最新抗生素类药物分析课件

抗生素类药物分析抗生素类药物分析第一节概述抗生素的定义抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。第一节概述抗生素的定义抗生素是细菌、2最新抗生素类药物分析课件3最新抗生素类药物分析课件4最新抗生素类药物分析课件5最新抗生素类药物分析课件6最新抗生素类药物分析课件7最新抗生素类药物分析课件8第二节β–内酰胺类抗生素

青霉素类第二节β–内酰胺类抗生素青霉素类9头孢菌素类头孢菌素类10青霉素（青霉素G、苄青霉素）青霉素（青霉素G、苄青霉素）11氨苄西林

（氨苄青霉素）氨苄西林

（氨苄青霉素）12阿莫西林

（羟氨苄青霉素）阿莫西林

（羟氨苄青霉素）13普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素14头孢氨苄头孢氨苄15头孢拉定头孢拉定16头孢羟氨苄头孢羟氨苄17头孢噻吩钠头孢噻吩钠18酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐

（一）羧基易溶于水

酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐（一）19与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素20（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液–18～–24°)头孢菌素类C6C7青霉素类C3C5C6

旋光性﹡﹡﹡﹡﹡（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液21

（三）共轭体系头孢菌素类母核有共轭体系

青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基

UV（三）共轭体系头孢菌素类22青霉素钠UV7-20青霉素钠UV7-2023最新抗生素类药物分析课件24（四）β–内酰胺环水溶液不稳定干燥纯净稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解（四）β–内酰胺环水溶液25（某些金属离子）（温度）某些氧化剂（某些金属离子）某些氧化剂26例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉27最新抗生素类药物分析课件28二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄色+醋酸氧铀锌→↓黄

Na+

焰色→紫色+0.1%四苯硼钠+Ac→↓白

K+二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄29（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色Fe3+/3H+（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色30H+Fe3+/3（红、棕、褐）H+Fe3+/3（红、棕、褐）312、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类2、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类323.茚三酮反应△α-氨基3.茚三酮反应△α-氨基33α-氨基、伯胺某些羟基胺类酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色α-氨基、伯胺酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色344.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键4.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键35蓝紫色蓝紫色365.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素阿莫西林氨苄西林△（分解）变色酸显色5.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素△（分解）37150℃（缩合）150℃（缩合）38（缩合）（缩合）396.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮6.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮40（偶合）（偶合）41最新抗生素类药物分析课件427.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应7.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应43（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或有机溶剂中溶解（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或442.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化-偶合反应芳伯氨基2.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化45普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素46最新抗生素类药物分析课件47（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺48mp三硝基苯酚mp三硝基苯酚49光谱法（四）1、UV法样品、分解产物Cu2+头孢氨苄λmax=262nm青霉素V钠A280nm/A264nm=1.30～1.50光谱法（四）1、UV法样品、分解产物Cu2+头孢氨苄50Cu2+pH3.8△Cu2+pH3.8△51最新抗生素类药物分析课件52氯唑青霉素3410.682双氯青霉素3420.653苯唑青霉素3391.328(nm)氯唑青霉素3410.532、IR法β-内酰胺环酰胺2、IR法β-内酰胺环酰胺543、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有不同的NMR光谱进行鉴别JP以吸收峰频率对峰强度进行作图主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律3、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有55硫酸庆大霉素NMR谱7-08硫酸庆大霉素NMR硫酸庆大霉素NMR谱7-08硫酸庆大霉素NMR56色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法57精密称取样品0.1009g，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)25.0ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处静置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.09863mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液(0.09863mol/L)13.80ml，并将滴定结果用空白试验校正，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液（0.09863mol/L）21.64ml。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。精密称取样品0.1009g，置250ml碘瓶中，58酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐

（一）羧基易溶于水

酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐（一）59与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素60（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液–18～–24°)头孢菌素类C6C7青霉素类C3C5C6

