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文档简介

关键词：包涵体

inclusionbody

复性蛋白包涵体表达蛋白的复性是一个世界性的难题，没有通用的方法，甚至没有靠得住的规律，只能试。

可以参考以下文章。该文出处已经忘了，如包涵体表达的蛋白的复性包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒。包涵体的组成与特性：

一般含有

50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、RNA

聚合酶、外膜蛋白

ompC、ompF

和ompA

等，环状或缺口的质粒

DNA，以及脂体、脂多糖等，大小为

0.5-1um，难溶与水，只溶于变性剂如尿素、盐酸胍等。子家的店里。木子是个听话的孩子，所以她总是在假期里帮妈妈打下手。木子记包涵体的形成：

主要因为在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白质折叠的辅佐因子，或环境不适，无法形成正确的次级键等原因形成的。

1、表达量过高，研究发现在低表达时很少形成包涵体，表达量越高越容易形成包涵体。原因可能是合成速度太快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确的配对，过多的蛋白子家的店里。木子是个听话的孩子，所以她总是在假期里帮妈妈打下手。木子记缺乏真核生物中翻译后修饰所需酶类，致使中间体大量积累，容易形成包涵体沉淀。因此有人采用共表达分子伴侣的方法以增加可溶蛋白的比例。包涵体表达的有利因素：

1、可溶性蛋白在细胞内容易受到蛋白酶的攻击，包涵体表达可以避免蛋白酶对外源蛋白的降解。2、降低了胞内外源蛋白的浓度，有利于表达量的提高。

3、包涵体中杂蛋白含量较低，且只需要简单的低速离心就可以与可溶性蛋白分离，有利于分离纯化。4、对机械搅拌和超声破碎不敏感，易于破壁，并与细胞膜碎片分离。破菌：子家的店里。木子是个听话的孩子，所以她总是在假期里帮妈妈打下手。木子记1、机械破碎2、超声破碎3、化学方法破碎分离：1、离心：5000-20000g15min

离心，可使大多数包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离。2、过滤或萃取方法：洗涤：

由于脂体及部分破碎的细胞膜及膜蛋白与包涵体粘连在一起，在溶解包涵体之前要先洗涤包涵体，通常用低浓度的变性剂如

2M

尿素在50mMTrispH7.0-8.5

左右,1mMEDTA

中洗涤。此外可以用温和去垢剂

TritonX-100

洗涤去除膜碎片和膜蛋白。溶解：白。如有人在

pH9.0

溶解牛生长激素和牛凝乳蛋白酶包涵体。有些蛋白可以溶解在

60mMHCl

中。这些方法只适合于少部分蛋白的增溶。

变性剂的使用浓度和作用时间：一般在偏碱性性的环境中如

pH8.0-9.0，尿素在碱性环境中不稳定，一般不要超过

pH1.0。有些蛋白只能用盐酸胍如

IL-4。增溶时一般室温过夜，但盐酸胍在

37

度

1

小时便可以使多数蛋白完全变性溶解。weixin"]}};with(document)0[(getElementsByTagName('head')[0]||body).appendChild(createElement('script')).src='share.baidu/static/api/js/sh

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