狂犬朊粒课件

狂犬病病毒

(RabiesVirus)

犬狗具有忠诚、勇敢两大天性，为人类作出了许多有益的事，如看门、猎守、劳役、侦察、破案。

沙皮犬——世界上最珍贵的犬种之一威尔斯柯基犬——英国王室的宠物法兰德斯牧牛犬——牧牛犬、导盲犬、警卫犬、搜索犬

患狂犬病的病狗图——英国伦敦皇家医学院巴斯德属弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病病毒属(Lyssavirus)的一种嗜神经性病毒。引起狂犬病,一种古老的传染病,古希腊的雅典和我国古代医师晋代葛洪和唐代孙思邈对此都有详尽的叙述。18世纪狂犬病在欧洲流行猖獗,病死率极高。19世纪(1895年)法国著名学者巴斯德首创用减毒病毒疫苗预防接种,以防止本病发生。1904年Negri在狂犬脑中发现内基小体,作为诊断指标之一。20世纪60年代病毒的结构和形态被揭示。概况巴斯德取出疯狗的脊髓做试验，证明疯狗脊髓也能引起狂犬病，且其毒性与存放的时间成反比，存放的时间越长、毒性越低，到第十四天，毒性基本消失。于是他把这些脊髓磨成浆汁，注射到狗和兔子的身上，这些狗和兔子果然对狂犬病有了免疫力。生物学性状形态似子弹状状(75×180nm)

核酸：-ssRNA，编码5种蛋白

衣壳：螺旋对称排列

包膜：M2蛋白（内层）；G蛋白（外层）；

刺突：与病毒的感染性、血凝性和毒力等相关。

狂犬病病毒电镜照片狂犬病病毒结构模式图M1、M2蛋白：衣壳和包膜的基质L蛋白：聚合酶G蛋白：病毒刺突

与致病性有关N蛋白：核蛋白保护RNA血清型:现用单抗分6型,血清1型为经典狂犬病毒,其它5型为狂犬病相关病毒。易感动物范围广,在胞质内形成嗜酸性包涵体,称内基小体

(Negribody)。

野毒株(wildstrain)或街毒株（streetstrain）:从自然感染的动物体内分离到的病毒。

固定毒株(fixedstrain):

将野毒株在家兔脑内连续传代后，病毒对家兔致病的潜伏期可以随传代次数的增加而逐渐缩短；传代至50代左右时，潜伏期可由原来的4周左右缩短为4天～6天；但继续进行传代，潜伏期不再缩短。这种变异的狂犬病病毒被称为固定毒株（fixedstrain）.重要特点:

是对家兔的致病性增强，对人或犬的致病性明显减弱；并且从脑外途径对犬进行接种时，不能侵入脑神经组织引起狂犬病。用于制备疫苗。

变异抵抗力

对热、紫外线、日光、干燥的抵抗力弱加温50℃1小时、60℃5分钟即死。易被强酸、强碱、甲醛、碘、乙醇、肥皂水及离子型和非离子型去污剂灭活。4℃可保存1周，如置50%甘油中于室温下可保持活性1周。可于鸡胚中培养人二倍体细胞、地鼠肾细胞、鸭胚细胞中培养增殖培养疫苗致病性和免疫性以侵犯中枢神经系统为主，病死率近乎100%。

地理分布广泛，全球除南极洲和大洋州外均有流行，世界上死于狂犬病的人99%在热带地区。东南亚、东欧、中东、北非、中非、中南美洲均有流行；西欧和北美的国家和地区，人狂犬病很少见。我国是狂犬病流行较为严重的国家，主要在农村。全年均可发生,以春夏和夏秋季稍多。男多于女,农村青少年较多，多与接触动物有关。病犬(80%-90%)，少数来自野生动物。储存宿主和传播媒介的动物多达30余种。狂犬病是人畜共患的急性传染病，病毒主要在野生动物(狼、狐狸、臭鼬、蝙蝠和浣熊等)及家畜(犬和猫)中传播。多数动物发病后死亡，少数病后成为病毒携带者,

蝙蝠、鼠类、犬等感染后为无症状携带者，为重要传染源。外观健康家犬平均带毒率14.9%(8-25%)传染源传播途径:

