经典课件：分子分型在医院感染控制中的作用

分子分型在医院感染控制中的作用

（theRoleofMolecularTypinginNosocomialInfectionControl）瑞金医院临床微生物科瑞金医院医院感染办公室杨莉1.分子分型在医院感染控制中的作用

（theRoleofM分子分型（分子流行病学研究）从核酸分子水平上分析医院感染的发生、发展规律及机理，更加准确有效地进行医院感染管理控制，已成为当前国际医院感染管理研究中的重要方向。从患者分离株到病区周围环境株的比较分析；从外源性感染到内源性感染从某一医院的医院感染暴发到大范围甚至世界范围的感染菌株流行变迁；基因多态性分析技术已成为医院感染监测控制的高水平研究领域。2.分子分型（分子流行病学研究）从核酸分子水平上分析医院感染的发微生物室在医院感染中的作用accuratelyidentifyingnosocomialpathogensdetectingunexpectedantimicrobial-drugresistanceepidemiologictypingPfallerMAetal.Theclinicalmicrobiologylaboratoryandinfectioncontrol:emergingpathogens,antimicrobialresistance,andnewtechnology.ClinInfectDis1997;25:858-70.鉴定特殊耐药菌的检出流行病学分型3.微生物室在医院感染中的作用accuratelyidentiPFGE(脉冲场凝胶电泳)RAPD(随机扩增DNA多态性)REA(限制性酶切)ribotyping(核糖体分型)分子分型基因分型分子流行病学研究4.PFGE(脉冲场凝胶电泳)分子分型4.1、脉冲场凝胶电泳(PFGE)制备琼脂糖栓块消化酶切脉冲电泳结果解释5.1、脉冲场凝胶电泳(PFGE)制备琼脂糖栓块消化酶消化、释放出DNAPFGE原理6.消化、释放出DNAPFGE原理6.Enzyme酶切PFGE原理约5～20个、长度10～800kb的大片段DNA7.Enzyme酶切PFGE原理约5～20个、长度10～800kTenoverFC.etal.JClinMicrobiol,1995;33(9):2233～2239

8.TenoverFC.etal.JClinMicrob脉冲电泳PFGE原理9.脉冲电泳PFGE原理9.原理：DNA常规凝胶电泳脉冲场凝胶电泳10.原理：DNA常规凝胶电泳脉冲场凝胶电泳10.时间消耗从分离菌株到出结果平均2.5天标本准备、细胞裂解－－第一天酶切－－第二天染色、拍照－－第三天PFGE原理染色、拍照11.时间消耗PFGE原理染色、拍照11.12.12.PFGE结果判读目测法：按美国疾病控制和预防中心(CDC)Tenover等人推荐的方法判读。图谱完全相同的定为一个型，彼此之间相差一个带的定为同一型的不同亚型，相差2－3个带的认为亲缘关系密切，相差4－6个带的认为可能相关，条带相差7个以上的认为无亲缘关系。并随机地选择不同的字母如A、B、C、D等的字母顺序分型。聚类分析计算机输入SPSS，做树状图13.PFGE结果判读目测法：13.PFGE同源性分析14.PFGE同源性分析14.PFGE特点：DNA原位提取法，减少了断裂利用细菌全基因组信息细菌分型金标准15.PFGE特点：DNA原位提取法，减少了断裂15.2、RAPD（随机扩增DNA多态性）1990年Williams：RAPDWelsh：AP-PCR本质上相同引物：“短”、“单一”和“非特异性”，一般9～10bp

扩增条件：“非严格性”

退火温度一般较低,25～35℃

16.2、RAPD（随机扩增DNA多态性）1990年引物：16.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

17.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

18.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

19.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.分子分型在医院感染控制中的作用20.分子分型在医院感染控制中的作用20.SpecialIssueNewTechnologyforDetectingMultidrug-ResistantPathogensintheClinicalMicrobiologyLaboratoryLanceR.Peterson*†andGaryA.Noskin*†

