水粪大肠菌数检测课件

水粪大肠菌数检测1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴水粪大肠菌数检测水粪大肠菌数检测1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴09工业环保与安全技术水总大肠菌群检测工作流程themegalleryCompanyLogo水粪大肠菌数检测1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫水1水粪大肠菌数检测课件水粪大肠菌数检测课件3水粪大肠菌数检测课件4水粪大肠菌数检测课件5如何监测？化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值；

生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。themegalleryCompanyLogo如何监测？化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值6《生活饮用水卫生标准》2019年12月29日，卫生部、国家标准化委员会发布2019年第12号文件，批准发布《生活饮用水卫生标准》及检测方法国家标准。标准自2019年7月1日起实施，其中《生活饮用水卫生标准》中非常规指标的实施项目和日期由省级人民政府根据当地实际情况确定。全部指标最迟于2019年7月1日实施。themegalleryCompanyLogo《生活饮用水卫生标准》2019年12月29日，卫生部、国家标7饮用水中微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出一般性污染耐热大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染大肠埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染菌落总数CFU/mL100一般性污染贾第鞭毛虫个/10L<1肠道原虫隐孢子虫个/10L<1肠道原虫themegalleryCompanyLogo饮用水中微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100m8新国标常规项目限值变化原国标新国标砷0.05mg/L0.01mg/L镉0.01mg/L0.005mg/L铅0.05mg/L0.01mg/L硝酸盐（以N计）20mg/L10mg/L浊度3度1NTUthemegalleryCompanyLogo新国标常规项目限值变化原国标新国标砷0.05mg/L0.09

检品胆盐乳糖发酵管伊红美兰平板大肠杆菌菌落纯培养乳糖复发酵管（-）乳糖复发酵管（⊕）

大肠菌群的检测流程themegalleryCompanyLogo大肠菌群的检测流程themegalleryCompanyL10总大肠菌群当饮用水受到粪便等污染，就有可能带有沙门氏菌、志贺氏菌、弧菌、肠道病毒等，且它们均可以水为媒介引起肠道传染病。总大肠菌群含量可表明水体被污染的程度，并且间接地表明肠道病菌存在的可能，以及对人体健康具有潜在危险性。themegalleryCompanyLogo总大肠菌群当饮用水受到粪便等污染，就有可能带有沙门氏菌、志贺11粪大肠菌群粪大肠菌为总大肠菌群的一个亚种；直接来自粪便，除了它耐热，在44-44.5℃的高温条件下仍可生长繁殖并将色氨酸代谢成吲哚，其他特性均与总大肠菌群相同。由于总大肠菌群既包括粪便污染，同时也包括非粪便污染的大肠菌总数，因此，有必要在饮用水标准中增加粪大肠菌群这个指标，以便直接反映出水体是否受到粪便污染的信息，进一步确保流行病学的安全。themegalleryCompanyLogo粪大肠菌群粪大肠菌为总大肠菌群的一个亚种；直接来自粪便，除了12粪大肠菌群检测方法注解

总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如将培养温度再升高至44.5℃，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。在37℃培养生长的大肠菌群，包括在粪便内生长的大肠菌群称为“总大肠菌群”(Totalcoliform)；在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为“粪大肠菌群”(Fecalcoliform)，粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。

themegalleryCompanyLogo粪大肠菌群检测方法注解

总大肠菌群中的细菌除生活在13目的：1.学习水样的采取方法和水样总大肠菌菌群测定的方法；2.了解水源水的平板菌落计数的原则。themegalleryCompanyLogo目的：1.学习水样的采取方法和水样总大肠菌菌群测定的方法；t14水中总大肠菌群的测定一、测定意义

作为水体受粪便污染的指标。

二、总大肠菌群的特征

在37℃48h之内发酵乳糖产酸产气

是革兰氏阴性无芽孢杆菌

在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落

themegalleryCompanyLogo水中总大肠菌群的测定一、测定意义作为水体受粪便污染的指标。15实验原理：目前检测大肠菌群的标准分析法是多管发酵法。多管发酵法包括初步发酵试验，平板划线分离和复发酵试验三部分。themegalleryCompanyLogo实验原理：目前检测大肠菌群的标准分析法是多管发酵法。them16