旋光性（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液61

（三）共轭体系头孢菌素类母核有共轭体系

青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基

UV（三）共轭体系头孢菌素类62青霉素钠UV7-20青霉素钠UV7-2063最新抗生素类药物分析课件64（四）β–内酰胺环水溶液不稳定干燥纯净稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解（四）β–内酰胺环水溶液65（某些金属离子）（温度）某些氧化剂（某些金属离子）某些氧化剂66例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉67(头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%)(头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%)68二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄色+醋酸氧铀锌→↓黄

Na+

焰色→紫色+0.1%四苯硼钠+Acˉ→↓白

K+二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄69（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色Fe3+/3H+（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色70H+Fe3+/3（红、棕、褐）H+Fe3+/3（红、棕、褐）71例：ChP(2000)头孢哌酮[鉴别]取本品10mg，加水2ml与盐酸羟胺溶液[取34.8%盐酸羟胺溶液1份，醋酸钠-氢氧化钠溶液1份，乙醇4份]3ml，振摇溶解后，放置5min，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。例：ChP(2000)头孢哌酮722、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类2、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类733.茚三酮反应△3.茚三酮反应△74α-氨基、伯胺某些羟基胺类酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色α-氨基、伯胺酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色754.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键4.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键76蓝紫色蓝紫色775.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素阿莫西林氨苄西林△（分解）变色酸显色5.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素△（分解）78150℃（缩合）150℃（缩合）79（缩合）（缩合）806.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮6.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮81（偶合）（偶合）82最新抗生素类药物分析课件837.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应7.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应84（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或有机溶剂中溶解（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或852.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化-偶合反应芳伯氨基2.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化86普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素87最新抗生素类药物分析课件88（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺89mp三硝基苯酚mp三硝基苯酚90光谱法（四）1、UV法样品、分解产物头孢氨苄λmax=262nm青霉素V钠A280nm/A264nm=1.30～1.50Cu2+光谱法（四）1、UV法样品、分解产物头孢氨苄λmax91Cu2+pH3.8△Cu2+pH3.8△92最新抗生素类药物分析课件93氯唑青霉素3410.682双氯青霉素3420.653苯唑青霉素3391.328(nm)氯唑青霉素3410.6942、IR法β-内酰胺环酰胺2、IR法β-内酰胺环酰胺953、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有不同的NMR光谱进行鉴别JP主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律3、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有96色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法97三、含量测定三、含量测定98（水解）碘量法（一）1.原理水解产物定量过量剩余β-内酰胺类ChP（水解）碘量法（一）1.原理水解产物定量过量剩余β-内酰胺类99反应分两步进行：1.水解反应(按化学计算量进行)2.氧化-还原反应(无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)反应分两步进行：100第一步第二步第一步第二步101例注射用普鲁卡因青霉素含量测定取装量差异项下的内容物，精密称取约0.12g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml放置20分钟，再加1mol/L盐酸溶液1ml与醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)5ml，精密加入碘滴定液(0.01mol/L)15ml，密塞，摇匀，在20～25℃暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，例注射用普鲁卡因青霉素含量测定取102至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并103V样空V样对照液+缓冲液+碘液+回滴+碱+酸+缓冲液+碘液+回滴V对空V对2.方法供试液+缓冲液+碘液+回滴+碱+酸+缓冲液+碘液+回滴V样空V样对照液+缓冲液+碘液+回滴V对空V对2.方法供试液104空白试验A、消除样品已降解产物的干扰B、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰C、消除碘挥发造成的误差以未经水解的样品作空白测定空白试验A、消除样品已降解产物的干扰以未经水解的样品作105空白样品I2Na2S2O3I-I2空白样品I2Na2S2O3I-I2106采用标准品平行对照测定A、可消除温度、pH、操作、环境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定法一致采用标准品平行对照测定A、可消除温度、pH、操作、环1073.条件（1）弱酸性pH4.5碱↑I2→IO3-+I-酸↑普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀（2）温度24～26℃温度＞38℃未水解的供试品亦消耗碘3.条件（1）弱酸性pH4.5碱↑I2108（3）水解时间以水解20分钟后的耗碘量最大（4）反应时间反应20分钟后，耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误差。（3）水解时间以水解20分钟后的耗碘量最大（4）反应时间反应109最新抗生素类药物分析课件1104.特点（1）灵敏度高样品:碘=1:8（2）反应条件、实验操作要求高V对、V对空V样、V样空1份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I2→8I-4.特点（1）灵敏度高样品:碘=1:8（2）1115.计算原料5.计算原料112汞量法（二）1.原理（水解）青霉素族ChP汞量法（二）1.原理（水解）青霉素族ChP1132.方法醋酸盐缓冲液pH4.6滴定水解pH4.6滴定样品以未经水解的样品作空白测定2.方法醋酸盐缓冲液pH4.6滴定水解pH4.6滴定样以未114例青霉素钠含量测定取本品约50mg，精密称定，加水5ml溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置15分钟，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸盐缓冲液(pH4.6)20ml及水20ml，摇匀，照电位滴定法(附录ⅦA),用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极为参比电极，在35～40℃，用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)缓慢滴定，例青霉素钠含量测定取本品115（控制滴定过程约为15分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相当于7.128mg的总青霉素(按C16H17N2NaO4S计算)。另取本品约0.5g，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上.（控制滴定过程约为15分钟），不计第116每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg的降解物（按C16H17N2NaO4S计算）。总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当1173、讨论（1）以第二次滴定突跃为终点电位法指示终点（2）反应摩尔比