*NorthwesternMemorialHospitaland†NorthwesternUniversityMedicalSchool,Chicago,Illinois,USAEID,2001,7:30621.SpecialIssueEID,2001,21.NorthwesternMemorialHospital,Chicago700-bed,university-affiliatedmedicalcenter出院：>39,000/年急诊：56,000例/年门诊量：260,000/年

22.NorthwesternMemorialHospital分型确认后及干预效果P=0.002LRPetersonetal,EID,2001,7:3065.7923.分型确认后及干预效果P=0.002LRPeterson5.指标thetotalnumberofnosocomialinfectionsper1,000patientdays每千住院日医院感染数thenumberofpatientswithnosocomialinfectionsper100patientdischarges每100出院病人医院感染病人数(percentageofpatientswithnosocomialinfection)（医院感染病人百分比）24.指标thetotalnumberofnosocomi感染控制工作小组成员：Weformedapermanent,integratedinfectioncontrolandpreventionprogramthatfullyincorporatesHacekDMetal.AmJClinPathol1999;111:647-54.infectioncontrolpersonnel,infectiousdiseasepersonnel,pharmacypersonnel,clinicalmicrobiologypersonnelintoasingleworkinggrouptominimizehospitalinfections.感染控制感染性疾病药学临床微生物25.感染控制工作小组成员：Weformedapermane资料收集方法（Methodsfordatacollection）：reviewofmicrobiologyreportsreviewofpatients'medicalrecords,directobservationofmedicalandnursingpractice,activesurveillanceofrectalculturesofpatientsinnursingunitsforhigh-riskpatients,evaluationofsuspectednosocomialinfectionsreportedbyhealth-careproviders.查阅微生物报告查阅病史记录对医护人员操作的直接观察高危病人直肠培养的动态连续观察对上报的可疑医院感染的评估鉴定由三位专职感染控制人员对资料进行汇总分析，并制定出相应控制措施，并在医院感染控制和预防部门主管的指导下实施。26.资料收集方法（MethodsfordatacollecTwointerventions：amoleculartypinglaboratoryaweeklyplanningmeetinginfectioncontroldiagnosticmedicalmicrobiology(molecularepidemiology)Pharmacyandinfectiousdiseases两个主要的干预措施：分子分型周会包括以下方面的代表：感染控制微生物诊断（分子流行病学）药学感染性疾病27.Twointerventions：两个主要的干预措施：27周会内容：医院感染动向（短期、长期）感染控制专职人员和微生物实验室的工作决定需要做的调整需分型的病原体与主管讨论决定weeklymeetings：theongoingshort-andlong-termtrendsinnosocomialinfectionswithinthecenteractivitiesoftheinfectioncontrolprofessionalsandmicrobiologylaboratorypersonnel;anyneededchangesweredetermined.Theorganizationalstructureforselectingmicrobesfortypingwassharedbythemedicaldirectorsofinfectioncontrolandclinicalmicrobiology28.周会内容：weeklymeetings：28.需基因分型的微生物：routinelygenomicallytyped：VREPeriodicroutinetyping：fluoroquinolone-resistantP.aeruginosa,methicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA),

Enterobactercloacae,

Clostridiumdifficile

Additionalorganismsfortyping：selectedthroughsurveillanceofmicrobiologyculturereportsdiscussedattheweeklymeeting.常规基因分型：VRE周期性分型：氟喹诺酮耐药的铜绿MRSA阴沟肠杆菌难辨梭菌其他：根据微生物报告并在周会上讨论后决定需基因分型的病原体