水中总大肠菌群的测定

总大肠菌群:指那些能在37℃48h之内发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。

生活饮用水的总大肠菌群数每升不得超过3个themegalleryCompanyLogo水中总大肠菌群的测定总大肠菌群:指那些能在37℃48h17水中总大肠菌群的测定一、多管发酵法

(1)生活饮用水

①

初发酵试验

②

平板分离

③

复发酵试验

阳性管接种在伊红美兰培养基上，37℃培养18～24h，挑选典型特征的菌落，涂片、革兰氏染色、镜检

各100mL原水样各10mL37℃24h＋＋＋＋＋＋G-G-G+37℃18-24h37℃24hthemegalleryCompanyLogo水中总大肠菌群的测定一、多管发酵法(1)生活饮用水①18(2)水源水：将水样作1：10稀释

水样25mL225mL无菌水各1mL各1mL各10mL10-137℃24h水源水大肠菌群的测定themegalleryCompanyLogo(2)水源水：将水样作1：10稀释水样25mL225mL19(3)地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1000或更高的稀释

MPN值=MPN指数×

水源水大肠菌群的测定themegalleryCompanyLogo(3)地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1020水源水大肠菌群的测定1.初发酵试验

水样25mL225mL无菌水各1mL各1mL各10mL10-1EC培养液37℃24h44.5℃24－48hthemegalleryCompanyLogo水源水大肠菌群的测定1.初发酵试验水样25mL225mL无212.复发酵试验

阳性管接到EC培养液中。在37℃温度下培养24h±2h，立即观察，发酵管产气则证实为大肠菌群阳性

3.计算和报告结果

查MPN表，按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值

水源水大肠菌群的测定themegalleryCompanyLogo2.复发酵试验阳性管接到EC培养液中。在37℃温度下培养222检测操作方法检品取样培养基配制灭菌与消毒接种培养与计数themegalleryCompanyLogo检测操作方法检品取样培养基配制灭菌与消毒接种培养与计数the23检品取样1.水体取样：应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。2.自来水取样：打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用烧杯接取自来水。themegalleryCompanyLogo检品取样1.水体取样：themegalleryCompany243.将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。

注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。

检品取样themegalleryCompanyLogo3.将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连25或者是品红亚硫酸钠培养基。生长特征菌落。发酵（产酸产气）EC肉汤配方：胰蛋白胨20g/l乳糖5g/l3号胆盐1.5g/lK2HPO44g/lKH2PO41.5g/lNaCl5g/lpH：7.0初发酵（产酸产气）EC肉汤伊红美兰培养基3倍EC肉汤培养基配制themegalleryCompanyLogo或者是品红亚硫酸钠培养基。生长特征菌落。发酵（产酸产气）初发26品红亚硫酸钠培养基（EndoAgar）（远藤琼脂培养基）themegalleryCompanyLogo品红亚硫酸钠培养基（EndoAgar）（远藤琼脂培养基）t27品红亚硫酸钠培养基平板及典型菌落themegalleryCompanyLogo品红亚硫酸钠培养基平板及典型菌落themegalleryCo28伊红美蓝培养基

蛋白胨10g

乳糖10g

磷酸氢二钾2g

琼脂20~30g

蒸馏水1000ml

2%伊红水溶液20ml

0.5%美蓝水溶液13mlthemegalleryCompanyLogo伊红美蓝培养基蛋白胨10g

themegalleryC29灭菌与消毒灭菌1.无菌操作中需要用到的器具需灭菌，如取样瓶、培养皿、涂布棒等；2.培养基需灭菌；3.无菌水需灭菌。消毒1.接种前，空气环境需紫外线消毒；2.无菌操作时，手需酒精消毒themegalleryCompanyLogo灭菌与消毒灭菌1.无菌操作中需要用到的器具需灭菌，如取样瓶、301.加热已经配制好的固体培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，待其冷却后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。5.倒置于37度培养箱中培养24h。涂布平板接种法：themegalleryCompanyLogo1.加热已经配制好的固体培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基），使31涂布平板接种法：themegalleryCompanyLogo涂布平板接种法：themegalleryCompanyLo32

1.挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。

2.选择平均菌落数在30-300之间的平板来计算该水样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30-300范围之内，则取最靠近30-300的平板进行计数

