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调控转录延伸暂停重启的分子机制

3382014010背景介绍超过30%的转录活跃的基因在非刺激的条件下转录的起始步骤就已完成RNA聚合酶II介导的转录过程是基因表达的限速步骤接受刺激后，暂停结束，转录重启，继续转录出一条完整的mRNA对生物体对外界的刺激及时地作出反应与适应有重大意义研究目的DSIF、NELFRNA聚合酶II转录暂停调控转录延伸暂停重启的分子机制

P-TEFb构型改变转录重启P-TEFb是通过怎样的通路被招募？P-TEFb、Brd4和SEC三者是怎样互相作用最后导致转录的重启？Brd4和SEC实验与证明KnockdownBrd4后，通过蛋白印记法观察到特异性地减少了P-TEFb与DSIF、MED1、MED23和Tat-SF1的结合KnockdownSEC后，通过蛋白印记法观察到特异性地减少了P-TEFb与NELF、MED26和Paf1的结合证明了Brd4和SEC分别招募不同的因子让P-TEFb靶定DSIF和NELF456探究MED1、MED23和Tat-SF1在对Brd4/P-TEFb的招募，发现去除任何一个，都影响重启，进一步一个一个knockdown证明了P-TEFb---Brd4---MED1---MED23---Tat-sf1---DSIFKnockdownBrd4、MED1、MED23和Tat-sf1都会阻止spt5（DSIF的一个亚基）的磷酸化，加入Brd4的抑制剂会抑制磷酸化并且加强NELF与DSIF和PolII的结合证明了P-TEFb对spt5的磷酸化促进NELF与DSIF和PolII的分离实验与证明KnockdownMED26和Paf1都会阻止NELF在复合体上分离而阻止转录重启单单MED26阻止P-TEFb与NELF-E的结合单单Paf1阻止P-TEFb与NELF-A的结合证明了MED26招募P-TEFb到NELF-E上，Paf1招募P-TEFb到NELF-A上789只有存在Brd4、spt5、AFF1才能对Ser2磷酸化，而Brd4和AFF1对转录重启都有重要作用，当重启被阻断时候，Ser2磷酸化也停止，并且通过抑制Cdk9阻断Ser2的磷酸化并不能阻止转录重启证明Ser2的磷酸化不是转录重启所必需的当存在spt5时，去除Brd4、AFF1、AFF4任何一个都抑制Ser2的磷酸化，不存在spt5时，只有去除AFF4才抑制证明了AFF4-SEC亚型通过招募P-TEFb对Ser2进行磷酸化研究结论VestibulumanteipsumprimisinfaucibusorciluctusetultricesposuerecubiliaCurae;Donecvelitneque,auctorsitametaliquamvel,ullamcorpersitametligula.研究结论VestibulumanteipsumprimisinfaucibusorciluctusetultricesposuerecubiliaCurae;Donecvel

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