任何时候工作小组要求进行基因分型，临床微生物实验室即将菌株提供给分子分型部门并执行29.需基因分型的微生物：routinelygenomicall实验方法REAanalysisrestrictionofgenomicDNAwithconventionalelectrophoresisDNA限制性酶切30.实验方法REAanalysis30.基因分型相关费用thecostofequipment,remodeling,reagentandothersupplies,salariesandbenefitsforthreetechnologists,plusalltheinstitutionalassessments(e.g.,full-costbasis)requiredtooperateahospitallaboratory.仪器配制及维修、实验室改造等；试剂及其他消耗品三位实验员的薪水所有的评估分析（如full-costbasis）需要动用全院系统分析方法：t检验成本-效益分析（AnalysisofCostData）31.基因分型相关费用thecostofequipment,结果：1、VREinitialimpetus:seriousnosocomialproblem---VRE'semergencemoleculartypingresults:apatternofnumerous“mini”patient-to-patientoutbreaksofdistinctclonesratherthanthespreadofasinglepersistingstrain

1、VRE最初调查：VRE医院感染严重分型结果提示：多型别、小规模（mini）病人间流行而不是一个型别的流行32.结果：1、VRE1、VRE32.genomictyping:patient-to-patienttransmission;nosocomialoutbreak;littleevidenceofhorizontalspreadUsingthisinformation,wedeterminedwhatinterventionwaslikelytocontrolanapparentoutbreak(20).结果：基因分型：可将可能的医院感染分组：病人之间交叉感染(highconality,>90%)感染爆发(moderateclonality,35%-75%)无水平传播(<20%clonality).

在此基础上，决定采取哪种控制措施33.genomictyping:结果：基因分型：可将可能的医院highconality,>90%likelypatient-to-patienttransmissionmoderateclonality,35%-75%possiblynosocomialoutbreakclonality,<20%unlikelylittleevidenceofhorizontalspreadsimilarity34.highconality,>90%likelypatiDuringthelast2yearsofthisstudy,25possiblemicrobialoutbreakswereinvestigatedbythetypinglaboratoryVRE,fluoroquinolone-resistantP.aeruginosa,MRSA,E.cloacae,

C.difficile.通过基因分型，共鉴别25起微生物感染爆发VRE氟喹诺酮耐药的铜绿MRSA阴沟难辩梭菌35.Duringthelast2yearsofthiClassicSpreadofNosocomialInfectionVRE:19strains,from16patients,ina2-monthperiod;14strains:fromoneoftwoclones(88%)Indicating:ahighprobabilityofnosocomialspread

Review:microbiologylaboratory:culturerequisitions---noclosecontact.Patients:existingdirectconnectionbetween11/14patients(14).infectioncontrolpractices:abortedtheoutbreak典型的医院感染传播VRE:19株,来自16个病人，2个月时间内;其中十四株：为两个型别中的一个型别(88%)高度提示感染传播

检查分析:微生物实验室:培养过程无密切联系患者：14人中有11人有直接联系感染控制：中止暴发36.ClassicSpreadofNosocomialIModerateLikelihoodofSpreadofNosocomialInfectionsDuringa1-monthperiod,inaspecial-careunitinvasiveinfections,causedbyfiveisolatesKlebsiellapneumoniae,S.epidermidis,andS.hemolyticus

DNAtypingindicated40%to60%foreachofthebacterialspecies.patientswithgeneticallyidenticalorganismsoccupiedadjacentbeds.

Erectingabarrierontheunit,alongwitheducatingmedicalstaff,haltedthespreadoftheseinfections(15).较有可能为NI传播1个月时间内，特殊病房侵入性操作感染：肺炎克雷伯菌表皮葡萄球菌溶血葡萄球菌

40%-60%clonality分析：分离出相同型别菌株的患者病床临近措施：病房设立屏障医护人员教育结果：感染中止37.ModerateLikelihoodofSpreadOutbreaksnotCausedbyPatient-to-PatientSpreadSuspectedoutbreaksconsistingoffourisolatesofK.pneumoniaand64strainsofSerratiamarcescenswereinvestigatedintheICUsoftwohospitals.Bothinvestigationsshowed21%clonality,indicatingunlikelypatient-to-patientspread.Investigationsuggestedsuboptimalhandlingofventilatorequipment,andbothoutbreakswerestoppedbyretrainingofpersonnelusingthisequipment2个医院的ICU病房4株肺克，64株粘质沙雷菌