3.如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30-300范围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两值的平均值。菌落计数themegalleryCompanyLogo菌落计数themegalleryCompanyLogo33themegalleryCompanyLogothemegalleryCompanyLogo3410-110-210-3细菌总数（个/mL)156215213246822640261321856无法计数354731928104无法计数30312试一试

themegalleryCompanyLogo10-110-210-3细菌总数1562152132468235例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数/CFU·mL-1报告方式/CFU·mL-110-110-210-3123456136527602890无法计算27无法计算164295271165011305204660513512－1.62.2－－－1640037750271005130002703050016000或1.6×10438000或3.8×10427000或2.7×104510000或5.1×105270或2.7×10231000或3.1×104计算和报告计数结果

themegalleryCompanyLogo例次两个稀释度菌落总数/CFU·mL-1报告方式/CFU·36计算根据证实有大肠菌群存在的阳性发酵管，查MPN检索表，求出每100ml水样中的大肠菌群数。MPN表见P192themegalleryCompanyLogo计算根据证实有大肠菌群存在的阳性发酵管，查MPN检索表，求出37大肠菌群测定

——国家标准采用三步法

大肠菌群

——需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

乳糖发酵试验分离培养证实试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。

根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。

themegalleryCompanyLogo大肠菌群测定

——国家标准采用三38较清洁样品的三步法图示

100mL50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液100mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL水样10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mLthemegalleryCompanyLogo较清洁样品的三步法图示100mL50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨39三步法图示

取产酸产气的发酵管中培养液在伊红美兰平板上进行划线取有核心和带金属光泽的深紫色菌落进行革兰氏染色乳糖蛋白胨培养液镜检（革兰氏阴性菌）37℃培养48h证实产气（阳性）结果与否37℃培养24h37℃培养24h

themegalleryCompanyLogo三步法图示取产酸产气的发酵管中培养液在伊红美兰平板上进行划40大肠菌群测定

计算方法

挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落；红色、粉红色菌落。抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。

为阴性结果的水样体积（mL）×全部水样体积（mL）

MPN＝

1000×为阳性结果的发酵管（瓶）的数目

产酸判断：紫色培养液变成黄色产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。themegalleryCompanyLogo大肠菌群测定计算方法挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽41美国FDA标准方法——行业标准采用两步法：用于对出口食品中大肠菌群进行检验

推测试验证实试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。

将产气发酵管培养物转种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性，查MPN表，报告每ml（g）样品中大肠菌群的MPN值。

themegalleryCompanyLogo美国FDA标准方法——行业标准采用两步法：用于对出口食品中大42如对一自来水厂出水进行检验，初发酵一般在10支小发酵管和两支大发酵瓶内进行，复发酵在5支小发酵管内进行。以300mL进行初发酵实验，其中100mL的水样2份（分装于2个大发酵瓶中），10mL水样10份，（分装于10支个小发酵管中）。实验结果：100mL的2份水样为阴性结果，无大肠杆菌存在；10mL的水样中有5份为阳性结果，存在大肠杆菌。则：MPN=?练习：themegalleryCompanyLogo如对一自来水厂出水进行检验，初发酵一般在10支小发酵管和43实验流程填写项目单卡项目实施提交报告分组取样根据项目单卡领物品根据单卡返还器具项目实施步骤themegalleryCompanyLogo实验流程填写项目单卡项目实施提交报告分组取样根据项目单卡领物44themegalleryThankYou!themegalleryThankYou!36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙

37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科

38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯

39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳

40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子xiexie!谢谢！36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙xiexie!46水粪大肠菌数检测1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴水粪大肠菌数检测水粪大肠菌数检测1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴09工业环保与安全技术水总大肠菌群检测工作流程themegalleryCompanyLogo水粪大肠菌数检测1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫水47水粪大肠菌数检测课件水粪大肠菌数检测课件49水粪大肠菌数检测课件50水粪大肠菌数检测课件51如何监测？化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值；

生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。themegalleryCompanyLogo如何监测？化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值52《生活饮用水卫生标准》2019年12月29日，卫生部、国家标准化委员会发布2019年第12号文件，批准发布《生活饮用水卫生标准》及检测方法国家标准。标准自2019年7月1日起实施，其中《生活饮用水卫生标准》中非常规指标的实施项目和日期由省级人民政府根据当地实际情况确定。全部指标最迟于2019年7月1日实施。themegalleryCompanyLogo《生活饮用水卫生标准》2019年12月29日，卫生部、国家标53饮用水中微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出一般性污染耐热大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染大肠埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染菌落总数CFU/mL100一般性污染贾第鞭毛虫个/10L<1肠道原虫隐孢子虫个/10L<1肠道原虫themegalleryCompanyLogo饮用水中微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100m54新国标常规项目限值变化原国标新国标砷0.05mg/L0.01mg/L镉0.01mg/L0.005mg/L铅0.05mg/L0.01mg/L硝酸盐（以N计）20mg/L10mg/L浊度3度1NTUthemegalleryCompanyLogo新国标常规项目限值变化原国标新国标砷0.05mg/L0.055

