ATP 含量检测试剂盒说明书-紫外分光光度法UPLC-MS-4576

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页ATP含量检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：UPLC-MS-4576规格：50T/48S

紫外分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体8mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×3支-20℃保存试剂五粉剂×1瓶2-8℃保存试剂六粉剂×3支-20℃保存标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：60℃水浴加热溶解即可，不影响使用。7mL蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；10.2mL蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃2周，避免反复冻融；3.2mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃4周，避免反复冻融；10.25mL蒸馏水备用，用不完的试剂-20℃2周，避免反复冻融；mgATP0.826mL10μmol/mLATP标准溶液，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；0.1的比例配制（2.6mL，约10T的量），现配现用。产品说明：ATPATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。HKATP6-6-NADPH，NADPH340nm有特征吸收峰，NADPHATPATP含量。Glucose6-PhosphateGlucose

HK Glucose6-Phosphate

Dehydrogenase(G-6-P-DH)

Gluconate-6-PhosphateATP ADP NADP+ NADPH技术指标：最低检出限：0.0023μmol/mL线性范围：0.0390625-2.5μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品：/1mL/冰和氯仿。操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1（浆ATP（浆（0.1mL血清（浆），加入1mL提取液），充分震荡，10000g，4℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。2ATP的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)1：5~10的比例（0.1g组织，加1mL提取液8000g4℃10minEP500μL的氯仿荡混匀，10000g4℃3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。3ATP（104个液体积（mL）500~1000：1的比例（5001mL提取液），超声波破碎（冰浴，功20%200W2s1s1mn）10000g410minEP的氯仿充分震荡混匀，10000g4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。注：以上提取过程严格控制在冰浴条件下进行。二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。2100μL10μmol/mLATP1.5mL0.625μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。）3、样本测定：试剂名称(μL)测定管标准管样本100-0.625μmol/mL标准液-100试剂一640640工作液26026010sA1A137℃（哺乳动物25℃（其他物种水浴锅/3min3min10sA2A2ΔA测定=A2测定-A1测定，ΔA标准=A2标准-A1标准。三、ATP含量计算1（浆）ATP含量计算ATP含量(μmol/mL)=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×（V提取+V血清（浆））÷V血清（浆）=6.875×ΔA测定÷ΔA标准2ATP含量计算按样本质量计算ATP含量（μmol/g质量）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W=0.625×ΔA测定÷ΔA标准÷W按细菌或细胞数量计算ATP含量(μmol/106cell）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷5=0.125×ΔA测定÷ΔA标准C0.625μol/mLV1m