21%clonality提示：非病人之间传播indicatingunlikelypatient-to-patientspread.调查分析：机械通气相关操作不规范措施：规范操作结果：感染中止38.OutbreaksnotCausedbyPatienPseudooutbreaksPossibleoutbreaksoccurredinthespecial-carenurseryunitsoftwohospitals,eachofwhichhaditsownmoleculartypingsection.sevenS.aureusstrains,andtheotheroffourisolatesofgram-negativebacilli.immediatelytypedandno(20%)clonalityexisted.Nointerventionswereinstituted,andtheapparentoutbreaksweredeterminedtobenormalvariationininfections(15,21).avoidedculture-basedsurveillanceinvestigationofstaffbythestatedepartmentofhealth,andtheotheravoidedclosingtheunitfora30-dayfulldisinfectionandcleaning(doneinprevioussuspectedoutbreaks).2个医院，特殊护理病房，每个医院都有自己的分子分型部门7株金葡迅速分子分型rapidtypingno(20%)clonality没有采取措施节省：医护人员携菌情况调查（培养）关闭病房30天，消毒、清洁4株G-菌39.Pseudooutbreaks2个医院，特殊护理病房，每个医分型确认后及干预效果P=0.000006LRPetersonetal,EID,2001,7:30640.分型确认后及干预效果P=0.000006LRPeterso分型确认后及干预效果P=0.002LRPetersonetal,EID,2001,7:3065.7941.分型确认后及干预效果P=0.002LRPeterson5.nosocomialinfection:3.3%-2.6%(nationalrate:4.4%-5%)>1,400fewerpatientsacquiredinfectionsduringthistime,avertingmorethan50expecteddeathsEvenwithendemicVRE,mostofouroutbreaksinvolvethreeorfewerpatients(19).医院感染：3.3%下降至2.6%(全国医院感染率：4.4%-5%)减少>1,400的病人感染死亡：减少了>50VRE：涉及的病人也比其他医院少42.nosocomialinfection:3.3%-2.6成本Themeannumberofpatientswithnosocomialinfectionsdecreasedby283peryear,areductionofmorethan1,100inpatientdays.Thecostsavoidedbyusingthiscalculationaveragedmorethan$2,150,000/year,basedon1999dollars.医院感染患者数量平均每年下降283，住院天数下降超过1100天因此节省的费用平均每年超过$2,150,000（与1999年相比）43.成本ThemeannumberofpatientsRepresentativesnowmeettogetherfor45minuteseachweekForMicrobiology,openingthetypinglaboratorytotaled$180,050.Bythefifthyear,costsinthelaboratorysectionwerestable.Thecostforthelaboratory,includngthreemedicaltechnologists,is$400,000yearly.Virtuallyallthesecostsarebornebythehospital.小组聚会逐渐转为每周开会，45min，讨论微生物室成立分子分型实验室（设备及人员）的费用为$180,050.每年分子分型相关支出为$400,000医院承担44.RepresentativesnowmeettogetWhilesuchagrantprogramwouldcostupto$2billioneachyearifallU.S.hospitalsparticipated,theprojectedreductionincostoftreatingnosocomialinfectionscouldreachoverfivetimesthatamount.asavingsof$5.00foreachdollarspent.假设：美国所有医院进行基因分型相关费用达到20亿美元节省下来的治疗医院感染的费用将超过5倍（100亿）！每使用1美元节省5美元45.WhilesuchagrantprogramwouTypingtime:within1week48hours.Lackofclonality:suggestsotherreasonsfortheapparentoutbreak,antimicrobial-agentusepressure,failureofappropriatenursing-carepractices,orsimplyrandomvariationinthenumberofinfections.Earlyknowledgeofwhethermicrobialclonalityispresentorabsentfocusesthescopeofaninvestigationandfacilitatesappropriateintervention.时间：1周，48h如没有流行相关线索，可能是其他原因：抗生素压力,护理操作不当（非感染相关）,仅仅是感染数量的随机变化早发现、及早确定调查范围、采取合适的干预措施46.Typingtime:within1week时间：costofrapiddetectionusingthepolymerasechainreaction(PCR)

