免疫组织化学染色技术课件整理

免疫组织化学染色技术怎样思想，就有怎样的生活免疫组织化学染色技术怎样思想，就有怎样的生活1免疫组织化学染色技米免疫组织化学染色技米2第一节常规组织学染色技术概述宏观→微观一超微结构→基因水平组织形态学研究技术的种类:病理大体组织标本的染色方法在标本制作中,为了某种特殊目的,突出显示标本的重要部分,借助组织切片的特殊染色方法对标本进行染色,将病变器官及不同组织成分用染料染成不同的颜色,以便于区分大体标本的不同成分和病变特脂肪组织染色法目的:主要用于心、肝、肾脂肪变性,动脉粥样硬化大体标本的染色第一节常规组织学染色技术概述3试剂:苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ结果:病变处脂肪组织呈橙黄色>早期心肌梗死染色法目的:显示早期心肌梗死的区域试剂:0.1%NBT(硝基四唑蓝)/0.2mo/LPBS(pH7.6)方法:将23mm厚新鲜心肌大片放入试剂中,37孵育20min。结果:正常心肌呈蓝色,早期心肌梗死区、纤维结缔组织、癜痕组织呈浅蓝色或不显色注意:新鲜标本,尸检心肌不超过6小时试剂:苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ4光学显微镜下的组织学染色方法常规HE染色(hematoxylinandeosinstaining)组织学特殊染色1.Mallory三染色、Masson三染色2.神经纤维的镀银染色3.其他的特殊染色,包括钙、铁、铅、铜、黑色素和脂褐素、细胞DNA和RNA的染色等上述的各种染色方法只能在细胞水平上显示组织结构的形态改变。、超微结构的观察光线波长的限制,光学显微镜的分辨率极限为0.2μm有效放大倍数最高不超过2000倍。电镜的分辨率最佳可达014mm,放大倍率最高可达100万倍。光学显微镜下的组织学染色方法5第二节免疫组织化学染色技术Immunohistochemicaltechnique该技术主要是用于研究和观察细胞中的某些结构或分子物质和组织细胞间的成分,因此现又称为免疫细胞化学技术。根据标记物的不同,免疫细胞化学技术可分为:1.免疫酶细胞化学技术2.免疫荧光细胞化学技术3免疫铁蛋白技术4.免疫金银细胞化学技术5.免疫电子显徼镜技术第二节免疫组织化学染色技术6免疫组织化学染色方法的原理抗原(antigen1.定义:是一类在适合条件下能激发机体免疫系统发生免疫应答,并能与免疫应答产生的效应物质(抗体和效应细胞)在体内或体外发生特异性结合反应的物质。抗原具有两种性能:(1)免疫原性(immunogenicity)指抗原分子具有诱导机体产生免疫应答的特性。(2)反应原性(reactogenicity)指抗原分子与抗体或效应T细胞等免疫应答产物发生特异性反应的特性。免疫组织化学染色方法的原理72.抗原的分类完全抗原、半抗原免疫学分类胸腺依赖抗原与非依赖抗原外源性抗原:微生物、花粉等内源性抗原:隐蔽的自身抗原、肿瘤相关抗原等临床分类同种异型抗原:人类白细胞抗原血型抗原异嗜性抗原:人与其他动物、植物等之间存在的共同抗原2.抗原的分类8抗体(antibody)1.定义:机体受到抗原刺激后,通过体液免疫应答,B淋巴细胞活化、增殖,分化为浆细胞,由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白,称为抗体。大部分抗体电泳后位于γ区带,1972年国际免疫学联合会正式将化学结构相同或相似的一类球蛋白分子统一命名为免疫球蛋白immunoglobin,Ig)2.抗体的种类:五类,即IgA、IgD、IgE、IgG、M免疫组织化学染色技术中,使用的抗体主要是gG,个别情况下使用IgG的亚型,多为IgG1抗体(antibody)9免疫组织化学染色的反应原理及显色原理1.免疫组织化学染色的反应原理崇染色反应的最基本原理是抗原抗体的反应米通过对针对标本中相应抗原的抗体上标记某种发色剂或酶类,再通过激发发色剂或使用某种显色剂,在显微镜下使标本中抗原抗体反应的部位产生肉眼可观察到的颜色以确定所要检测的抗原是否存在。