霍乱弧菌弯曲菌不发酵G杆菌

弧菌科一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌兼性厌氧，发酵葡萄糖，许多菌株生长需要2%~3%氯化钠大多数菌株氧化酶阳性具有一端单一鞭毛、运动迅速弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见。其中有一些种对人类致病。

第一页，共五十一页。霍乱弧菌一、临床意义是引起肠道烈性传染病——霍乱的病原体。有两个主要生物型：古典生物型、EL·Tor生物型。经消化道传染，通过霍乱肠毒素致病第二页，共五十一页。小肠上皮细胞膜上激活腺苷酸环化酶细胞内ATPCAMP（浓度升高）肠腺分泌大量液体和电介质腔内液体增多剧烈呕吐，腹泻，一“米泔样”水、电介质丢失休克、酸碱中毒霍乱肠毒素A1片段第三页，共五十一页。二、微生物学特性

形态与染色

革兰染色阴性弧形或逗点状周身菌毛，有荚膜，无芽胞单鞭毛，运动活泼直接染色镜检，可见排列如“鱼群”状；悬滴观察，可见穿梭运动第四页，共五十一页。第五页，共五十一页。培养兼性厌氧营养要求不高耐碱不耐酸喜pH8.0-9.0碱性环境pH8.4碱性蛋白胨水（选择培养基）

生化反应发酵甘露醇及蔗糖，缓慢发酵乳糖霍乱红反应阳性，不同生物型生化反应不同第六页，共五十一页。三、微生物检验标本采集米泔样排泄物涂片镜检观察“鱼群样”运动分离培养碱性蛋白胨水第七页，共五十一页。分解色氨酸还原硝酸盐靛基质亚硝酸盐亚硝酸靛基质加数滴浓硫酸红色反应鉴别：●

霍乱红反应第八页，共五十一页。0.5%去氧胆酸钠溶液霍乱弧菌混匀成浓悬液悬液由混变清，同时变粘稠用接种环挑取，有粘丝形成1分钟●粘丝试验第九页，共五十一页。0/129敏感试验:O1和非O1群敏感鸡红细胞凝集试验：古典生物型阳性，EL·Tor生物型阴性多粘菌素B敏感试验：古典生物型敏感，EL·Tor生物型不敏感第Ⅲ、Ⅴ组噬细菌体敏感试验：古典生物型可被第Ⅳ组裂解，EL·Tor生物型可被第Ⅴ组裂解抗生素敏感试验抗体检测第十页，共五十一页。第十一页，共五十一页。（一）临床意义具有嗜盐性（halophilic）存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝壳及盐渍加工的海产品中主要引起食物中毒和急性腹泻是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程2~3天，通常为自限性还可引起伤口感染和菌血症副溶血性弧菌

第十二页，共五十一页。（二）生物学特性1.形态革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，无芽胞2.抗原结构耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶血性弧菌的O抗原有13种鞭毛抗原，不耐热，无型特异性第十三页，共五十一页。（三）微生物检验第十四页，共五十一页。第十二章