=onedayofgloveisolationcouldbecompletedinasingle8-hourworkday.Asgenechiptechnologymovesintoclinicaluse,detectingalargenumberofresistancedeterminantssoonafterapatientisadmittedtothehospitalshouldbepossible.PCR

分型费用=一天的手套费用8小时的工作时间内可完成基因芯片：大规模耐药监测病人入院后即实施47.costofrapiddetectionusing分子分型在医院感染中的应用：technicallypossiblemedicallyusefuleconomicallyjustified48.分子分型在医院感染中的应用：technicallyposs医院感染的分子流行病学研究方法分子流行病学方法在医院感染中的应用医院感染控制的人员安排成本-效益研究临床医院感染控制科研49.医院感染的分子流行病学研究方法临床医院感染控制49.实验研究：瑞金医院04年～05年全耐药鲍曼不动杆菌（PRAB）各个科室的突然增多经脉冲场凝胶电泳（PFGE）证实烧伤科为单独一个型别PRAB科室内流行除烧伤科以外的其他科室为科室间同一型别PRAB流行。由此可见，分子流行病学方法：为医院感染控制提供准确的实验数据有效判断感染来源和流行趋势为更好的做好医院感染控制工作打下了基础。50.实验研究：瑞金医院04年～05年50.ThankYou51.ThankYou51.个人观点供参考，欢迎讨论个人观点供参考，欢迎讨论分子分型在医院感染控制中的作用

（theRoleofMolecularTypinginNosocomialInfectionControl）瑞金医院临床微生物科瑞金医院医院感染办公室杨莉53.分子分型在医院感染控制中的作用

（theRoleofM分子分型（分子流行病学研究）从核酸分子水平上分析医院感染的发生、发展规律及机理，更加准确有效地进行医院感染管理控制，已成为当前国际医院感染管理研究中的重要方向。从患者分离株到病区周围环境株的比较分析；从外源性感染到内源性感染从某一医院的医院感染暴发到大范围甚至世界范围的感染菌株流行变迁；基因多态性分析技术已成为医院感染监测控制的高水平研究领域。54.分子分型（分子流行病学研究）从核酸分子水平上分析医院感染的发微生物室在医院感染中的作用accuratelyidentifyingnosocomialpathogensdetectingunexpectedantimicrobial-drugresistanceepidemiologictypingPfallerMAetal.Theclinicalmicrobiologylaboratoryandinfectioncontrol:emergingpathogens,antimicrobialresistance,andnewtechnology.ClinInfectDis1997;25:858-70.鉴定特殊耐药菌的检出流行病学分型55.微生物室在医院感染中的作用accuratelyidentiPFGE(脉冲场凝胶电泳)RAPD(随机扩增DNA多态性)REA(限制性酶切)ribotyping(核糖体分型)分子分型基因分型分子流行病学研究56.PFGE(脉冲场凝胶电泳)分子分型4.1、脉冲场凝胶电泳(PFGE)制备琼脂糖栓块消化酶切脉冲电泳结果解释57.1、脉冲场凝胶电泳(PFGE)制备琼脂糖栓块消化酶消化、释放出DNAPFGE原理58.消化、释放出DNAPFGE原理6.Enzyme酶切PFGE原理约5～20个、长度10～800kb的大片段DNA59.Enzyme酶切PFGE原理约5～20个、长度10～800kTenoverFC.etal.JClinMicrobiol,1995;33(9):2233～2239