1:1（3）空白试验消除已降解产物干扰（4）优点

不需标准品3、讨论（1）以第二次滴定突跃为终点（2）反应摩尔比1184、计算4、计算119精密称取含水量为0.5%的青霉素钠0.0502g，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。例青霉素钠含量测定精密称取含水量为0.5%的青霉素例青霉素120最新抗生素类药物分析课件121酸碱滴定法（三）1、原理△（钠盐）β-内酰胺类ChP酸碱滴定法（三）1、原理△（钠盐）β-内酰胺类ChP122△△1232、方法△中和中和2、方法△中和中和124例苯唑西林钠含量测定取本品约0.5g，精密称定，加新沸过的并用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和至酚酞指示液刚显红色的水20ml，使溶解,再用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和后，精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml，摇匀，置水浴中加热20分钟，注意避免吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚酞指示液1～2滴，用盐酸滴定液例苯唑西林钠含量测定取本125（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于40.14mgC19H19N3O5S。（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空1263、讨论（1）水解前先中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收CO2△不能使酚酞变红（3）空白试验校正(消除Na2CO3干扰)（4）特点简便快速不适用于有残留酯的产品3、讨论（1）水解前先中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收CO127最新抗生素类药物分析课件128（水解）可见-紫外分光光度法（四）1、酸水解法（铜盐法）（1）原理稳定剂JP青霉素族（水解）可见-紫外分光光度法（四）1、酸水解法（铜盐法）（1129最新抗生素类药物分析课件130（2）方法△（3）特点实验条件随各药物稳定性不同而定标准品对照法（2）方法△（3）特点实验条件随各药物稳定性不同而定标准品对131（4）计算（4）计算1322、硫醇汞盐法（1）原理（咪唑）青霉素族ChP2、硫醇汞盐法（1）原理（咪唑）青霉素族ChP133咪唑咪唑134（2）方法对照品法计算pH9（2）方法对照品法计算pH9135例氨苄西林钠含量测定取本品约60mg置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置另一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加硼酸缓冲液2.5ml与醋酐的乙腈溶液（1→50）0.25ml，放置5min后，加咪唑溶液至刻度，摇匀，置60℃水浴例氨苄西林钠含量测定取本品136中，加热30min，取出冷却，照分光光度法（附录ⅣA），在325nm的波长处测定吸收度；另取氨苄西林三水合物标准品，按同法测定，计算，即得。