弯曲菌及螺杆菌第十五页，共五十一页。第一节弯曲菌属弯曲菌属（Campylobacter）是一类呈逗点状或S形的革兰阴性菌，广泛分布于动物界其中有些可引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病原菌第十六页，共五十一页。生物学特性革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、S形、螺旋形或典型的海鸥展翅（gullwing）形。陈旧培养物可呈球形或长丝状。无芽胞。抗原成分有菌体(O)抗原、热不稳定抗原(HL系统)和鞭毛(H)抗原。最佳气体环境为含5%氧气、10%二氧化碳及85%氮气抵抗力不强，室温可迅速死亡。对热敏感，标本在4℃冰箱可保存3周。第十七页，共五十一页。微生物检验第十八页，共五十一页。第二节螺杆菌属螺杆菌属（Helicobacter）：细菌有20余种，有9个种可从人体分离到能引起人类疾病菌种幽门螺杆菌(H.pylori)、H.fennelliae和H.cinaedi。幽门螺杆菌与萎缩性胃炎，胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾病相关其他螺杆菌也可感染胃粘膜，但少见。本章主要叙述幽门螺杆菌。第十九页，共五十一页。诺贝尔生理学和医学奖1983年Marshall和Warren首先用微需氧技术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，由此获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖第二十页，共五十一页。一、分类最初因形态、分离培养方法与弯曲菌属细菌相似，又仅从胃标本中分离到，被称作胃弯曲菌样细菌由于此菌在胃窦部多见，且形态、培养及某些生化特性与弯曲菌属相似，DNAG+Gmol%也在弯曲菌属范围内，故命名为幽门弯曲菌(campylobacterpylori)1989年Goodwin等根据该菌的超微结构、形态、菌体脂肪酸组成、生长特征和酶的活力、16SrRNA序列等，提出该菌不应归于弯曲菌属，后称为幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)第二十一页，共五十一页。临床意义HP感染非常普遍。该菌为一种高度适应或只能生活于胃粘膜的细菌，菌体周围微环境的pH值为7.0。胃窦为其定植的最佳部位HP感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎之间的病因关系已充分确立。流行病学资料表明胃癌发病率在一些HP感染率高的人群中较高第二十二页，共五十一页。生物学特性菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形。菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。菌体长2.5~4.0μm，宽0.5~1.0μm。革兰染色阴性，有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。第二十三页，共五十一页。固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出现杆状或圆球状。电镜下菌体的一端可伸出2~6条带鞘鞭毛。鞭毛长为菌体1~1.5倍，粗约30nm。鞭毛在运动中起推进器作用，在定居过程中起锚住作用。第二十四页，共五十一页。为微需氧菌，在5%O2、10%CO2、85%N2的环境中生长良好。最适生长温度为37℃。相对湿度在98%以上为宜营养要求较高，一般需含血液或血清才能生长，常用的培养基有哥伦比亚血琼脂、心脑浸液血琼脂、布氏菌血培养基等第二十五页，共五十一页。HP生长缓慢，需经48~72h才长出菌落圆形孤立的小菌落，无色半透明呈露滴状，直径约0.5~1mm，血平板上有轻度溶血。沿接种线扩散生长，融合成片，扁平，无色半透明HP生化反应不活跃，不能利用糖类；第二十六页，共五十一页。具有大量高活力的胞外脲酶，产生的脲酶相当于普通变形杆菌的20~70倍。此外还产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、α-谷氨酰转肽酶和DNA酶等pH降至3.5以下时活力明显减弱生理浓度的胆盐可抑制HP生长第二十七页，共五十一页。四、微生物检验第二十八页，共五十一页。（二）微生物检验标本采集经胃镜用活检钳于近幽门部、胃窦部或病变邻近处取材，最好采取多位点样品应立即行床边接种或放入20%葡萄糖运送液0.5ml内，4℃中保存不超过5h受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周第二十九页，共五十一页。（三）标本直接检查1.直接显微镜检查涂片或悬滴观察将活检组织研碎，涂片或悬滴，置相差或暗视野显微镜下可见HP形态典型、运动活泼直接涂片染色镜检将活检粘膜组织在玻片上涂抹后，经革兰染色或单染色后镜检，如发现典型形态的HP即可诊断第三十页，共五十一页。组织切片染色镜检组织块经福马林固定、切片经W-S银染色、姬姆萨染色、HE染色和荧光染色等染色后镜检HP，以W-S银染效果最好免疫组化用免疫组化法可检出胃粘膜组织切片中的完整HP及破碎的菌体或抗原成分间接免疫荧光法（IIF）第三十一页，共五十一页。2．快速脲酶试验

Christensen尿素培养基将小块的活检组织块放入装有培养基的瓶内，如培养基由黄变为红色为阳性。提示由该菌产生的高活性的脲酶已将尿素分解，结果常在几分钟至24小时内得到第三十二页，共五十一页。3．核酸检测

现有的方法是从克隆的HP染色体DNA的特异性片段中构建引物从HP脲酶A基因序列中构建引物用PCR扩增结合限制性内切酶多态性分析技术鉴别HP可检测出不能分离培养的HP第三十三页，共五十一页。4．粪便标本抗原检测

