP采用用HPLC法对头孢孢克肟中有有关物质的的检查，采采用不加校校正因子的的主成分自自身对照法法，即供试试品溶液色色谱图中如如有杂质峰峰，单个杂杂质峰面积积不得大于于对照溶液液主峰面积积的0.5倍（0.5%），，各杂质峰峰面积的和和不得大于于对照溶液液主峰面积积的3倍（（3%），，供试品溶溶液色谱图图中任何小小于对照溶溶液主峰面面积0.1倍的峰可可忽略不计计。HPLC加校正因子子的主成分分自身对照照法ChP采用用HPLC法对红霉霉素中红霉霉素B、C组分及有有关物质的的检查，采采用加校正正因子的主主成分自身身对照法，，即红霉素素B按校正正后的峰面面积计算（（乘以校正正因子0.7）和红红霉素C峰峰面积均不不得大于对对照溶液主主峰面积（（5.0%）。供试试品溶液色色谱图中如如有杂质峰峰，红霉素素烯醇醚、、杂质1按按校正后的的峰面积计计算（分别别乘以校正正因子0.09、0.15））和其他单单个杂质峰峰面积均不不得大于对对照溶液主主峰面积的的0.6倍倍（3.0%）；其其他各杂质质峰面积的的和不得大大于对照溶溶液主峰面面积（5.0%），，供试品溶溶液色谱图图中任何小小于对照溶溶液主峰面面积0.01倍的峰峰可忽略不不计。样品峰杂质峰杂质对照品品4.杂质对对照品法测测定杂质含含量ChP采用用HPLC法对二羟羟丙茶碱有有关物质中中茶碱的检检查，按外外标法以峰峰面积计，，不得过0.5%。。示例头孢克肟中中有关物质质检查取含量测定定项下的样样品溶液1ml，用用pH7.0的磷酸酸缓冲液稀稀释定容至至100ml，制成成浓度为样样品溶液的的1/100的对照照溶液HPLC取对照溶液液20μl注入液液相色谱进进行预试，，调节灵敏敏度，使主主成分峰的的峰高约为为满量程的的20～25％，与与含量测定定项下的供供试品溶液液比较，供供试品溶液液的色谱图图中如果有有杂质峰（（溶剂峰除除外），杂杂质峰面积积的综合不不得大于对对照溶液主主峰面积的的3倍（3％）采用自身对对照方法计算：有关物质（（3％）＝＝××3％％∑A-A主峰A`主峰×3主峰∑AA`主峰HPLC计算：有关物质（（3％）＝＝××3％＝（121.588-119.6601）/（（1.3031×3）×3％％＝1.48％∑A-A主峰A`主峰×3GC气相色谱法法用来测定定药物中挥挥发性特殊殊杂质，特特别是药物物中的残留留溶剂的检检查，各国国药典均采采用气相色色谱法。对于选择GC测定含含量的药物物，也可采采用同一色色谱条件进进行杂质检检查。GC检查方法内标法、外外标法、面面积归一化化法和标准准溶液加入入法。标准溶液加加入法精密称(量量)取杂质质对照品适适量，配制制成适当浓浓度的对照照品溶液，，取一定量量，精密加加入到供试试品溶液中中，根据外外标法或内内标法测定定杂质含量量，再扣除除加入的对对照品溶液液含量，即即得供试品品中某个杂杂质的含量量。GC示例ChP采用用内标法对头孢地嗪嗪钠中的残残留溶剂进进行检查，，按内标法法以峰面积积比值计算算，含乙醇醇不得过2.0%；；采用外标法法对氨苄西林林钠中的残残留溶剂进进行检查，，按外标法法以峰面积积计算，含含二氯甲烷烷不得超过过0.2%，含丙酮酮、乙酸乙乙酯、异丙丙醇、甲基基异丁基酮酮、甲苯和和正丁醇均均应符合规规定；采用面积归归一化法对恩氟烷中中的有关物物质进行检检查，按面面积归一化化计算，各各杂质峰面面积的和不不得大于总总峰面积的的8.0%；采用标准加加入法对氨曲南中中的残留溶溶剂进行检检查，按标标准加入法法以峰面积积计算，含含乙醇不得得超过2.0%，其其他均应符符合规定。。GC由于气相色色谱法的进进样量一般般仅数微升升，为减小小进样误差差，尤其当当采用手动动进样时，，由于留针针时间和室室温等对进进样量也有有影响，故故宜采用内内标法为宜宜；采用自自动进样器器时，也可可采用外标标法；采用用顶空进样样技术时，，标准溶液液加入法可可消除基质质效应的影影响；当标标准溶液加加入法与其其他定量方方法结果不不一致时，，应以标准准加入法结结果为准。。二、光谱分分析法1.紫外分分光光度法法杂质在某一波长长处有最大吸收，，而药物在此波长处处无吸收。肾上腺素中中检查酮体体。酮体在310nm波长处有最最大吸收，，而肾上腺腺素在此波波长处无吸吸收。酮体取取本品，加加盐酸溶液液（92000））制成每1ml中含含2.0mg的溶液液，照紫外外-可见分分光光度法法（附录ⅣA），在310nm的波长处处测定，吸吸收度不得得过0.05。肾上腺素（（））中中的肾上腺腺酮（））的检查260280300320A本法在杂质质检查中主主要用于药药物中无效效或低效晶晶型的检查查。某些多晶型型药物由于于其晶型结结构不同，，某些化学学键的键长长、键角