空肠弯曲菌检验课件

空肠弯曲菌检验

一、概述

空肠弯曲菌是弯曲菌属中的一个亚种，隶属于螺菌科。已被认为是引起急性腹泻的重要原因菌。目前已证明为人畜共患病菌，人们食用受到该菌污染的食品和饮用水可引起急性肠炎。空肠弯曲菌(C.jejuni)流行病学特征家畜、家禽肠道正常菌群

传染源病人，带菌者，带菌动物

传播途径动物→人密切接触、粪口传播人→人粪口传播

人群易感性人群普遍易感1～5岁儿童发病率最高二、生物学特性㈠形态与染色本菌为革兰氏阴性多形态菌，螺旋形，弯曲杆状。大小为（0.3~0.4）μm×（1.5~3）μm，呈S形或纺锤形，菌体一端或两端有单根鞭毛，长度约为菌体的2~3倍，在固体培养基上培养时间过久，如超过48h以衰老的球形菌居多。动力阳性。

㈡培养特性

⒈初次分离时需要在含5%氧、85%氮和10%二氧化碳环境中，传代后能在10%二氧化碳环境中生长，在多氧和绝对无氧环境中均不生长。⒉培养适宜温度为25~43℃，最适温度为42℃，最适pH7.2。⒊对糖类既不发酵也不氧化，呼吸代谢无酸性或中性产物，生长不需要血清，从氨基酸或三羧酸循环获得能量。⒋在布氏肉汤中生长呈均匀混浊。⒌在血琼脂上，初分离出现两种菌落特征：第一型菌落不溶血、灰色、扁平、湿润、有光泽，看上去像水滴，边缘不规则，常沿划线蔓延生长；第二型菌落也不溶血，常呈分散凸起的单个菌落（直径1~2mm）、边缘整齐、半透明、有光泽，呈单个菌落生长。当菌种传代后，如遇环境温度不适宜，易出现第二型。（三）生化特性项目胎儿弯曲菌痰弯曲菌粪弯曲菌胎儿亚种结肠亚种空肠亚种痰亚种牛亚种过氧化氢酶＋＋＋－－＋氧化酶＋＋＋＋＋＋1%甘氨酸试验＋＋＋＋＋＋H2S试验（纸条法）－＋＋＋＋＋35g/LNaCl耐受试验－－－－＋d25℃生长＋－－＋d－42℃生长－＋＋﹙－﹚d？硝酸盐还原试验＋＋＋＋＋d奈啶酸试验＋－－－？d马尿酸钠水解－－＋－－－弯曲菌属各个种的生化特性（四）抵抗力

本属菌抵抗力不强，易被干燥、直射阳光及弱消毒剂等杀灭，加热至58℃经5min可杀死。对青霉素、头孢霉素耐受，对红霉素、四环素、庆大霉素敏感。三、检验程序2.微需氧条件的制备

最佳微需氧条件是氧气5%、二氧化碳为10%、氮气为85%。微需氧条件的制备方法有很多种，例如常用的燃烛法、化学法、生物法、气袋法、仪器法等。带有双相压力计的厌氧罐：在装入平皿密封后，先抽去罐内空气至负压为7.3×104Pa（550mmHg)处，同样输入上述气体至压力为零。即可放置恒温箱内培养。3.分离培养

可直接在选择性培养基，如改良Camp-BAP布氏杆菌培养基或Skirrow氏培养平板上划线接种。与42℃培养48h后，观察可疑菌落。4.初步鉴定将可疑菌落做氧化酶和过氧化氢酶试验，如为阳性，则涂片做革兰氏染色。根据菌落生长特征、菌体染色、动力（暗视野或相差显微镜下观察动力明显）、氧化酶和过氧化氢酶阳性者，可初步确定为弯曲菌。5.确定试验 经初步鉴定后，仍需做下述试验，并且各项试验均应在5%氧气的微需氧环境中培养。（1）甘氨酸耐受性试验将分离培养所得可疑菌落接种于甘氨酸培养基中，培养48h，如为阳性，在培养基表面有云雾状生长，则为弯曲菌空肠亚种。（2）硫化氢生长试验将分离培养所得可疑菌落接种于TSL斜面上，并吊一根乙酸铅滤纸条于管口，经48~72h培养，空肠弯曲菌一般在斜面上少量生长，其反应为碱性/碱性（K/K），滤纸条变黑，但培养基底部不因硫化氢而变黑。（3）马尿酸钠水解试验将分离培养所得可疑菌落接种于马尿酸钠培养基，于42℃培养48h，离心沉淀取出部分上清液，加入三氯化铁试剂，如出现恒久沉淀物则为阳性，空肠弯曲菌呈阳性反应。

（4）35g/LNaCl耐受试验

将分离培养所得可疑菌落接种于含35g/L氯化钠肉汤培养基中，经48h培养，空肠弯曲菌不成长。

（5）42℃和25℃生长试验

将分离培养所得可疑菌落接种于两管布氏杆菌肉汤中，一管放在42℃下培养48h，一管放在25℃下培养48h，42℃生长而25℃不生长，则为空肠弯曲菌。

（6）奈啶酸试验

将分离培养所得可疑菌落涂片于血平板上，然后贴上含有39μm奈啶酸的滤纸于平板上，空肠弯曲菌敏感而肠道弯曲菌不敏感。（7）TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）试验空肠弯曲菌在TTC培养基上呈阳性，而胎儿弯曲菌为阴性，阳性者有紫色菌苔并有光泽。（8）硝酸盐还原试验

取培养物的浓菌悬液，在37℃放置2h，加入试剂观察颜色反应，以空肠弯曲菌呈红色的阳性反应。

6.生物分型（1）快速马尿酸钠水解试验（2）快速硫化氢试验（3）DNA酶水解试验试验生物型空肠弯曲菌弯曲菌嗜热弯曲菌ⅠⅡⅢⅤⅥⅦⅧⅨ快速马尿酸钠水解试验++++----快速硫化氢试验--++--++DNA酶水解试验-+

-+-+-+空肠弯曲菌的生物分型7.血清分型

空肠弯曲菌O因子分型应采用间接血凝法，H或K因子分型可用玻片凝集法。8.菌种保存

空肠弯曲菌菌种应接种在改良