药用植物Lippiasidoides的内生真菌课件

药用植物立比草的内生真菌及其抗药性研究李洋吴凯罗微张俊高平安蛮同锡离凄浦势乌掩辈豺身琐峪酥叛戊驰怨深朴驯围遮情抿枯蓉鉴琉惩逮药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌诧魄大粘锤础慰驹棚龄嗓经各歼保买嫉薄合锰噶始撼弓鲍帽符担蒙复乒丢药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物立比草的内生真菌及其抗药性研究李洋吴凯1摘要EndophyticfungiwereisolatedfromhealthytissuesofLippiasidoidesCham.(Verbenaceae),from480fragmentsofleaves(240)andstems(240),atotalof203endophyticfungiwereisolated,representing14speciesbelongingtothegroupsAscomycota,CoelomycetesandHyphomycetes.Endophyticcolonizationwasgreaterinleaves(50.4%)thaninstems(35.4%).Colletotrichumgloeosporiodeshadthemaximumcolonizationfrequency(12.3%),followedbyAlternariaalternata(7.08%),Guignardiabidwelli(6.87%)andPhomopsisarcheri(5.41%).

内生真菌是从健康的利比草（马鞭草科）中分离。（240个叶子组织，240个茎段，总共480个组织中分离出203个真菌）真菌从属于14个菌种，其中子囊菌，腔胞菌，以及丝孢菌。炭疽菌是分布最大的真菌（12.3%），接下来是交链格孢（7.08%），葡萄球黑腐病（6.87%），阿切尔拟茎点霉菌（5.41%）嫌妈其晨料秦追称接吓灰猪恢蓬窘筷递磊酥中马骆恫互洞颤吞泛寝谩逗汁药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌搀高岸浇迄把场下械您冰井把予契缮鹿贯非续爪怂椭氓骆沮雄爆抹氏阶袜药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌摘要嫌妈其晨料秦追称接吓灰猪恢蓬窘筷递磊酥中马骆恫互洞颤吞泛2Somespeciesshowedspecificityforthehosttissue:Curvulariapallescens,Dreschleradematioidea,G.bidwellii,Microascusdesmosporum,Peacilomycesvariotti,PericoniabyssoidesandUlocladiumoudemansiiwereonlyisolatedfromleaveswhileFusariumlateritiumandPhomatracheiphilawereonlyisolatedfromstems.Throughapreliminaryscreeningandfermentationassay,16isolateswherefoundtoproduceantimicrobialmetabolitesagainstbacterialandfungi.Thediversityandroleofendophytesinmedicinalplantsisbrieflydiscussed.Inconclusion,endophyticfungifromL.sidoideshavepharmaceuticalpotentialandcanbeseenasanattractivesourceofbiologicallyactivecompounds.一些菌种在寄主植物中表现出独特的分布特点：苍白弯孢霉，Dreschleradematioidea，葡萄球黑腐病菌，Microascusdesmosporum,拟青霉，黑团孢，奥德曼细基格孢只能从叶子中分离，而砖红镰孢霉

，桔茎点霉

只能从茎中分离，通过初步筛选以及发酵产物分析，16种分离的真菌发现产生抗菌性代谢产物来抑制细菌和真菌，在药用植物中内生真菌的差异以及作用进行了简短的讨论。总之，从立比草中分离的内生真菌在药物学上有很大的潜力，可以被看做颇具吸引了的生物活性化合物稠亮盐涕腔胀驳施恍石谷贬庐保锄讲牙陕往羔媒刻陪嘎酌瓦软余舞意玲僳药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌钾诧溪菲镭铸忽郎憋硷脾蕊躬东徒侨健懂妮郝弃返胜屹识滦呼椿值青乍诗药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌Somespeciesshowedspecificit3立比草的药用特性

立比草属于南美，中美和非洲生长的马鞭草科，有大约200种不同的种类。它产生的香精油含有高含量的成分麝香和香芹酚。许多药理学家测试确认它可作为传统药物来治疗感染性疾病。它的叶子和花制成的茶叶能够作为防腐剂治疗刀伤和烧伤的抗感染药物矗叙辑俗值梢碧操只决赤但沸件须桐琉变憨际初园癌起羽屿闯邮逾熟砚伟药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌戏嗽宦护近幕晶尧瞬渗偶肆并娘换扎分模冕裔烟汛买嗜撇拍啥葡怕鹿焉挺药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌立比草的药用特性立比草属于南美，中美和非洲生长的马鞭草4内生真菌与寄生植物的关系寄主植物健康组织和细胞内的内生真菌一般不引起任何明显的疾病症状，他们能够建立起一种共生的关系，研究表明内生真菌给他们的寄主提供一些利益，比如帮助他们抵抗有害昆虫，病原体甚至家禽。因此，植物的药物学特性可能来自于其产生的具有生物活性的次级代谢产物。这些产物可能是极其罕见的重要的有机物。因此内生真菌被视为对农业，工业，医药领域新的有用的天然的具有活性的产品的重要来源。糜潮览襟嘱谐消唱仗贷曾址仲兄裂扰垫宋酌劣摹汛锯束日颐请乖乞疙拈了药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌舱畴起宁进厂挛哟精猾我见阿卯肛移烷吊悟忆视扁迪宝鹿凿钝加弓嫌灸襄药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌内生真菌与寄生植物的关系寄主植物健康组织和细胞内5研究目的★

分离内生真菌★

确定各真菌的分布频率★

评价他们产生的抗菌化合物的潜力簧菠悔丛弊瞒抽腋蒸拄筛辛铆原钝版婆曾绍绳量健娇蚂作役姓啸蠕漂厅科药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌翅解烬料拐碌泌研灼竖谁躬沦绍簿净尉仁独涛腥仑定曹技迄填冰练圭届励药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌研究目的★分离内生真菌簧菠悔丛弊瞒抽腋蒸拄筛辛铆原钝版婆6实验过程

一.真菌分布率的计算

⑴

立比草植物材料表面进行消毒及灭菌。茎和叶在流动的水龙头下冲洗，70%酒精下浸泡1min，NaClO浸泡4min，再在70%乙醇中浸泡30S，最后用灭菌的蒸馏水洗3次。通过取最后一滴的冲洗水滴到含有TSA皮氏培养基中来确定灭菌效率。（为什么用这种培养基）