病毒主要通过咬伤传播，其次为经抓伤、舔伤的粘膜和皮肤侵入。少数通过对病犬宰杀等感染。人被蝙蝠咬伤或吸入蝙蝠洞内的空气而患狂犬病。易感性:

自然界所有温血动物均敏感而易患。人被病犬咬伤后的发病率为15-30%，被病狼咬伤后为50-60%。若及时伤口处理和接种疫苗，发病率可降至0.15%。被狂犬咬伤的部位和程度被咬伤者的健康状态、抵抗力的强弱救治措施是否及时合理人被狂犬咬伤以后是否发病该狂犬所带狂犬病病毒的毒力大小进入人体内病毒的多少与发病相关的因素狂犬病rabies一词意为“胡说、乱骂”患者常表现为：①发热、头痛、乏力；②异常兴奋、狂躁，恐风恐水；③不认亲人，咬人、学狗的姿态；④局部感觉异常；⑤步态蹒跚如醉汉；⑥咽喉肌、呼吸肌痉挛，继之流涎、会厌麻痹，呼吸衰竭、停止，在极度痛苦中死去免疫性细胞免疫：杀伤性T细胞特异性作用于病毒的蛋白抗原，引起病毒溶解；单核细胞产生的IFN和IL-2具有抑制病毒复制和抵抗病毒攻击的作用中和抗体：中和游离状态的病毒、阻断病毒进入神经细胞内的作用。人患狂犬病，根据被动物咬伤史并结合典型的临床症状可做出诊断。但人被犬或其他动物咬伤后，检查动物是否患有狂犬病，对采取防治措施极为重要。微生物学检查微生物学检查检查动物:

隔离观察7-10天不发病,可排除;

发病则处死,取海马回组织切片检查抗原和内基小体。患者可作唾液、尿沉渣抗原抗体检测。捕杀野犬,管理家犬,注射犬用疫苗（饲养员）。伤口处理:20%肥皂水,0.1%新洁尔灭或清水反复冲洗,再用70%酒精及碘酒涂擦。朊病毒

(prion)1996年春天英国蔓延的“疯牛病”，它不仅引起英国一场空前的经济和政治动荡，而且也波及了整个欧洲，加上法国克雅氏综合症（人类的一种朊病毒病）患者增多，人们很自然与食用来自英国的进口牛肉相联系，因而引起极大恐慌。

早在三百年前，人类在绵羊和小山羊中首次发现了感染朊病毒病的患病动物。因患病动物的奇痒难熬，常在粗糙的树干和石头表面不停摩擦，以致身上的毛都被磨脱，而被称为“羊搔痒症”。该病广泛传播于欧洲和澳洲，潜伏期为18－26个月，患病动物兴奋、搔痒、瘫痪直至死亡。后来又相继发现了传染性水貂脑软化病、马鹿和鹿的慢性消瘦病、猫的海绵状脑病等。人类朊病毒病研究最早的是库鲁病（“Kuru”在该部落意为“恐惧”或“寒颤”），患者总数约为3万，以女性和未成年儿童居多。

美国医学家盖杜赛克曾在该地区进行20年研究，探明该病的发生的原因，为此获得了1976年诺贝尔医学奖。

库鲁病朊粒感染机体后，经过长达数十年的潜伏期后，引起的一种进行性小脑退行性疾病，一旦发病，一年内（6～9个月）内死亡。巴布亚—新几内亚东部高地的土著部落有食用已故亲人的脏器以示怀念！英国每年确诊的BSE病例数累计病例:176,143

截止2000年3月1989198819931992199119901996199719981999199519942000来源于英国农业部病例数到2003年22国家在本土牛中发现BSEUK

1986(>182581)[1443in2000;1202in‘01;

755in‘02]Ireland

1989(1150)Switzerland

1990(420)France

1991(692)Portugal

1994(699)Belgium

1997(98)Netherlands

1997(52)Luxembourg

1997(2)Liechtenstein

1998(2)Denmark2000(10)Germany2000(235)Spain2000(210)Italy2000(56)Greece2001(1)CzechRepub