可采用ELISA方法直接测定粪便标本中的抗原。适用于不能进行13C或14C标记尿素呼吸试验或胃镜检查的患者第三十四页，共五十一页。（四）分离培养与鉴定

分离培养宜用新鲜配制的选择培养基。将标本的粘膜面在平板上反复涂擦，或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种将接种后的平板放入微需氧和98%以上湿度的环境培养第三十五页，共五十一页。鉴定主要根据菌落特征、形态和染色性；37℃生长；氧化酶和触酶均阳性、脲酶强阳性；对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感；在1%甘油和1%胆盐中均不生长。第三十六页，共五十一页。（五）抗体检测用血清学方法检测患者体内的抗HP抗体（IgG、IgM和IgA）系最常用的无创伤性诊断HP感染的方法目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及ELISA等，而以ELISA应用最为广泛，现有商品化的ELISA、胶乳凝集试验试剂盒用于检测患者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体第三十七页，共五十一页。（六）13C或14C标记尿素呼吸试验基本方法是患者禁食一夜，进食用13C或14C标记的尿素，HP产生的脲酶分解尿素释放带有同位素的CO2，因此可测定患者呼气中释放带有同位素的CO2量，如CO2含量超过标准，提示有HP存在。该方法敏感性与特异性均很好，只是需要特殊的同位素测定仪。第三十八页，共五十一页。第九章非发酵革兰阴性杆菌概念：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。这一章节中讲述的细菌大多为条件致病菌，某些菌种是引起医院感染的病原体，如：铜绿假单胞菌不动杆菌属产碱杆菌属黄杆菌属军团菌属（人类的致病菌）第三十九页，共五十一页。假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌占70％～80％，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌等

第一节假单胞菌属(Pseudomonas)第四十页，共五十一页。微生物特性革兰阴性、无芽胞、专性需氧有端鞭毛或丛鞭毛生长温度范围广，最适生长温度为35℃产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药

第四十一页，共五十一页。二、铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)1.临床意义：铜绿假单胞菌在自然界分布较为广泛，因此很容易污染器械而造成感染机会

第四十二页，共五十一页。2.生物学特性革兰阴性，长短不一单鞭毛生长温度25～42℃氧化酶阳性还原硝酸盐、分解尿素、精氨酸酶阳性第四十三页，共五十一页。铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)血平板上毛玻璃样，金属光泽，生姜味可产生多种色素：荧光素与绿脓素第四十四页，共五十一页。铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)绿脓素第四十五页，共五十一页。1.肉浸汤2.胰化酪蛋白大豆肉汤37℃培养18－24h挑选菌落鉴定分型血清学噬菌体绿脓素初步鉴定菌落特征、色素、绿脓素：+涂片、革兰染色、氧化酶：+最后鉴定生化反应脑脊液、胸（腹）水、脓液、分泌物、痰、尿液、十二指肠引流液血液、环境用品分离培养：直接涂片革兰染色粪便血琼脂平板SS、麦康凯分离培养：37℃如生长铜绿假单胞菌检验程序第四十六页，共五十一页。

分类军团菌属(Legionella)属于军团菌科（Legionellaceae）常见的与人类疾病有关的军团菌：嗜肺军团菌（Legionellapneumophila）米克戴德军团菌（L.micdadei）长滩军团菌（L.longbeachae）杜莫夫军团菌（L.dumoffii）波兹曼军团菌（L.bozemanii）第六节军团菌属第四十七页，共五十一页。生物学特性革兰阴性杆菌菌体呈线状无芽胞，无荚膜，有端鞭毛或侧鞭毛严格需氧触酶阳性可液化明胶不分解糖类部份菌株氧化酶阳性第四十八页，共五十一页。临床意义

空气－乳胶微粒传播引起肺炎型和非肺炎型(庞蒂亚克热Pontiacfever)感染肺炎型：多器官损害，肺部、消化道及神经系统症状及体征，致死率高医院感染可高达23%