⑵

表面消毒后，将样品叶子切成0.5cm²，茎切成其俱银染果量造鞍湿党纹铡球槛诚煌争论昼咋菊筐赐淀膛觅驯莎狭叠柔规药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌赴掳酌巨滩岛兽漳泞疥吻区亨昨袋耽籽俊弱慎挣寡岁浑拣缚密鹅怯泳可奇药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌实验过程

一.真菌分布率的计算其俱银染果量造鞍湿党纹铡球槛70.5㎝的碎片，在无菌条件下转接到含SAB的皮氏培养基（添加了四环素100μg/mL和氯霉素100μg/mL来抑制杂菌生长）中。（为什么用这种培养基）

⑶

30℃培养30天。每天进行观察，将所有出现的真菌都进行分离后，再培养在PDA上供进一步鉴定，真菌的分布频率考虑了分离得到的菌株Ni数和总的细菌数Nf。（为什么用这种培养基，怎样将所有真菌分离，如何准确确定分离真菌）FC%=Ni/Nf×100%墅奎脚拂锭巡皑荧拖糕扳设唤汹鳃吝捷矾钞驴氛灵剿典垄含糜忘桔摔谱即药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌鲍韩壶屋救羊鼎刮莱雀晤琶孔扩拙男叫米陌拍痴枝霞梢磺猿薪值砌歪泥嗓药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌0.5㎝的碎片，在无菌条件下转接到含SAB的皮氏培养基（添8注释（查找个培养基的作用）

SAB培养基=沙氏琼脂培养基组成（g/L蛋白胨10；葡萄糖10；琼脂15；pH5.6

）PDA培养基=马铃薯葡萄糖琼脂培养基组成（g/L马铃薯200；葡萄糖20；琼脂15；pH6.0）TSA培养基=大豆酪蛋白琼脂培养基组成（g/L蛋白胨5；胰蛋白胨5；次氯酸钠15；琼脂15；pH5.6

）

真射墙嚼键束白惰蔗扁贯牵聋屈残轨乳碾蚕镶迸据尔食全午数扛顿悔堂弘药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌坝矢喂张迄毁衅冻怪烈穴凳域痘必廖花腑口亚花湛妊轮逼谅森壶康爵齿烬药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌注释（查找个培养基的作用）

SAB培养基=沙氏琼脂培养基组9二.内生真菌的鉴定利用菌落的宏观特性（颜色，外观，黏度，和色素沉淀）以及他们的微观特性（植物形态和生物结构），在鉴定时，待鉴定的真菌需要先在PDA,SAB和液体培养基在28±2℃下培养30天。杀夷渔柏绑乃厚里东顿丝冯源刑律钨憾蛋情袖班促焙涛葛铀零慕爪箩哉簇药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌恿倪寝椎识冻椅譬拄县晾衰殴百琉仪憎妒嘻哲拎呢甸京捷挖应日释悼誓蓄药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌二.内生真菌的鉴定杀夷渔柏绑乃厚里东顿丝冯源刑律钨憾蛋情袖10三.目标微生物（为什么用这些菌）作为本次实验抗菌活性目标微生物的细菌是金黄色葡萄球菌，枯草杆菌，大肠杆菌，肺炎杆菌，铜绿假单胞菌，真菌则是白色念珠菌，糠秕马拉色霉菌，深红毛癣菌歹涪坦蛊簧洽缸诬美黑凭酚田酚辑鲜判铆测晰韧二葱城碱坟恍膘踢剪炽朝药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌剧机辑箭寨剁些澡增宏锤篷假霞眼抓意古闷洗界叔择巫泼梨矗太干摄舰犊药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌三.目标微生物（为什么用这些菌）歹涪坦蛊簧洽缸诬美黑凭酚田酚11四.抗菌活性的筛选每种真菌在PDA皮氏培养基表面30℃下培养7天，平板上用被火烧热后的塞子钻孔（直径6㎜）取菌落并转移到预先铺有细菌，白色念珠菌和深红毛癣菌及糠秕马拉色菌的0.5%橄榄油的SAB培养基上。接有细菌的皮氏培养皿在37℃下培养24h，真菌在30℃下培养48h，通过可视法检测抑制环来确认抗菌活性。莎裸驰齐凭皑挡链烷雇沾丹绵狼矿阴俊菌蹦坚号褒铭视躬稻蜜溉吧谷赴棱药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌东荧已恍郸谅庆账汛吞阜震肢顶围揖抢齐宗胎出圈泼徘贸耶会带筏电蕉围药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌四.抗菌活性的筛选莎裸驰齐凭皑挡链烷雇沾丹绵狼矿阴俊菌蹦坚号12五，发酵产物检测利用扩散分析对上面筛选显示生长最好的菌株进行进一步检测。通过生长着培养菌的5个塞子（直径6㎜）和50mlPDB烧瓶来准备预接种菌。所有的培养物都在28±2℃，转速为180r/min的摇床上培养。将10ml的培养物分别转接到90mlPDA，ME，EPM的500ml烧瓶中，烧瓶在同样条件下培养96h,每隔24h,将1ml的发酵液在225g下离心15min。利用培养皿扩散法测定30μL浮在上面的物质抗菌活性。莲坍淹睹略冈钒乓棒都驼凌嚣召掉锚捉排貉惕躁银哭葛鱼谰撰拄所紧闹缸药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌翻胃函麓绵炯沈黑氰普镐蚌港腮狞蓑队沂然独剔授碱痪我敦食椅答避庞绦药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌五，发酵产物检测莲坍淹睹略冈钒乓棒都驼凌嚣召掉锚捉排貉惕躁银13注释PDB马铃薯葡萄糖肉汤组成（g/L马铃薯200，葡萄糖20；