崇通过免疫组织化学染色技术,在光学显微镜下即可检测到所要研究的蛋白分子类物质的存在与否。免疫组织化学染色的反应原理及显色原理102.免疫组织化学染色的显色原理(1)基本原理荧光标记或酶标抗体的染色分为直接法和间接法。其中以酶标抗体法应用最为广泛直接法:是将酶直接标记在第一抗体上,用酶标抗体与切片上待检测的组织或细胞中抗原反应,再用底物显色显示出所检测的目的抗原的部位。间接法:是将酶标记在第二抗体或与第二抗体具有亲和性的某种分子上,检测组织或细胞内的特异性抗原物质。间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特异性抗体,多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体或由小鼠制备的单克隆抗体。2.免疫组织化学染色的显色原理11免疫组织化学染色技术课件整理12免疫组织化学染色技术课件整理13免疫组织化学染色技术课件整理14免疫组织化学染色技术课件整理15免疫组织化学染色技术课件整理16免疫组织化学染色技术课件整理17免疫组织化学染色技术课件整理18免疫组织化学染色技术课件整理19免疫组织化学染色技术课件整理20免疫组织化学染色技术课件整理21免疫组织化学染色技术课件整理22免疫组织化学染色技术课件整理23免疫组织化学染色技术课件整理24免疫组织化学染色技术课件整理25免疫组织化学染色技术课件整理26免疫组织化学染色技术课件整理27免疫组织化学染色技术课件整理28免疫组织化学染色技术课件整理29免疫组织化学染色技术课件整理30免疫组织化学染色技术课件整理31免疫组织化学染色技术课件整理32免疫组织化学染色技术课件整理33免疫组织化学染色技术课件整理34免疫组织化学染色技术课件整理35免疫组织化学染色技术课件整理36免疫组织化学染色技术课件整理37免疫组织化学染色技术课件整理38免疫组织化学染色技术课件整理39免疫组织化学染色技术课件整理40免疫组织化学染色技术课件整理41免疫组织化学染色技术课件整理42免疫组织化学染色技术课件整理43免疫组织化学染色技术课件整理44免疫组织化学染色技术课件整理45免疫组织化学染色技术课件整理46免疫组织化学染色技术课件整理47免疫组织化学染色技术课件整理48免疫组织化学染色技术课件整理49免疫组织化学染色技术课件整理50免疫组织化学染色技术课件整理51免疫组织化学染色技术课件整理52免疫组织化学染色技术课件整理53免疫组织化学染色技术课件整理54免疫组织化学染色技术课件整理55免疫组织化学染色技术课件整理56免疫组织化学染色技术课件整理57免疫组织化学染色技术课件整理58免疫组织化学染色技术课件整理59免疫组织化学染色技术课件整理60免疫组织化学染色技术课件整理61免疫组织化学染色技术课件整理62免疫组织化学染色技术课件整理63免疫组织化学染色技术课件整理64免疫组织化学染色技术课件整理65免疫组织化学染色技术课件整理66免疫组织化学染色技术课件整理67免疫组织化学染色技术课件整理68免疫组织化学染色技术课件整理69免疫组织化学染色技术课件整理70免疫组织化学染色技术课件整理71免疫组织化学染色技术课件整理72免疫组织化学染色技术课件整理73免疫组织化学染色技术课件整理74免疫组织化学染色技术课件整理75免疫组织化学染色技术课件整理76免疫组织化学染色技术课件整理77免疫组织化学染色技术课件整理78免疫组织化学染色技术课件整理79免疫组织化学染色技术课件整理80免疫组织化学染色技术课件整理81免疫组织化学染色技术课件整理82免疫组织化学染色技术课件整理83免疫组织化学染色技术课件整理84免疫组织化学染色技术课件整理85免疫组织化学染色技术课件整理86免疫组织化学染色技术课件整理87免疫组织化学染色技术课件整理88免疫组织化学染色技术课件整理89免疫组织化学染色技术课件整理90免疫组织化学染色技术课件整理91免疫组织化学染色技术课件整理92免疫组织化学染色技术课件整理93免疫组织化学染色技术课件整理94免疫组织化学染色技术课件整理95谢谢46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基