中，加热30min，取出冷却，照分光光度法（附录ⅣA），137（3）讨论a.咪唑催化的水解产率高，硫醇汞盐稳定（≥3h）b.侧链有-NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应（3）讨论a.咪唑催化的水解产率高，硫b.侧链有138pH9pH9139（4）特点A、简便快速B、用标准品对照，重现性良好，RSD≤1%（4）特点A、简便快速1403、羟肟酸比色法USPJPFe3+/3H+红色β-内酰胺类NaOH3、羟肟酸比色法USPJPFe3+/3H+红色β-内酰141HPLC法（五）ChP头孢菌素类内标法＋校正因子外标法特点快速、高效、灵敏专属性强、重现性好

一法多用（鉴别、检查、含测）HPLC法（五）ChP头孢菌素类内标法＋校正因子外142哌拉西宁原料药含量测定色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇–0.2mol/L磷酸二氢钠溶液–10％氢氧化四乙基铵溶液–水（400︰50︰3︰547）用磷酸调节pH值至5.5为流动相。检测波长为254nm。哌拉西宁原料药含量测143第三节氨基糖苷类抗生素链霉素双氢链霉素新霉素卡那霉素庆大霉素巴龙霉素第三节氨基糖苷类抗生素链霉素双氢链霉144链霉素链霉胍+链霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺

苷元糖链霉双糖胺链霉素链霉胍+链霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺145链霉胍链霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺链霉胍链霉糖N-甲基-L-146链霉胍链霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺链霉胍链霉糖N-甲基-L-147庆大霉素

糖苷元绛红糖胺+脱氧链霉胺+加洛糖胺

糖庆大霉素糖苷元绛红糖胺+脱氧链霉胺+148绛红糖胺紫素胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺绛红糖胺紫素胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-149绛红糖胺紫素胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺绛红糖胺紫素胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺N-甲基-3-150庆大霉素C复合物庆大霉素C1R=HR1、R2=CH3庆大霉素C2R=R2=H

R1=CH3庆大霉素C1aR、R1、R2=H庆大霉素C2aR=CH3R1=R2=H

庆大霉素C2bR=R1=HR2=CH3庆大霉素C复合物151一、结构与性质多与硫酸成盐链霉素3个庆大霉素5个碱性中心碱性（一）水溶性溶解性（二）一、结构与性质多与硫酸成盐链霉素3个庆大霉素152链霉素pH5～7.5庆大霉素pH2～12稳定UV（三）稳定性（四）链霉素水解产物反应（五）链霉素pH5～7.5稳定UV（三）稳定性（四）153坂口反应N-甲基葡萄糖胺反应麦芽酚反应坂口反应N-甲基葡萄麦芽酚反应154二、鉴别茚三酮反应（一）△羟基胺结构二、鉴别茚三酮反应（一）△羟基胺结构155N-甲基葡萄糖胺反应（二）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛H+红色（Elson-Morgan反应）N-甲基葡萄糖胺反应（二）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物对二甲氨基156(缩合)(缩合)157红色对二甲氨基苯甲醛H+红色对二甲氨基苯甲醛H+158麦芽酚反应（三）