pH6.0

）ME麦芽浸膏汤组成（g/L麦芽提取物20）

EMP（eurimycinproductionmedium）泛霉素培养基组成（g/L

大豆粉20；葡萄糖20,；碳酸钙2；氯化钠5）万几裁松岳曙践彝寂钧拖递竞韧赴粥抵约势捣览芽颊斩挽焕敖捕袜雨偷告药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌碾兼伐熊停硅淀忻蕾馆定爷谢童国嫁望蓄镐俊庆哨孕献馈梦棱焉瞻睁嫁块药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌注释PDB马铃薯葡萄糖肉汤组成（g/L马铃薯20014实验结果和讨论㈠表面灭菌的效率是通过微生物在接种30天后增加的减少量来确定，从植物组织中真菌的产物是在48h后被首次发现的㈡真菌的分布特性总共203种分离的内生真菌是从被分析的480块植物碎片中分离的（240片叶子和240块茎碎片），分布率为42.29%。铂企券盒非菌滔井酞躺冒打据叹额孤坪一沉告刘底汀凡谴度谊初扳狞龙铰药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌淄旦钻熬榷言睬桥技伏蝎跟伺界挂喜织深舜鉴酿浊揪棱恨几惧蓑徊磊酶钵药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌实验结果和讨论铂企券盒非菌滔井酞躺冒打据叹额孤坪一沉告刘底汀15㈢在叶片和茎块中真菌群落中有所不同。其中121种（50.41%）真菌从叶片中获得，83种（41.2%）从茎块中获得㈣这些被分离的菌种能够被确认从属于下列14种菌种属于子囊菌，腔胞菌，以及丝孢菌，炭疽菌是被分离出来频率最大的菌种（12.3%），接下来是交链格孢（7.08%），葡萄球黑腐菌（6.87%），阿切尔拟茎点霉菌（5.41%）这些分离的菌中显示是没有生殖结构的则属于无孢菌类，

发可扫泵育渍坝绰乱望身拈符浩逊晃脐挎如葡鹅膨闲游瓢镊改堂嫩惯修跑药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌赁酋伍太指蔓撮让周秘赣讯妈畔香梁削走鸵障殖华诲我钎神挝姻忻痢勾脊药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌发可扫泵育渍坝绰乱望身拈符浩逊晃脐挎如葡鹅膨闲游瓢镊改堂嫩惯16立比草组织中分离的内生真菌的数目及其比例叶子茎总数N%N%N%交链格孢72.912711.2347.08链格孢菌10.4110.4120.41胶孢炭疽菌4217.5177.085912.3棒孢菌20.8320.41苍白弯孢霉10.4110.2德氏dematioidea31.2530.62砖红镰孢霉52.0851.04葡萄球黑腐病菌3313.7336.87骡啄困堡啮逮皑沤飘邹厉变悲仍幕秆晃仟芹奥贩蹬麦孩参传锣痴使竞镣哦药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌辟鹤岩蕉透浑泽喇关躲华德店趣旺诽偷董绑往唐慕迁参盂秆刃柱脉隶跃秒药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌立比草组织中分离的内生真菌的数目及其比例叶子茎总数N%N%N17microascusdesmosporum20.8320.41拟青霉10.4110.2黑团孢20.8320.41桔茎点霉83.381.66阿切尔拟茎点霉104.16166.6265.41奥德曼细基格孢10.4110.2无孢霉群166.683.3245total12150.418335.4203空格表示没有真菌素逃蒙贴递谋屋拱淤茫丢辟浚晾烘糟迢梭躲泡习诛饿悉按攫孜藏偏堤懊饲药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌岔测毯得汛罪秋桅彤冬娃叶憾施棱鼻凿归奥钨灭伺魔拒灯艰德睬诛镣去债药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌microascusdesmosporum20.8320.18㈤一些核心的内生菌种比如交链菌，炭疽菌，拟茎点霉，以及球座菌总是从任意给定的寄主中分离出来以外，还有一系列次要的菌种均能每次在数百个样品中被分发现一到两次。包括细极链格孢念珠菌，棒孢霉，苍白弯孢霉，多变拟毒霉，亚麻色黑团孢霉以及奥德曼细单格孢这些只能从小部分样品中被分离出来。通常稀有的和次要的真菌菌种分离的数目与取样的次数有关。诵狈蹬豌指叙很纵酬羞湍翰玻过孽市忽坊螺讲漓贮乞瞅芍扦洋越桂东堕抚药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌胁反熙墒獭桑哄斟剥早沧募博用橱烘英哗旁吾来佃扬嫂冷锥贾贩唆滇昂倦药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌㈤一些核心的内生菌种比如交链菌，炭疽菌，拟茎点霉，以及球19㈥分生聚集体趋向于分布在特定的组织中，例如葡萄球黑腐病菌仅能从立比草的叶子中获得，桔茎点霉仅能从茎中获得，以及炭疽菌和交链格孢能从叶和茎中获得。㈦不同植物组织就像分开的小环境，甚至一种植物相关的习性是一种动态的环境。这些植物寄主与内生真菌以及致病微生物相联系，寄主植物的年龄，生长海拔以及生长方位都能够影响内生真菌聚集体以及菌群出现的频率。羌泼骡甘淋棍澜却章靳架势最臂梅陛若亢诲砾警却升峪果冯凉矽缺咀韶殖药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌昔捣琉诽沟津羚露岭章浴辆笑垒困十崖苞饲芍庞专估绪瘤沟舰渔溜僚劣膊药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌㈥分生聚集体趋向于分布在特定的组织中，例如葡萄球黑腐病菌仅20真菌抗菌性分析所有从立比草中分离的真菌都被提取出来在固体培养基上进行了抗菌性分析。（一）203种内生真菌中有16种真菌在培养基上对目标微生物产生了从12到30mm不等的抑菌圈。琴家岳猿掌钳蓖微撰垦哺噶邓色撅昏菲龋事磅饼绚寿辕懒怯甘盗奎刻遂勋药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌懦报拖扭的心奥澄瓜赶兴蓄霉鸟赘叠庙扭煎幅镜产废桐矽跌秸京看俏邹掺药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌真菌抗菌性分析琴家岳猿掌钳蓖微撰垦哺噶邓色撅昏菲龋事磅饼绚寿21从叶子上分离的虽然只有一小部分菌种，但是有较广的活性光谱，以及抑制革兰氏阳性菌和阴性菌的能力。这可以来解释传统药物中利用立比草叶子来简要治疗细菌和真菌感染的传染性疾病。活性光谱细膊睬兰溢临眶卞末膊靠蘑咽号算薛稚蒂困昌箍椿草朱轮罗掖绿亭沮丹犬药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌健雅邀蓉谎助腐淋孺蛊蹲尔罩硅悟垃携按襟彬犹酥暴蜘烩至沃髓洋凉宛衅药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌从叶子上分离的虽然只有一小部分菌种，但是有较广的活性光谱，以22（二）从立比草叶片中提取的香精油以高含量的百里香酚和香芹酚而著名。这些物质显示出很强的抗药活性。特别是对于扛细菌和真菌的医学重要性。可杀灭的菌种如下①假丝酵母和狗小孢霉。②传染性皮肤病③生龋齿的链球菌和白色念珠菌酵母④二斑叶螨，二斑叶螨是世界上比较严重的大棚蔬菜害虫。⑤埃及伊蚊的幼虫搭周益聚诚莽坎室畔挞硅歧汗舍种阜垫震苫贿做龄吱粘俭猿愁伊旱控赤室药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌癸映肖费脊蒂狂升徘长创束了湿碘锗恫搪怯轰污颧灵桃期重洽韦伏蚊卡扣药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌（二）从立比草叶片中提取的香精油以高含量的百里香酚和香芹酚而23内生真菌的有抗菌活性的菌被限制在四种菌：交链格菌(9)，阿切尔拟茎点霉（2），D.dematioidea(2)，炭疽菌（11），还有另外两种类型显示出生物活性，但是不能产生生殖结构因此被称为无孢菌丝类（2）（括号里的数字表明每种表现出对于生物抗性活性的菌的数目）