60.TenoverFC.etal.JClinMicrob脉冲电泳PFGE原理61.脉冲电泳PFGE原理9.原理：DNA常规凝胶电泳脉冲场凝胶电泳62.原理：DNA常规凝胶电泳脉冲场凝胶电泳10.时间消耗从分离菌株到出结果平均2.5天标本准备、细胞裂解－－第一天酶切－－第二天染色、拍照－－第三天PFGE原理染色、拍照63.时间消耗PFGE原理染色、拍照11.64.12.PFGE结果判读目测法：按美国疾病控制和预防中心(CDC)Tenover等人推荐的方法判读。图谱完全相同的定为一个型，彼此之间相差一个带的定为同一型的不同亚型，相差2－3个带的认为亲缘关系密切，相差4－6个带的认为可能相关，条带相差7个以上的认为无亲缘关系。并随机地选择不同的字母如A、B、C、D等的字母顺序分型。聚类分析计算机输入SPSS，做树状图65.PFGE结果判读目测法：13.PFGE同源性分析66.PFGE同源性分析14.PFGE特点：DNA原位提取法，减少了断裂利用细菌全基因组信息细菌分型金标准67.PFGE特点：DNA原位提取法，减少了断裂15.2、RAPD（随机扩增DNA多态性）1990年Williams：RAPDWelsh：AP-PCR本质上相同引物：“短”、“单一”和“非特异性”，一般9～10bp

扩增条件：“非严格性”

退火温度一般较低,25～35℃

68.2、RAPD（随机扩增DNA多态性）1990年引物：16.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

69.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

70.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.JClinMicrobiol,1996;34(5):1129～1135

71.ESHWARMAHENTHIRALINGAM.etal.分子分型在医院感染控制中的作用72.分子分型在医院感染控制中的作用20.SpecialIssueNewTechnologyforDetectingMultidrug-ResistantPathogensintheClinicalMicrobiologyLaboratoryLanceR.Peterson*†andGaryA.Noskin*†

*NorthwesternMemorialHospitaland†NorthwesternUniversityMedicalSchool,Chicago,Illinois,USAEID,2001,7:30673.SpecialIssueEID,2001,21.NorthwesternMemorialHospital,Chicago700-bed,university-affiliatedmedicalcenter出院：>39,000/年急诊：56,000例/年门诊量：260,000/年

74.NorthwesternMemorialHospital分型确认后及干预效果P=0.002LRPetersonetal,EID,2001,7:3065.7975.分型确认后及干预效果P=0.002LRPeterson5.指标thetotalnumberofnosocomialinfectionsper1,000patientdays每千住院日医院感染数thenumberofpatientswithnosocomialinfectionsper100patientdischarges每100出院病人医院感染病人数(percentageofpatientswithnosocomialinfection)（医院感染病人百分比）76.指标thetotalnumberofnosocomi感染控制工作小组成员：Weformedapermanent,integratedinfectioncontrolandpreventionprogramthatfullyincorporatesHacekDMetal.AmJClinPathol1999;111:647-54.infectioncontrolpersonnel,infectiousdiseasepersonnel,pharmacypersonnel,clinicalmicrobiologypersonnelintoasingleworkinggrouptominimizehospitalinfections.感染控制感染性疾病药学临床微生物77.感染控制工作小组成员：Weformedapermane资料收集方法（Methodsfordatacollection）：reviewofmicrobiologyreportsreviewofpatients'medicalrecords,directobservationofmedicalandnursingpractice,activesurveillanceofrectalculturesofpatientsinnursingunitsforhigh-riskpatients,evaluationofsuspectednosocomialinfectionsreportedbyhealth-careproviders.查阅微生物报告查阅病史记录对医护人员操作的直接观察高危病人直肠培养的动态连续观察对上报的可疑医院感染的评估鉴定由三位专职感染控制人员对资料进行汇总分析，并制定出相应控制措施，并在医院感染控制和预防部门主管的指导下实施。78.资料收集方法（MethodsfordatacollecTwointerventions：amoleculartypinglaboratoryaweeklyplanningmeetinginfectioncontroldiagnosticmedicalmicrobiology(molecularepidemiology)Pharmacyandinfectiousdiseases两个主要的干预措施：分子分型周会包括以下方面的代表：感染控制微生物诊断（分子流行病学）药学感染性疾病79.Twointerventions：两个主要的干预措施：27周会内容：医院感染动向（短期、长期）感染控制专职人员和微生物实验室的工作决定需要做的调整需分型的病原体与主管讨论决定weeklymeetings：theongoingshort-andlong-termtrendsinnosocomialinfectionswithinthecenteractivitiesoftheinfectioncontrolprofessionalsandmicrobiologylaboratorypersonnel;anyneededchangesweredetermined.Theorganizationalstructureforselectingmicrobesfortypingwassharedbythemedicaldirectorsofinfectioncontrolandclinicalmicrobiology80.周会内容：weeklymeetings：28.需基因分型的微生物：routinelygenomicallytyped：VREPeriodicroutinetyping：fluoroquinolone-resistantP.aeruginosa,methicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA),