检品胆盐乳糖发酵管伊红美兰平板大肠杆菌菌落纯培养乳糖复发酵管（-）乳糖复发酵管（⊕）

大肠菌群的检测流程themegalleryCompanyLogo大肠菌群的检测流程themegalleryCompanyL56总大肠菌群当饮用水受到粪便等污染，就有可能带有沙门氏菌、志贺氏菌、弧菌、肠道病毒等，且它们均可以水为媒介引起肠道传染病。总大肠菌群含量可表明水体被污染的程度，并且间接地表明肠道病菌存在的可能，以及对人体健康具有潜在危险性。themegalleryCompanyLogo总大肠菌群当饮用水受到粪便等污染，就有可能带有沙门氏菌、志贺57粪大肠菌群粪大肠菌为总大肠菌群的一个亚种；直接来自粪便，除了它耐热，在44-44.5℃的高温条件下仍可生长繁殖并将色氨酸代谢成吲哚，其他特性均与总大肠菌群相同。由于总大肠菌群既包括粪便污染，同时也包括非粪便污染的大肠菌总数，因此，有必要在饮用水标准中增加粪大肠菌群这个指标，以便直接反映出水体是否受到粪便污染的信息，进一步确保流行病学的安全。themegalleryCompanyLogo粪大肠菌群粪大肠菌为总大肠菌群的一个亚种；直接来自粪便，除了58粪大肠菌群检测方法注解

总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如将培养温度再升高至44.5℃，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。在37℃培养生长的大肠菌群，包括在粪便内生长的大肠菌群称为“总大肠菌群”(Totalcoliform)；在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为“粪大肠菌群”(Fecalcoliform)，粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。

themegalleryCompanyLogo粪大肠菌群检测方法注解

总大肠菌群中的细菌除生活在59目的：1.学习水样的采取方法和水样总大肠菌菌群测定的方法；2.了解水源水的平板菌落计数的原则。themegalleryCompanyLogo目的：1.学习水样的采取方法和水样总大肠菌菌群测定的方法；t60水中总大肠菌群的测定一、测定意义

作为水体受粪便污染的指标。

二、总大肠菌群的特征

在37℃48h之内发酵乳糖产酸产气

是革兰氏阴性无芽孢杆菌

在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落

themegalleryCompanyLogo水中总大肠菌群的测定一、测定意义作为水体受粪便污染的指标。61实验原理：目前检测大肠菌群的标准分析法是多管发酵法。多管发酵法包括初步发酵试验，平板划线分离和复发酵试验三部分。themegalleryCompanyLogo实验原理：目前检测大肠菌群的标准分析法是多管发酵法。them62

水中总大肠菌群的测定

总大肠菌群:指那些能在37℃48h之内发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。

生活饮用水的总大肠菌群数每升不得超过3个themegalleryCompanyLogo水中总大肠菌群的测定总大肠菌群:指那些能在37℃48h63水中总大肠菌群的测定一、多管发酵法

(1)生活饮用水

①

初发酵试验

②

平板分离

③

复发酵试验

阳性管接种在伊红美兰培养基上，37℃培养18～24h，挑选典型特征的菌落，涂片、革兰氏染色、镜检

各100mL原水样各10mL37℃24h＋＋＋＋＋＋G-G-G+37℃18-24h37℃24hthemegalleryCompanyLogo水中总大肠菌群的测定一、多管发酵法(1)生活饮用水①64(2)水源水：将水样作1：10稀释

水样25mL225mL无菌水各1mL各1mL各10mL10-137℃24h水源水大肠菌群的测定themegalleryCompanyLogo(2)水源水：将水样作1：10稀释水样25mL225mL65(3)地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1000或更高的稀释

MPN值=MPN指数×

水源水大肠菌群的测定themegalleryCompanyLogo(3)地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1066水源水大肠菌群的测定1.初发酵试验