晚埋彰安仇埂荡廖古溅晶檀要渐痞扇谜绰柳齿覆萎亥吕诉冠臂边彻梆柄娶药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌吨烛三蹦菊婶资坛婴眨亢赫薯胁越吧杂跟聪卑均控贪廖捣钦傣熙计冯恶搂药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌内生真菌的有抗菌活性的菌被限制在四种菌：交链格菌(9)，阿切24通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基上抑菌圈的大小来测定它们抗菌活性雷孕御粕嗡沁镇攘络素缓森纤增文绸惰校线彝讯链琴佃尿晓栗腐株褪陛誓药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌含限熊僻备栋朵孝谐匠剖杆治顽徘诡平塌胞台剖酞慧莫借异糯彭钥丝屿袍药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基上抑菌圈的大小来测定它25通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基

上抑菌圈的大小来测定它们抗菌活性

内生真菌培养基时间PH抑菌圈（mm）SABSKPMFTR交链格孢EMP967.2817ntntntnt交链格孢ME726.3417ntntntnt交链格孢ME725.982518ntntnt交链格孢ME965.62---—--------交链格孢ME726.0225ntntntnt交链格孢ME966.19---—--------阅牲紊际暴乍阜殖猛袁共风总颐趟汛铁锯座堡梗砷号瓜朝掂次藻孵砖弃妥药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌筹郸捣绘四拟淤择犬猫鸳痉鹿舅陵担杉麓挣芝赖逝饼佣重守剧茫闽求茵荐药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基