Enterobactercloacae,

Clostridiumdifficile

Additionalorganismsfortyping：selectedthroughsurveillanceofmicrobiologyculturereportsdiscussedattheweeklymeeting.常规基因分型：VRE周期性分型：氟喹诺酮耐药的铜绿MRSA阴沟肠杆菌难辨梭菌其他：根据微生物报告并在周会上讨论后决定需基因分型的病原体

任何时候工作小组要求进行基因分型，临床微生物实验室即将菌株提供给分子分型部门并执行81.需基因分型的微生物：routinelygenomicall实验方法REAanalysisrestrictionofgenomicDNAwithconventionalelectrophoresisDNA限制性酶切82.实验方法REAanalysis30.基因分型相关费用thecostofequipment,remodeling,reagentandothersupplies,salariesandbenefitsforthreetechnologists,plusalltheinstitutionalassessments(e.g.,full-costbasis)requiredtooperateahospitallaboratory.仪器配制及维修、实验室改造等；试剂及其他消耗品三位实验员的薪水所有的评估分析（如full-costbasis）需要动用全院系统分析方法：t检验成本-效益分析（AnalysisofCostData）83.基因分型相关费用thecostofequipment,结果：1、VREinitialimpetus:seriousnosocomialproblem---VRE'semergencemoleculartypingresults:apatternofnumerous“mini”patient-to-patientoutbreaksofdistinctclonesratherthanthespreadofasinglepersistingstrain

1、VRE最初调查：VRE医院感染严重分型结果提示：多型别、小规模（mini）病人间流行而不是一个型别的流行84.结果：1、VRE1、VRE32.genomictyping:patient-to-patienttransmission;nosocomialoutbreak;littleevidenceofhorizontalspreadUsingthisinformation,wedeterminedwhatinterventionwaslikelytocontrolanapparentoutbreak(20).结果：基因分型：可将可能的医院感染分组：病人之间交叉感染(highconality,>90%)感染爆发(moderateclonality,35%-75%)无水平传播(<20%clonality).

在此基础上，决定采取哪种控制措施85.genomictyping:结果：基因分型：可将可能的医院highconality,>90%likelypatient-to-patienttransmissionmoderateclonality,35%-75%possiblynosocomialoutbreakclonality,<20%unlikelylittleevidenceofhorizontalspreadsimilarity86.highconality,>90%likelypatiDuringthelast2yearsofthisstudy,25possiblemicrobialoutbreakswereinvestigatedbythetypinglaboratoryVRE,fluoroquinolone-resistantP.aeruginosa,MRSA,E.cloacae,

C.difficile.通过基因分型，共鉴别25起微生物感染爆发VRE氟喹诺酮耐药的铜绿MRSA阴沟难辩梭菌87.Duringthelast2yearsofthiClassicSpreadofNosocomialInfectionVRE:19strains,from16patients,ina2-monthperiod;14strains:fromoneoftwoclones(88%)Indicating:ahighprobabilityofnosocomialspread