链霉糖特有反应H+分子重排麦芽酚反应（三）链霉糖特有反应H+分子重排159紫红麦芽酚紫红麦芽酚160链霉胍特有反应（或α-萘酚）8-羟基喹啉坂口反应（四）α-萘酚链霉胍特有反应（或α-萘酚）8-羟基喹啉坂口反应（四）α-161最新抗生素类药物分析课件162（四）反应H+UV法（五）IR法（六）庆大霉素无UV吸收TLC法（七）（四）反应H+UV法（五）IR法（六）庆大霉素无UV吸收TL163三、检查链霉素杂质（一）链霉素B（甘露糖链霉素）方法TLC中的对照品法（BP）1.来源反应中间体三、检查链霉素杂质（一）链霉素B（甘露糖链霉素）164对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同工艺差别C组分比例不一致规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素C组分的测定（二）对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同C组165λmax=330nm衍生化原理1.λmax=330nm衍生化原理1.1661-烷基硫代-2-烷基异吲哚衍生物1-烷基硫代-2-烷基167RP－HPLC方法2.规定C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%计算3.峰面积归一化法RP－HPLC方法2.规定C1168最新抗生素类药物分析课件169三、含量测定链霉素、庆大霉素微生物检定法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。三、含量测定链霉素、庆大霉素微生物检定法170四、血清中庆大霉素的HPLC法血浆样品的预处理离子对色谱法的目的：除去氨基酸、肽、胺的干扰选用OPA为荧光衍生化试剂采用柱后衍生化法四、血清中庆大霉素的HPLC法血浆样品的预处理171第四节四环素类抗生素ABCD第四节四环素类抗生素ABCD172123456789101112123456789101112173四环素（TC）tetracycline四环素（TC）tetracycline174金霉素(CTC)

chlortetracycline氯四环素金霉素(CTC)chlortetracycline氯175土霉素(OTC)

oxytetracycline氧四环素土霉素(OTC)oxytetracycline氧四环176多西环素(DOTC)doxycycline脱氧土霉素多西环素(DOTC)doxycycline脱氧土霉177美他环素（METC）metacycline美他环素（METC）metacycline178最新抗生素类药物分析课件179一、结构与性质两性（一）1.与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度↑

酚羟基、烯醇型羟基弱酸性二甲胺基弱碱性一、结构与性质两性（一）1.与酸、碱均能成盐2.180吸湿性（二）多含结晶水与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+

UV（三）与金属离子络合（四）pH3~7.5荧光

吸湿性（二）多含结晶水与金属离子生成有色配位化合物Ca2+181最新抗生素类药物分析课件182不稳定性（四）1.差向异构化淡黄→黑蓝色荧光不稳定性（四）1.差向异构化淡黄→黑蓝色荧光183差向四环素差向四环素184（土霉素、多西环素不易差向异构化）（土霉素、多西环素不易差向异构化）1852.降解反应（1）酸性下降解λmax=445nmλmax=435nm橙黄色2.降解反应（1）酸性下降解λmax=445nmλmax186脱水四环素脱水四环素187～～TCETCATCEATC＜＜～～TCETCATCEATC＜＜188（2）碱性下降解（荧光）（2）碱性下降解（荧光）189二、鉴别试验H2SO4反应（一）二、鉴别试验H2SO4反应（一）190FeCl3反应（二）FeCl3反应（二）191Cl-反应（三）1mol/L盐酸-甲醇（1→100）0.01mg/mlUV法（四）Cl-反应（三）1mol/L盐酸-甲醇（1→100）UV法（192荧光法（五）UV绿色荧光H+UV荧光法（五）UV绿色荧光H+UV193TLC法（六）正相分配薄层色谱IR法（五）EDTA克服痕量金属造成的拖尾现象TLC法（六）正相分配薄层色谱IR法（五）EDTA194三、检查·4-差向四环素（ETC）·脱水四环素（ATC）·差向脱水四环素（EATC）·盐酸金霉素（CTC）有关物质（一）TLC法（1995版）HPLC法（2000版）标准品对照法盐酸四环素三、检查·4-差向四环素（ETC）195四环素有关物质TLC图I.供试液(5mg/ml)ETC(0.2mg/ml)ATC(0.025mg/ml)IV.EATC(0.025mg/ml)CTC(0.1mg/ml)VI.混合液4％0.5％0.5％2％四环素有关物质TLC图I.供试液(5mg/ml)ET196吸收度（二）吸收度（二）197杂质吸收度杂质吸收度198四、含量测定ChP、USPHPLC法（外标法）系统适用性试验1.防护柱2.预试溶液4-差向脱水四环素四环素3.RSD≤2.0%四、含量测定ChP、USPHPLC法（外标法）系199JP比色法（标准曲线法）标△样△原理JP比色法（标准曲线法）标△样△原理2001.熟悉抗生素类药物分析的特点及其常规检验项目。了解抗生素类药物的分析现状，熟悉生物学法与物理化学法测定效价的原理及优缺点。2.掌握β－内酰胺类抗生素的结构、性质、鉴别及含量测定。第十一章复习内容1.熟悉抗生素类药物分析的特点及其第十一章复习内容2013.掌握氨基糖苷类抗生素的结构、性质及鉴别，了解其检查及含量测定4.掌握四环素类抗生素的结构及性质，了解其鉴别、检查及含量测定5.了解抗生素类药物的质量考察方法3.掌握氨基糖苷类抗生素的结构、性质及鉴别，了解其检查20299：89．下列哪个药物会发生羟肟酸铁反应