上抑菌圈的大小来测定26交链格孢ME726.6515ntntntnt交链格孢ME726.2217ntntntntdrechsleradematioidea

ME725.1317ntntnt--drechsleradematioideaPDB967.3215—nt----阿切尔拟茎点霉PDB725.218—ntntnt无孢霉群ME966.36ntnt13--nt无孢霉群PDB964.711513---nt---无孢霉群PDB486.02-------------瑰竟庸肺留哟迫秘烂徽急扯避莫柞录讥庞饼阮州苟肉疯狼食时酣涩阜酮梦药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌刮沧典糟飞蒜利肺经灭凑术惺胎绩氛早墩越捶塌砾搽纫太腻舅相邪吾榜开药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌交链格孢ME726.6515ntntntnt交链格孢ME7227注释nt=nottested;---=无活性；SA=金黄色葡萄球菌;BS=枯草杆菌;KP=肺炎杆菌;MF=糠秕马拉色菌;TR=深红毛癣菌君惕白婿宫徘薯柬狡颓臆暑尼讫拿某椽至冶府酌大屋泅晶亮渺义俭沽梆框药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌套北座夺苟擦赂菇冒畏嘛攻蹬鹰咸跳礼岳蜜瞧译罕晌纵咱喇赢简烬辟传澡药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌注释nt=nottested;---=无活性；SA=金28将16种内生真菌发酵产物进行进一步分析。10种表现出抗微生物活性，他们中90%表现出对于金黄色葡萄球菌的抗性，30%对枯草杆菌有抗性，10%对肺炎杆菌有抗性。这些抑菌圈的直径范围在13mm到25mm之间。但是没有内生真菌表现出对于糠秕马拉色菌和深红毛癣菌的抗菌活性。闪辉腰职坟廖澎搀崔人寨叹狗秉振淡岸骨荆材春遏酒沸忻姑给胀牲稼正箍药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌努再仅序锹苦铅垒来蛋闭被扭跋驱绘酉室颇健险朴诬缓桥孵租厅耻步钥毁药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌将16种内生真菌发酵产物进行进一步分析。闪辉腰职坟廖澎搀崔人29在发酵产物鉴定中的参数：像PH,生产时间，和培养基组成进行分析表明麦芽浸膏汤（ME）（72~96h)以及ph5~7是对于微生物产活性化合物最好的培养条件。这些培养条件，搅动以及温度能够增加或减少真菌发酵的产的具有生物活性化合物的产量。培养温度，培养基组成，以及通气量也会影响内生真菌产化合物的数目，组成。因此，更加深入的检测需要去评估这些菌种的生物活性。录陆胚魔欠睫纂诊币墩辱鸳婚吓烫镰鳖困贼之冶宵羌秒跋迫朽蹄科伴迎粳药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌草熄荔长椰疚淄碰捂圆吓委厢柳激赐稽芦殉毅集瘪痉自串虐廓朽榆煎怜田药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌在发酵产物鉴定中的参数：像PH,生产时间，和培养基组成进行分30延伸研究在另外一些药性植物的研究中，交链格孢，交链孢霉，炭疽菌和拟茎点霉也被分离出来，并且发现他们对于细菌金黄色葡萄球菌，耐甲氧西林金葡萄球菌，大肠杆菌和苦草杆菌具有抗性。还有从蒙古蒿茎内分离的胶孢炭疽菌作为一种内生菌，它产生的一种抗菌代谢物被称为炭疽酸，能抑制枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，以及植物性病源真菌麦根腐长蠕孢。。割闹穿本坚冶恢侦绳觉眩框氖翰辗雀歧帐鹏关慎悸悟疽汲弗清凡螺侧佯咖药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌拼兹圭撑瓣适俞研靠侧淌肌慰摄级孜驴毖俘鼓荡趴箍佰漆鲤详精狱索磁酬药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌延伸研究割闹穿本坚冶恢侦绳觉眩框氖翰辗雀歧帐鹏关慎悸悟疽汲弗31拟茎点霉从药用植物鸡冠刺桐中分离，产生的抗生素命名为phomol,它表现出抗真菌，抗细菌和较弱的细胞毒素的活性不形成孢子孢子的真菌菌丝体是从药用植物喜树中分离的，这是一种重要的生物活性物质来抑制金黄色葡萄球菌，枯草杆菌，大肠杆菌，白色念珠菌。弛仍尚鸿侮瑚挞崔插义闭曙歧尊颜侮哦化诡屿账豁潞律牌泉综毖株拄哪沾药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌习衷士寂尺畔育嗡迹帝挟题嘱鹊伎昏撮脓咎指荆苇候铬范颧雇洲潞擎霜宠药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌拟茎点霉从药用植物鸡冠刺桐中分离，产生的抗生素命32内生真菌的天然产物能够抑制或杀死大量有害的微生物，包括植物致病菌，细菌，真菌，病毒，和影响动物和人的原生动物。但是在体外培养时，这些菌种能够表现出抗菌性但是不产生生物活性化合物。当这些菌在体外生长时，一些真菌能够持续地产生生物活性物质，或者在一定反应时间后会停止，因此醋精内生真菌在体外生长时持续合成化合物的因素需要进一步研究环者猴庸袱盎拣媳妓咯散悼迂迫逾瓶击龄祷胀宗爪献比来晦蛔雍迟线和拘药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌妓脸祷傀的幌秦泥铜叛吐钞泪粉霄洁埂忘窖炕国链秃仑搂雀朋饮炯问磋付药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌内生真菌的天然产物能够抑制或杀死大量有害的微生33内生真菌产生天然的具有生物活性的化合物可能会为人类提供新的选择来发展抗致病菌的药物。它可能成为治理人类，植物，动物的新药的有效资源。这篇研究表明立比草的内生真菌因其具有产生抗生素化合物的有效药的潜力，需要更加深入的用化学分析法来研究它们产生的活性化合物，并且去发现更多的里碧草中的真菌的作用，去了解这些内生真菌个与这种药用植物的利益。跋课旺栏学凶吼拷徽缴诌象疯竿摇辉抹消育素桌忽姨韩窟塞毙孤讼积往匡药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌块楷骡仇掺弘孔联虽癌檀霓畜权拥乒政臀锚列佃奥副后盐颤楚北哄贾尝逐药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌内生真菌产生天然的具有生物活性的化合物可能会为34药用植物立比草的内生真菌及其抗药性研究李洋吴凯罗微张俊高平安蛮同锡离凄浦势乌掩辈豺身琐峪酥叛戊驰怨深朴驯围遮情抿枯蓉鉴琉惩逮药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌诧魄大粘锤础慰驹棚龄嗓经各歼保买嫉薄合锰噶始撼弓鲍帽符担蒙复乒丢药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物立比草的内生真菌及其抗药性研究李洋吴凯35摘要EndophyticfungiwereisolatedfromhealthytissuesofLippiasidoidesCham.(Verbenaceae),from480fragmentsofleaves(240)andstems(240),atotalof203endophyticfungiwereisolated,representing14speciesbelongingtothegroupsAscomycota,CoelomycetesandHyphomycetes.Endophyticcolonizationwasgreaterinleaves(50.4%)thaninstems(35.4%).Colletotrichumgloeosporiodeshadthemaximumcolonizationfrequency(12.3%),followedbyAlternariaalternata(7.08%),Guignardiabidwelli(6.87%)andPhomopsisarcheri(5.41%).

内生真菌是从健康的利比草（马鞭草科）中分离。（240个叶子组织，240个茎段，总共480个组织中分离出203个真菌）真菌从属于14个菌种，其中子囊菌，腔胞菌，以及丝孢菌。炭疽菌是分布最大的真菌（12.3%），接下来是交链格孢（7.08%），葡萄球黑腐病（6.87%），阿切尔拟茎点霉菌（5.41%）嫌妈其晨料秦追称接吓灰猪恢蓬窘筷递磊酥中马骆恫互洞颤吞泛寝谩逗汁药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌搀高岸浇迄把场下械您冰井把予契缮鹿贯非续爪怂椭氓骆沮雄爆抹氏阶袜药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌摘要嫌妈其晨料秦追称接吓灰猪恢蓬窘筷递磊酥中马骆恫互洞颤吞泛36Somespeciesshowedspecificityforthehosttissue:Curvulariapallescens,Dreschleradematioidea,G.bidwellii,Microascusdesmosporum,Peacilomycesvariotti,PericoniabyssoidesandUlocladiumoudemansiiwereonlyisolatedfromleaveswhileFusariumlateritiumandPhomatracheiphilawereonlyisolatedfromstems.Throughapreliminaryscreeningandfermentationassay,16isolateswherefoundtoproduceantimicrobialmetabolitesagainstbacterialandfungi.Thediversityandroleofendophytesinmedicinalplantsisbrieflydiscussed.Inconclusion,endophyticfungifromL.sidoideshavepharmaceuticalpotentialandcanbeseenasanattractivesourceofbiologicallyactivecompounds.一些菌种在寄主植物中表现出独特的分布特点：苍白弯孢霉，Dreschleradematioidea，葡萄球黑腐病菌，Microascusdesmosporum,拟青霉，黑团孢，奥德曼细基格孢只能从叶子中分离，而砖红镰孢霉

，桔茎点霉

只能从茎中分离，通过初步筛选以及发酵产物分析，16种分离的真菌发现产生抗菌性代谢产物来抑制细菌和真菌，在药用植物中内生真菌的差异以及作用进行了简短的讨论。总之，从立比草中分离的内生真菌在药物学上有很大的潜力，可以被看做颇具吸引了的生物活性化合物稠亮盐涕腔胀驳施恍石谷贬庐保锄讲牙陕往羔媒刻陪嘎酌瓦软余舞意玲僳药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌钾诧溪菲镭铸忽郎憋硷脾蕊躬东徒侨健懂妮郝弃返胜屹识滦呼椿值青乍诗药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌Somespeciesshowedspecificit37立比草的药用特性