47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游

48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯

49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙

50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特谢谢46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基96免疫组织化学染色技术怎样思想，就有怎样的生活免疫组织化学染色技术怎样思想，就有怎样的生活97免疫组织化学染色技米免疫组织化学染色技米98第一节常规组织学染色技术概述宏观→微观一超微结构→基因水平组织形态学研究技术的种类:病理大体组织标本的染色方法在标本制作中,为了某种特殊目的,突出显示标本的重要部分,借助组织切片的特殊染色方法对标本进行染色,将病变器官及不同组织成分用染料染成不同的颜色,以便于区分大体标本的不同成分和病变特脂肪组织染色法目的:主要用于心、肝、肾脂肪变性,动脉粥样硬化大体标本的染色第一节常规组织学染色技术概述99试剂:苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ结果:病变处脂肪组织呈橙黄色>早期心肌梗死染色法目的:显示早期心肌梗死的区域试剂:0.1%NBT(硝基四唑蓝)/0.2mo/LPBS(pH7.6)方法:将23mm厚新鲜心肌大片放入试剂中,37孵育20min。结果:正常心肌呈蓝色,早期心肌梗死区、纤维结缔组织、癜痕组织呈浅蓝色或不显色注意:新鲜标本,尸检心肌不超过6小时试剂:苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ100光学显微镜下的组织学染色方法常规HE染色(hematoxylinandeosinstaining)组织学特殊染色1.Mallory三染色、Masson三染色2.神经纤维的镀银染色3.其他的特殊染色,包括钙、铁、铅、铜、黑色素和脂褐素、细胞DNA和RNA的染色等上述的各种染色方法只能在细胞水平上显示组织结构的形态改变。、超微结构的观察光线波长的限制,光学显微镜的分辨率极限为0.2μm有效放大倍数最高不超过2000倍。电镜的分辨率最佳可达014mm,放大倍率最高可达100万倍。光学显微镜下的组织学染色方法101第二节免疫组织化学染色技术Immunohistochemicaltechnique该技术主要是用于研究和观察细胞中的某些结构或分子物质和组织细胞间的成分,因此现又称为免疫细胞化学技术。根据标记物的不同,免疫细胞化学技术可分为:1.免疫酶细胞化学技术2.免疫荧光细胞化学技术3免疫铁蛋白技术4.免疫金银细胞化学技术5.免疫电子显徼镜技术第二节免疫组织化学染色技术102免疫组织化学染色方法的原理抗原(antigen1.定义:是一类在适合条件下能激发机体免疫系统发生免疫应答,并能与免疫应答产生的效应物质(抗体和效应细胞)在体内或体外发生特异性结合反应的物质。抗原具有两种性能:(1)免疫原性(immunogenicity)指抗原分子具有诱导机体产生免疫应答的特性。(2)反应原性(reactogenicity)指抗原分子与抗体或效应T细胞等免疫应答产物发生特异性反应的特性。免疫组织化学染色方法的原理1032.抗原的分类完全抗原、半抗原免疫学分类胸腺依赖抗原与非依赖抗原外源性抗原:微生物、花粉等内源性抗原:隐蔽的自身抗原、肿瘤相关抗原等临床分类同种异型抗原:人类白细胞抗原血型抗原异嗜性抗原:人与其他动物、植物等之间存在的共同抗原2.抗原的分类104抗体(antibody)1.