2001(2)Slovakia2001(10)Japan2001(5)Slovenia2001(2)Finland2001(1)Austria2001(1)Poland2002(4)Israel2002(1)朊粒的基本成分－PrPSC构象异常的朊蛋白（Prionprotein,

PrP）分子量为27000～30000，构成朊粒的基本单位。与已知病毒特征明显不同；不具有病毒结构，未检出核酸。本身无感染性，由3个PrP分子构成的朊粒单体有极强的感染性。

从感染动物脑组织分离和纯化的Prion是由蛋白酶Ｋ抗性蛋白组成的多聚体。PrP抵抗力强

PrP对甲醛、过氧化氢、高锰酸盐、乙醇、蛋白酶k等具有抗性高压灭菌202Kpa,134℃,1h灭活。

病原体所在自然发生的感染，病原体主要存在于病牛的脑组织、脊髓和眼睛的视网膜里。通过实验还发现，在病牛的小肠、骨髓和脊背神经节内也存在疯牛病因子。起因与传播疯牛病的发生可能是因为给牛喂养了含有患瘙痒病的羊的各种组织制成的肉骨粉而引起。这种通过喂养肉骨粉提供牲畜蛋白质的方式已经被普遍采用数十年了。大量可能带有疯牛病因子的饲料及危险性牛制品的出口是疯牛病流行的主要原因。

正常人PrP基因位于第20号染色体的短臂,全长为759bp，编码253个aa的正常PrP（cellularprionprotein）。

广泛表达于脊椎动物，与神经系统功能的维持、淋巴细胞信号转导、核酸代谢等有关。

正常PrP——PrPCPrPC与PrPSC的氨基酸序列相同2、对蛋白酶Ｋ敏感性不同

PrPC敏感，PrPSC具抗性1、分子构型不同

PrPCPrPSC４个螺旋２个螺旋没有折叠４个折叠致病机理

以β折叠为主的对蛋白酶K抵抗的具有感染能力的不溶性PrPSC。

以α螺旋为主的对蛋白酶K敏感的不具有感染能力的可溶性PrPC转变成PrPsc的传染过程少量PrPSC与细胞PrPC结合以PrPSC为模板，PrPC发生明显构象改变PrPC全部转变成不溶性的PrPSC大量PrPSC从细胞释放在脑组织中聚合组成特殊的淀粉样斑块

海绵状脑病死亡PrPsc的增殖

PrPSC的扩增和致病过程对

分子生物学基本原则的挑战Anfinsen原理（蛋白质折叠）中心法则DNARNAProtein所致疾病Humandiseases:震颤病或库鲁病克-雅病(CJD)格斯特曼综合症致死性家族失眠症

Animaldiseases:羊瘙痒病牛海绵脑病（疯牛病）大耳鹿慢性消耗病传染性貂脑病

prion病共同特征潜伏期长（平均28年），一旦出现症状半年到一年100%死亡，引起中枢神经系统的慢性退化性疾患。病理学特点是大脑皮质和小脑的神经元退化,空泡变性，形成淀粉样斑块、死亡。临床症状：出现痴呆、共济失调、震颤等症状，随即昏迷死亡。海绵状病变及周围的沉淀斑淀粉样蛋白沉淀

病人大脑组织切片分子病理学变化牛脑组织提取液中含有大量的异常纤维(SAF)，可用电镜负染技术观察到。

免疫性

患者不产生免疫应答Prion病传播传染病：同一种属间、跨种属屏障传播。

食物、输血等医源感染、母婴垂直传播遗传病：约10%具家族性，与PrP基因突变连锁散发病例：偶见单发个案微生物检验电镜：羊瘙痒病相关纤维（SAF）是朊粒感染的标志之一。神经病理检查：海绵状空泡、神经元消失、

淀粉样斑块免疫学方法：免疫印迹法或免疫组化检测PrP基因检测：20号染色体，找出突变位点。Prion分离：用转（PrP）基因小鼠分离，属慢发病毒需200天以上

吃牛肉要选择未受感染的产地的牛肉，以及避免吃内脏。无治疗方法防治原则中国对BSE采取的措施1990.6.1关于严防牛海绵状脑病传入我国的通知