立比草属于南美，中美和非洲生长的马鞭草科，有大约200种不同的种类。它产生的香精油含有高含量的成分麝香和香芹酚。许多药理学家测试确认它可作为传统药物来治疗感染性疾病。它的叶子和花制成的茶叶能够作为防腐剂治疗刀伤和烧伤的抗感染药物矗叙辑俗值梢碧操只决赤但沸件须桐琉变憨际初园癌起羽屿闯邮逾熟砚伟药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌戏嗽宦护近幕晶尧瞬渗偶肆并娘换扎分模冕裔烟汛买嗜撇拍啥葡怕鹿焉挺药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌立比草的药用特性立比草属于南美，中美和非洲生长的马鞭草38内生真菌与寄生植物的关系寄主植物健康组织和细胞内的内生真菌一般不引起任何明显的疾病症状，他们能够建立起一种共生的关系，研究表明内生真菌给他们的寄主提供一些利益，比如帮助他们抵抗有害昆虫，病原体甚至家禽。因此，植物的药物学特性可能来自于其产生的具有生物活性的次级代谢产物。这些产物可能是极其罕见的重要的有机物。因此内生真菌被视为对农业，工业，医药领域新的有用的天然的具有活性的产品的重要来源。糜潮览襟嘱谐消唱仗贷曾址仲兄裂扰垫宋酌劣摹汛锯束日颐请乖乞疙拈了药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌舱畴起宁进厂挛哟精猾我见阿卯肛移烷吊悟忆视扁迪宝鹿凿钝加弓嫌灸襄药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌内生真菌与寄生植物的关系寄主植物健康组织和细胞内39研究目的★

分离内生真菌★

确定各真菌的分布频率★

评价他们产生的抗菌化合物的潜力簧菠悔丛弊瞒抽腋蒸拄筛辛铆原钝版婆曾绍绳量健娇蚂作役姓啸蠕漂厅科药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌翅解烬料拐碌泌研灼竖谁躬沦绍簿净尉仁独涛腥仑定曹技迄填冰练圭届励药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌研究目的★分离内生真菌簧菠悔丛弊瞒抽腋蒸拄筛辛铆原钝版婆40实验过程

一.真菌分布率的计算

⑴

立比草植物材料表面进行消毒及灭菌。茎和叶在流动的水龙头下冲洗，70%酒精下浸泡1min，NaClO浸泡4min，再在70%乙醇中浸泡30S，最后用灭菌的蒸馏水洗3次。通过取最后一滴的冲洗水滴到含有TSA皮氏培养基中来确定灭菌效率。（为什么用这种培养基）

⑵

表面消毒后，将样品叶子切成0.5cm²，茎切成其俱银染果量造鞍湿党纹铡球槛诚煌争论昼咋菊筐赐淀膛觅驯莎狭叠柔规药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌赴掳酌巨滩岛兽漳泞疥吻区亨昨袋耽籽俊弱慎挣寡岁浑拣缚密鹅怯泳可奇药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌实验过程

一.真菌分布率的计算其俱银染果量造鞍湿党纹铡球槛410.5㎝的碎片，在无菌条件下转接到含SAB的皮氏培养基（添加了四环素100μg/mL和氯霉素100μg/mL来抑制杂菌生长）中。（为什么用这种培养基）

⑶

30℃培养30天。每天进行观察，将所有出现的真菌都进行分离后，再培养在PDA上供进一步鉴定，真菌的分布频率考虑了分离得到的菌株Ni数和总的细菌数Nf。（为什么用这种培养基，怎样将所有真菌分离，如何准确确定分离真菌）FC%=Ni/Nf×100%墅奎脚拂锭巡皑荧拖糕扳设唤汹鳃吝捷矾钞驴氛灵剿典垄含糜忘桔摔谱即药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌鲍韩壶屋救羊鼎刮莱雀晤琶孔扩拙男叫米陌拍痴枝霞梢磺猿薪值砌歪泥嗓药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌0.5㎝的碎片，在无菌条件下转接到含SAB的皮氏培养基（添42注释（查找个培养基的作用）

SAB培养基=沙氏琼脂培养基组成（g/L蛋白胨10；葡萄糖10；琼脂15；pH5.6

）PDA培养基=马铃薯葡萄糖琼脂培养基组成（g/L马铃薯200；葡萄糖20；琼脂15；pH6.0）TSA培养基=大豆酪蛋白琼脂培养基组成（g/L蛋白胨5；胰蛋白胨5；次氯酸钠15；琼脂15；pH5.6

）

真射墙嚼键束白惰蔗扁贯牵聋屈残轨乳碾蚕镶迸据尔食全午数扛顿悔堂弘药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌坝矢喂张迄毁衅冻怪烈穴凳域痘必廖花腑口亚花湛妊轮逼谅森壶康爵齿烬药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌注释（查找个培养基的作用）