水样25mL225mL无菌水各1mL各1mL各10mL10-1EC培养液37℃24h44.5℃24－48hthemegalleryCompanyLogo水源水大肠菌群的测定1.初发酵试验水样25mL225mL无672.复发酵试验

阳性管接到EC培养液中。在37℃温度下培养24h±2h，立即观察，发酵管产气则证实为大肠菌群阳性

3.计算和报告结果

查MPN表，按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值

水源水大肠菌群的测定themegalleryCompanyLogo2.复发酵试验阳性管接到EC培养液中。在37℃温度下培养268检测操作方法检品取样培养基配制灭菌与消毒接种培养与计数themegalleryCompanyLogo检测操作方法检品取样培养基配制灭菌与消毒接种培养与计数the69检品取样1.水体取样：应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。2.自来水取样：打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用烧杯接取自来水。themegalleryCompanyLogo检品取样1.水体取样：themegalleryCompany703.将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。

注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。

检品取样themegalleryCompanyLogo3.将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连71或者是品红亚硫酸钠培养基。生长特征菌落。发酵（产酸产气）EC肉汤配方：胰蛋白胨20g/l乳糖5g/l3号胆盐1.5g/lK2HPO44g/lKH2PO41.5g/lNaCl5g/lpH：7.0初发酵（产酸产气）EC肉汤伊红美兰培养基3倍EC肉汤培养基配制themegalleryCompanyLogo或者是品红亚硫酸钠培养基。生长特征菌落。发酵（产酸产气）初发72品红亚硫酸钠培养基（EndoAgar）（远藤琼脂培养基）themegalleryCompanyLogo品红亚硫酸钠培养基（EndoAgar）（远藤琼脂培养基）t73品红亚硫酸钠培养基平板及典型菌落themegalleryCompanyLogo品红亚硫酸钠培养基平板及典型菌落themegalleryCo74伊红美蓝培养基

蛋白胨10g

乳糖10g

磷酸氢二钾2g

琼脂20~30g

蒸馏水1000ml

2%伊红水溶液20ml

0.5%美蓝水溶液13mlthemegalleryCompanyLogo伊红美蓝培养基蛋白胨10g

themegalleryC75灭菌与消毒灭菌1.无菌操作中需要用到的器具需灭菌，如取样瓶、培养皿、涂布棒等；2.培养基需灭菌；3.无菌水需灭菌。消毒1.接种前，空气环境需紫外线消毒；2.无菌操作时，手需酒精消毒themegalleryCompanyLogo灭菌与消毒灭菌1.无菌操作中需要用到的器具需灭菌，如取样瓶、761.加热已经配制好的固体培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，待其冷却后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。5.倒置于37度培养箱中培养24h。涂布平板接种法：themegalleryCompanyLogo1.加热已经配制好的固体培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基），使77涂布平板接种法：themegalleryCompanyLogo涂布平板接种法：themegalleryCompanyLo78

1.挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。

2.选择平均菌落数在30-300之间的平板来计算该水样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30-300范围之内，则取最靠近30-300的平板进行计数

3.如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30-300范围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两值的平均值。菌落计数themegalleryCompanyLogo菌落计数themegalleryCompanyLogo79themegalleryCompanyLogothemegalleryCompanyLogo8010-110-210-3细菌总数（个/mL)156215213246822640261321856无法计数354731928104无法计数30312试一试

themegalleryCompanyLogo10-110-210-3细菌总数1562152132468281例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数/CFU·mL-1报告方式/CFU·mL-110-110-210-3123456136527602890无法计算27无法计算164295271165011305204660513512－1.62.2－－－1640037750271005130002703050016000或1.6×10438000或3.8×10427000或2.7×104510000或5.1×105270或2.7×10231000或3.1×104计算和报告计数结果

themegalleryCompanyLogo例次两个稀释度菌落总数/CFU·mL-1报告方式/CFU·82计算根据证实有大肠菌群存在的阳性发酵管，查MPN检索表，求出每100ml水样中的大肠菌群数。MPN表见P192themegalleryCompanyLogo计算根据证实有大肠菌群存在的阳性发酵管，查MPN检索表，求出83大肠菌群测定

——国家标准采用三步法

大肠菌群

——需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

乳糖发酵试验分离培养证实试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。

根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查M