HILIC适合分析系列极性化合物

1什么是HILIC?流动相强度有强到弱：高比例水高比例有机相。同反相色谱相反。适合范围：HILIC适合分析系列极性化合物酸和碱有机和无机离子氨基酸多肽蛋白质第1页/共15页2离子色谱（IC）正相色谱（NPC）反相色谱（RPC）HILIC与其他色谱的独到之处HILIC是常规的极性色谱的反相色谱HILIC与正相和反相色谱具有相反的出峰顺序第2页/共15页3适合HILIC分析样品的官能团第3页/共15页4HILIC应用-有机酸Column:EC125/4.0NUCLEODUR100-3HILICEluent:AcN/200mMNH4AcpH6.8(70:30)Flowrate:1.0ml/minPressure:118barTemperature:25°CDetection:UV_220nmInjectionvolume:0,5µl:0,01,02,03,04,05,06,07,08,09,010,0-5,010,020,030,040,050,060,070,0ORGANISCHESÄUREN#19[modifiedbyuser]UV_VIS_1mAUminWVL:220nm富马酸草酸柠檬酸第4页/共15页5脱氢抗坏血酸，抗坏血酸的分离Column:EC250/4NUCLEODUR100-5HILICEluent:AcN/100mMAmmoniumAcetate(70:30)Flowrate:1.0ml/minTemperature:25°CDetection:UV_240nmPressure:60bar脱氢抗坏血酸抗坏血酸第5页/共15页6嘧啶和嘌呤碱Column:EC125/4NUCLEODUR100-5HILICEluent:AcN/5mMNH4Ac(80:20)Flowrate:0.3ml/minPressure:15barTemperature:25°CDetection:UV_254nm:5-甲基脲嘧啶尿嘧啶腺嘌呤胞嘧啶鸟苷第6页/共15页7水溶性维生素0,02,04,06,08,010,013,0-1020406080100VitamineHilic#38[modifiedbydx_admin,2peaksmanuallyassigned]UV_VIS_1mAUmin烟酰胺VitaminB7VitaminB6VitaminC

VitaminB12VitaminB1WVL:254nm第7页/共15页8芳香族氨基酸和组胺Column:EC125/4NUCLEODUR100-3HILICEluent:AcN/100mMNH4AcpH4(75:25)Flowrate:1.0ml/minPressure:118barTemperature:25°CDetection:UV_218nmInjectionvolume:0,5µl:0,01,02,03,04,05,06,07,08,09,010,0-1002004006008001.000HISTIDIN#87[modifiedbyuser]PhenylalaninBetainsilaneIII,3µm125-4UV_VIS_1mAUmin1–苯丙氨酸2–苯甘氨酸3–酪氨酸4–组胺5–组氨酸WVL:218nm第8页/共15页9抑制细胞生长的药物5-氟脲嘧啶（5-FU）Column:EC125/4NUCLEODUR100-3HILICEluent:AcN/5mMNH4Ac(95:5)Flowrate:0,6ml/minTemperature:25°CDetection:UV_254nmPressure:42bar0,01,32,53,85,06,37,58,810,0-5001.0002.0003.0004.0005.0006.0005FU#11[modifiedbyuser,2peaksmanuallyassigned]UV_VIS_1mAUmin5-FluorouracilUracilWVL:254nm第9页/共15页10儿茶酚胺Column:EC250/4NUCLEODUR100-3HILICEluent:AcN/25mMNH4AcpH3(75:25)Flowrate:0.8ml/minTemperature:25°CInjectionvolume:5µlConcentration:30ng/µl0,02,04,06,08,010,012,015,0-50125250375500625800HilicCatecholamine#30[modifiedbydx_admin]UV_VIS_1mAUminWVL:218nm苯丙醇胺多巴胺肾上腺素左旋多巴第10页/共15页11HILIC色谱条件的优化

流动相的选择

梯度条件的设定

第11页/共15页12流动相的选择梯度洗脱：由高比例有机相高比例水相酸碱性样品在70%有机相（乙腈）的酸性流动相中保留最强提高有机相比例更适合质谱检测器HILIC使用高比例极性流动相，酸碱样品的出峰相对反相柱更对称。第12页/共15页13梯度条件的设定流动相条件的摸索：95%乙腈作为起始，最低60%乙腈至少5%的极性溶剂（水，甲醇）HILIC色谱柱溶剂从弱到强：四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水第13页/共15页14缓冲液为优化条件，使出峰时间更稳定，建议加入0.5%的10-20mM浓度缓冲液为质谱的检测:不建议使用磷酸盐20mM的甲酸铵，pH=3对大多数对大多数酸碱样品有良好的分离效果。常用起始条件，乙腈/5%-20mM甲酸铵不建议使用pH>6的缓冲液第14页/共15页15样品溶解的溶剂溶解样品的溶剂：

--尽可能高有机相比例，同流