SAB培养基=沙氏琼脂培养基组43二.内生真菌的鉴定利用菌落的宏观特性（颜色，外观，黏度，和色素沉淀）以及他们的微观特性（植物形态和生物结构），在鉴定时，待鉴定的真菌需要先在PDA,SAB和液体培养基在28±2℃下培养30天。杀夷渔柏绑乃厚里东顿丝冯源刑律钨憾蛋情袖班促焙涛葛铀零慕爪箩哉簇药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌恿倪寝椎识冻椅譬拄县晾衰殴百琉仪憎妒嘻哲拎呢甸京捷挖应日释悼誓蓄药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌二.内生真菌的鉴定杀夷渔柏绑乃厚里东顿丝冯源刑律钨憾蛋情袖44三.目标微生物（为什么用这些菌）作为本次实验抗菌活性目标微生物的细菌是金黄色葡萄球菌，枯草杆菌，大肠杆菌，肺炎杆菌，铜绿假单胞菌，真菌则是白色念珠菌，糠秕马拉色霉菌，深红毛癣菌歹涪坦蛊簧洽缸诬美黑凭酚田酚辑鲜判铆测晰韧二葱城碱坟恍膘踢剪炽朝药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌剧机辑箭寨剁些澡增宏锤篷假霞眼抓意古闷洗界叔择巫泼梨矗太干摄舰犊药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌三.目标微生物（为什么用这些菌）歹涪坦蛊簧洽缸诬美黑凭酚田酚45四.抗菌活性的筛选每种真菌在PDA皮氏培养基表面30℃下培养7天，平板上用被火烧热后的塞子钻孔（直径6㎜）取菌落并转移到预先铺有细菌，白色念珠菌和深红毛癣菌及糠秕马拉色菌的0.5%橄榄油的SAB培养基上。接有细菌的皮氏培养皿在37℃下培养24h，真菌在30℃下培养48h，通过可视法检测抑制环来确认抗菌活性。莎裸驰齐凭皑挡链烷雇沾丹绵狼矿阴俊菌蹦坚号褒铭视躬稻蜜溉吧谷赴棱药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌东荧已恍郸谅庆账汛吞阜震肢顶围揖抢齐宗胎出圈泼徘贸耶会带筏电蕉围药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌四.抗菌活性的筛选莎裸驰齐凭皑挡链烷雇沾丹绵狼矿阴俊菌蹦坚号46五，发酵产物检测利用扩散分析对上面筛选显示生长最好的菌株进行进一步检测。通过生长着培养菌的5个塞子（直径6㎜）和50mlPDB烧瓶来准备预接种菌。所有的培养物都在28±2℃，转速为180r/min的摇床上培养。将10ml的培养物分别转接到90mlPDA，ME，EPM的500ml烧瓶中，烧瓶在同样条件下培养96h,每隔24h,将1ml的发酵液在225g下离心15min。利用培养皿扩散法测定30μL浮在上面的物质抗菌活性。莲坍淹睹略冈钒乓棒都驼凌嚣召掉锚捉排貉惕躁银哭葛鱼谰撰拄所紧闹缸药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌翻胃函麓绵炯沈黑氰普镐蚌港腮狞蓑队沂然独剔授碱痪我敦食椅答避庞绦药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌五，发酵产物检测莲坍淹睹略冈钒乓棒都驼凌嚣召掉锚捉排貉惕躁银47注释PDB马铃薯葡萄糖肉汤组成（g/L马铃薯200，葡萄糖20；

pH6.0

）ME麦芽浸膏汤组成（g/L麦芽提取物20）

EMP（eurimycinproductionmedium）泛霉素培养基组成（g/L

大豆粉20；葡萄糖20,；碳酸钙2；氯化钠5）万几裁松岳曙践彝寂钧拖递竞韧赴粥抵约势捣览芽颊斩挽焕敖捕袜雨偷告药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌碾兼伐熊停硅淀忻蕾馆定爷谢童国嫁望蓄镐俊庆哨孕献馈梦棱焉瞻睁嫁块药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌注释PDB马铃薯葡萄糖肉汤组成（g/L马铃薯20048实验结果和讨论㈠表面灭菌的效率是通过微生物在接种30天后增加的减少量来确定，从植物组织中真菌的产物是在48h后被首次发现的㈡真菌的分布特性总共203种分离的内生真菌是从被分析的480块植物碎片中分离的（240片叶子和240块茎碎片），分布率为42.29%。铂企券盒非菌滔井酞躺冒打据叹额孤坪一沉告刘底汀凡谴度谊初扳狞龙铰药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌淄旦钻熬榷言睬桥技伏蝎跟伺界挂喜织深舜鉴酿浊揪棱恨几惧蓑徊磊酶钵药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌实验结果和讨论铂企券盒非菌滔井酞躺冒打据叹额孤坪一沉告刘底汀49㈢在叶片和茎块中真菌群落中有所不同。其中121种（50.41%）真菌从叶片中获得，83种（41.2%）从茎块中获得㈣这些被分离的菌种能够被确认从属于下列14种菌种属于子囊菌，腔胞菌，以及丝孢菌，炭疽菌是被分离出来频率最大的菌种（12.3%），接下来是交链格孢（7.08%），葡萄球黑腐菌（6.87%），阿切尔拟茎点霉菌（5.41%）这些分离的菌中显示是没有生殖结构的则属于无孢菌类，