定义:机体受到抗原刺激后,通过体液免疫应答,B淋巴细胞活化、增殖,分化为浆细胞,由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白,称为抗体。大部分抗体电泳后位于γ区带,1972年国际免疫学联合会正式将化学结构相同或相似的一类球蛋白分子统一命名为免疫球蛋白immunoglobin,Ig)2.抗体的种类:五类,即IgA、IgD、IgE、IgG、M免疫组织化学染色技术中,使用的抗体主要是gG,个别情况下使用IgG的亚型,多为IgG1抗体(antibody)105免疫组织化学染色的反应原理及显色原理1.免疫组织化学染色的反应原理崇染色反应的最基本原理是抗原抗体的反应米通过对针对标本中相应抗原的抗体上标记某种发色剂或酶类,再通过激发发色剂或使用某种显色剂,在显微镜下使标本中抗原抗体反应的部位产生肉眼可观察到的颜色以确定所要检测的抗原是否存在。崇通过免疫组织化学染色技术,在光学显微镜下即可检测到所要研究的蛋白分子类物质的存在与否。免疫组织化学染色的反应原理及显色原理1062.免疫组织化学染色的显色原理(1)基本原理荧光标记或酶标抗体的染色分为直接法和间接法。其中以酶标抗体法应用最为广泛直接法:是将酶直接标记在第一抗体上,用酶标抗体与切片上待检测的组织或细胞中抗原反应,再用底物显色显示出所检测的目的抗原的部位。间接法:是将酶标记在第二抗体或与第二抗体具有亲和性的某种分子上,检测组织或细胞内的特异性抗原物质。间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特异性抗体,多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体或由小鼠制备的单克隆抗体。2.免疫组织化学染色的显色原理107免疫组织化学染色技术课件整理108免疫组织化学染色技术课件整理109免疫组织化学染色技术课件整理110免疫组织化学染色技术课件整理111免疫组织化学染色技术课件整理112免疫组织化学染色技术课件整理113免疫组织化学染色技术课件整理114免疫组织化学染色技术课件整理115免疫组织化学染色技术课件整理116免疫组织化学染色技术课件整理117免疫组织化学染色技术课件整理118免疫组织化学染色技术课件整理119免疫组织化学染色技术课件整理120免疫组织化学染色技术课件整理121免疫组织化学染色技术课件整理122免疫组织化学染色技术课件整理123免疫组织化学染色技术课件整理124免疫组织化学染色技术课件整理125免疫组织化学染色技术课件整理126免疫组织化学染色技术课件整理127免疫组织化学染色技术课件整理128免疫组织化学染色技术课件整理129免疫组织化学染色技术课件整理130免疫组织化学染色技术课件整理131免疫组织化学染色技术课件整理132免疫组织化学染色技术课件整理133免疫组织化学染色技术课件整理134免疫组织化学染色技术课件整理135免疫组织化学染色技术课件整理136免疫组织化学染色技术课件整理137免疫组织化学染色技术课件整理138免疫组织化学染色技术课件整理139免疫组织化学染色技术课件整理140免疫组织化学染色技术课件整理141免疫组织化学染色技术课件整理142免疫组织化学染色技术课件整理143免疫组织化学染色技术课件整理144免疫组织化学染色技术课件整理145免疫组织化学染色技术课件整理146免疫组织化学染色技术课件整理147免疫组织化学染色技术课件整理148免疫组织化学染色技术课件整理149免疫组织化学染色技术课件整理150免疫组织化学染色技术课件整理151免疫组织化学染色技术课件整理152免疫组织化学染色技术课件整理153免疫组织化学染色技术课件整理154免疫组织化学染色技术课件整理155免疫组织化学染色技术课件整理156免疫组织化学染色技术课件整理157免疫组织化学染色技术课件整理158免疫组织化学染色技术课件整理159免疫组织化学染色技术课件整理160免疫组织化学染色技术课件整理161免疫组织化学染色技术课件