Review:microbiologylaboratory:culturerequisitions---noclosecontact.Patients:existingdirectconnectionbetween11/14patients(14).infectioncontrolpractices:abortedtheoutbreak典型的医院感染传播VRE:19株,来自16个病人，2个月时间内;其中十四株：为两个型别中的一个型别(88%)高度提示感染传播

检查分析:微生物实验室:培养过程无密切联系患者：14人中有11人有直接联系感染控制：中止暴发88.ClassicSpreadofNosocomialIModerateLikelihoodofSpreadofNosocomialInfectionsDuringa1-monthperiod,inaspecial-careunitinvasiveinfections,causedbyfiveisolatesKlebsiellapneumoniae,S.epidermidis,andS.hemolyticus

DNAtypingindicated40%to60%foreachofthebacterialspecies.patientswithgeneticallyidenticalorganismsoccupiedadjacentbeds.

Erectingabarrierontheunit,alongwitheducatingmedicalstaff,haltedthespreadoftheseinfections(15).较有可能为NI传播1个月时间内，特殊病房侵入性操作感染：肺炎克雷伯菌表皮葡萄球菌溶血葡萄球菌

40%-60%clonality分析：分离出相同型别菌株的患者病床临近措施：病房设立屏障医护人员教育结果：感染中止89.ModerateLikelihoodofSpreadOutbreaksnotCausedbyPatient-to-PatientSpreadSuspectedoutbreaksconsistingoffourisolatesofK.pneumoniaand64strainsofSerratiamarcescenswereinvestigatedintheICUsoftwohospitals.Bothinvestigationsshowed21%clonality,indicatingunlikelypatient-to-patientspread.Investigationsuggestedsuboptimalhandlingofventilatorequipment,andbothoutbreakswerestoppedbyretrainingofpersonnelusingthisequipment2个医院的ICU病房4株肺克，64株粘质沙雷菌

21%clonality提示：非病人之间传播indicatingunlikelypatient-to-patientspread.调查分析：机械通气相关操作不规范措施：规范操作结果：感染中止90.OutbreaksnotCausedbyPatienPseudooutbreaksPossibleoutbreaksoccurredinthespecial-carenurseryunitsoftwohospitals,eachofwhichhaditsownmoleculartypingsection.sevenS.aureusstrains,andtheotheroffourisolatesofgram-negativebacilli.immediatelytypedandno(20%)clonalityexisted.Nointerventionswereinstituted,andtheapparentoutbreaksweredeterminedtobenormalvariationininfections(15,21).avoidedculture-basedsurveillanceinvestigationofstaffbythestatedepartmentofhealth,andtheotheravoidedclosingtheunitfora30-dayfulldisinfectionandcleaning(doneinprevioussuspectedoutbreaks).2个医院，特殊护理病房，每个医院都有自己的分子分型部门7株金葡迅速分子分型rapidtypingno(20%)clonality没有采取措施节省：医护人员携菌情况调查（培养）关闭病房30天，消毒、清洁4株G-菌91.Pseudooutbreaks2个医院，特殊护理病房，每个医分型确认后及干预效果P=0.000006LRPetersonetal,EID,2001,7:30692.分型确认后及干预效果P=0.000006LRPeterso分型确认后及干预效果P=0.002LRPetersonetal,EID,2001,7:3065.7993.分型确认后及干预效果P=0.002LRPeterson5.nosocomialinfection:3.3%-2.6%(nationalrate:4.4%-5%)>1,400fewerpatientsacquiredinfectionsduringthistime,avertingmorethan50expecteddeathsEvenwithendemicVRE,mostofouroutbreaksinvolvethreeorfewerpatients(19).医院感染：3.3%下降至2.6%(全国医院感染率：4.4%-5%)减少>1,400的病人感染死亡：减少了>50VRE：涉及的病人也比其他医院少94.nosocomialinfection:3.3%-2.6成本Themeannumberofpatientswithnosocomialinfectionsdecreasedby283