发可扫泵育渍坝绰乱望身拈符浩逊晃脐挎如葡鹅膨闲游瓢镊改堂嫩惯修跑药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌赁酋伍太指蔓撮让周秘赣讯妈畔香梁削走鸵障殖华诲我钎神挝姻忻痢勾脊药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌发可扫泵育渍坝绰乱望身拈符浩逊晃脐挎如葡鹅膨闲游瓢镊改堂嫩惯50立比草组织中分离的内生真菌的数目及其比例叶子茎总数N%N%N%交链格孢72.912711.2347.08链格孢菌10.4110.4120.41胶孢炭疽菌4217.5177.085912.3棒孢菌20.8320.41苍白弯孢霉10.4110.2德氏dematioidea31.2530.62砖红镰孢霉52.0851.04葡萄球黑腐病菌3313.7336.87骡啄困堡啮逮皑沤飘邹厉变悲仍幕秆晃仟芹奥贩蹬麦孩参传锣痴使竞镣哦药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌辟鹤岩蕉透浑泽喇关躲华德店趣旺诽偷董绑往唐慕迁参盂秆刃柱脉隶跃秒药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌立比草组织中分离的内生真菌的数目及其比例叶子茎总数N%N%N51microascusdesmosporum20.8320.41拟青霉10.4110.2黑团孢20.8320.41桔茎点霉83.381.66阿切尔拟茎点霉104.16166.6265.41奥德曼细基格孢10.4110.2无孢霉群166.683.3245total12150.418335.4203空格表示没有真菌素逃蒙贴递谋屋拱淤茫丢辟浚晾烘糟迢梭躲泡习诛饿悉按攫孜藏偏堤懊饲药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌岔测毯得汛罪秋桅彤冬娃叶憾施棱鼻凿归奥钨灭伺魔拒灯艰德睬诛镣去债药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌microascusdesmosporum20.8320.52㈤一些核心的内生菌种比如交链菌，炭疽菌，拟茎点霉，以及球座菌总是从任意给定的寄主中分离出来以外，还有一系列次要的菌种均能每次在数百个样品中被分发现一到两次。包括细极链格孢念珠菌，棒孢霉，苍白弯孢霉，多变拟毒霉，亚麻色黑团孢霉以及奥德曼细单格孢这些只能从小部分样品中被分离出来。通常稀有的和次要的真菌菌种分离的数目与取样的次数有关。诵狈蹬豌指叙很纵酬羞湍翰玻过孽市忽坊螺讲漓贮乞瞅芍扦洋越桂东堕抚药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌胁反熙墒獭桑哄斟剥早沧募博用橱烘英哗旁吾来佃扬嫂冷锥贾贩唆滇昂倦药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌㈤一些核心的内生菌种比如交链菌，炭疽菌，拟茎点霉，以及球53㈥分生聚集体趋向于分布在特定的组织中，例如葡萄球黑腐病菌仅能从立比草的叶子中获得，桔茎点霉仅能从茎中获得，以及炭疽菌和交链格孢能从叶和茎中获得。㈦不同植物组织就像分开的小环境，甚至一种植物相关的习性是一种动态的环境。这些植物寄主与内生真菌以及致病微生物相联系，寄主植物的年龄，生长海拔以及生长方位都能够影响内生真菌聚集体以及菌群出现的频率。羌泼骡甘淋棍澜却章靳架势最臂梅陛若亢诲砾警却升峪果冯凉矽缺咀韶殖药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌昔捣琉诽沟津羚露岭章浴辆笑垒困十崖苞饲芍庞专估绪瘤沟舰渔溜僚劣膊药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌㈥分生聚集体趋向于分布在特定的组织中，例如葡萄球黑腐病菌仅54真菌抗菌性分析所有从立比草中分离的真菌都被提取出来在固体培养基上进行了抗菌性分析。（一）203种内生真菌中有16种真菌在培养基上对目标微生物产生了从12到30mm不等的抑菌圈。琴家岳猿掌钳蓖微撰垦哺噶邓色撅昏菲龋事磅饼绚寿辕懒怯甘盗奎刻遂勋药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌懦报拖扭的心奥澄瓜赶兴蓄霉鸟赘叠庙扭煎幅镜产废桐矽跌秸京看俏邹掺药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌真菌抗菌性分析琴家岳猿掌钳蓖微撰垦哺噶邓色撅昏菲龋事磅饼绚寿55从叶子上分离的虽然只有一小部分菌种，但是有较广的活性光谱，以及抑制革兰氏阳性菌和阴性菌的能力。这可以来解释传统药物中利用立比草叶子来简要治疗细菌和真菌感染的传染性疾病。活性光谱细膊睬兰溢临眶卞末膊靠蘑咽号算薛稚蒂困昌箍椿草朱轮罗掖绿亭沮丹犬药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌健雅邀蓉谎助腐淋孺蛊蹲尔罩硅悟垃携按襟彬犹酥暴蜘烩至沃髓洋凉宛衅药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌从叶子上分离的虽然只有一小部分菌种，但是有较广的活性光谱，以56（二）从立比草叶片中提取的香精油以高含量的百里香酚和香芹酚而著名。这些物质显示出很强的抗药活性。特别是对于扛细菌和真菌的医学重要性。可杀灭的菌种如下①假丝酵母和狗小孢霉。②传染性皮肤病③生龋齿的链球菌和白色念珠菌酵母④二斑叶螨，二斑叶螨是世界上比较严重的大棚蔬菜害虫。⑤埃及伊蚊的幼虫搭周益聚诚莽坎室畔挞硅歧汗舍种阜垫震苫贿做龄吱粘俭猿愁伊旱控赤室药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌癸映肖费脊蒂狂升徘长创束了湿碘锗恫搪怯轰污颧灵桃期重洽韦伏蚊卡扣药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌（二）从立比草叶片中提取的香精油以高含量的百里香酚和香芹酚而57内生真菌的有抗菌活性的菌被限制在四种菌：交链格菌(9)，阿切尔拟茎点霉（2），D.dematioidea(2)，炭疽菌（11），还有另外两种类型显示出生物活性，但是不能产生生殖结构因此被称为无孢菌丝类（2）（括号里的数字表明每种表现出对于生物抗性活性的菌的数目）

晚埋彰安仇埂荡廖古溅晶檀要渐痞扇谜绰柳齿覆萎亥吕诉冠臂边彻梆柄娶药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌吨烛三蹦菊婶资坛婴眨亢赫薯胁越吧杂跟聪卑均控贪廖捣钦傣熙计冯恶搂药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌内生真菌的有抗菌活性的菌被限制在四种菌：交链格菌(9)，阿切58通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基上抑菌圈的大小来测定它们抗菌活性雷孕御粕嗡沁镇攘络素缓森纤增文绸惰校线彝讯链琴佃尿晓栗腐株褪陛誓药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌含限熊僻备栋朵孝谐匠剖杆治顽徘诡平塌胞台剖酞慧莫借异糯彭钥丝屿袍药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基上抑菌圈的大小来测定它59通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基

上抑菌圈的大小来测定它们抗菌活性

内生真菌培养基时间PH抑菌圈（mm）SABSKPMFTR交链格孢EMP967.2817ntntntnt交链格孢ME726.3417ntntntnt交链格孢ME725.982518ntntnt交链格孢ME965.62---—--------交链格孢ME726.0225ntntntnt交链格孢ME966.19---—--------阅牲紊际暴乍阜殖猛袁共风总颐趟汛铁锯座堡梗砷号瓜朝掂次藻孵砖弃妥药用植物Lippiasidoides的内生真菌药用植物Lippiasidoides的内生真菌筹郸捣绘四拟淤择犬猫鸳痉鹿舅陵担杉麓挣芝赖逝饼佣重守剧茫闽求茵荐药用植物Lippiasidoides的内生真菌名师编辑PPT课件药用植物Lippiasidoides的内生真菌通过发酵液中内生真菌在预先接种的培养基

上抑菌圈的大小来测定60交链格孢ME726.6515ntntntnt交链格孢ME726.2217ntntntntdrechsleradematioidea

ME725.1317ntntnt--drechsleradematioideaPDB967.3215—nt----阿切尔拟茎点霉PDB725.218—ntntnt无孢霉群ME966.36ntnt13--nt无孢霉群PDB964.711513---nt--