A.青霉素B.庆大霉素C.红霉素D.链霉素E.维生素C

99：89．下列哪个药物会发生羟肟酸20399m：71．中国药典(1995年版)测定头孢菌素类药物的含量时，多数采用的方法是

A.微生物法B.碘量法C.汞量法D.正相高效液相色谱法E.反相高效液相色谱法99m：71．中国药典(1995年版)测定头20495：139．属于-内酰胺类的抗生素药物有

A.青霉素B.红霉素C.头孢菌素D.庆大霉素E.四环素95：139．属于-内酰胺类的抗生素药20545．能和茚三酮发生呈色反应的物质有

A．链霉素B．庆大霉素C．土霉素D．氨基酸E．苯巴比妥45．能和茚三酮发生呈色反应的物质有20696：135.青霉素类药物可用下面哪些方法测定

A.三氯化铁比色法B.汞量法C.碘量法D.硫醇汞盐法E.酸性染料比色法96：135.青霉素类药物可用下面哪些207110．能发生重氮化一偶合反应的抗生素类药物是

A.青霉素B.庆大霉素C.苄星青霉素D.盐酸四环素E.普鲁卡因青霉素110．能发生重氮化一偶合反应的抗20899：[116—120]以下反应可适用的药物

A.青霉素B.链霉素C.两者均能D.两者均不能116．Kober反应117.羟肟酸铁反应118.坂口反应119.N—甲基葡萄糖胺反应120.在酸性溶液中水解DABBC99：[116—120]以下反应可适用的药物DABBC20998：[126—130]可以鉴别的药物是

A.链霉素B.庆大霉素C.两者均可D.两者均不可126.用Kober反应127.用坂口反应128.用麦芽酚反应129.用三氯化铁反应130.用茚三酮反应DAADC98：[126—130]可以鉴别的药物是DAADC210问题46～50

A.茚三酮反应B.麦芽酚反应C.坂口反应D.FeC13反应E.羟肟酸铁反应46．头孢唑林钠47．金霉素48．链霉素49．庆大霉素50．青霉素EDEAABC问题46～50EDEAABC211（）青霉素分子能与碘定量反应，因此可以根据消耗的碘量计算青霉素的含量。×（）青霉素分子能与碘定量反应，因此可以根据消耗的碘量21299m：90．四环素在酸性条件下的降解产物是

A.差向四环素B.脱水四环素C.异四环素D.去甲四环素E.去甲氧四环素99m：90．四环素在酸性条件下的降213最新抗生素类药物分析课件214最新抗生素类药物分析课件215抗生素类药物分析抗生素类药物分析第一节概述抗生素的定义抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。第一节概述抗生素的定义抗生素是细菌、217最新抗生素类药物分析课件218最新抗生素类药物分析课件219最新抗生素类药物分析课件220最新抗生素类药物分析课件221最新抗生素类药物分析课件222最新抗生素类药物分析课件223第二节β–内酰胺类抗生素

青霉素类第二节β–内酰胺类抗生素青霉素类224头孢菌素类头孢菌素类225青霉素（青霉素G、苄青霉素）青霉素（青霉素G、苄青霉素）226氨苄西林

（氨苄青霉素）氨苄西林

（氨苄青霉素）227阿莫西林

（羟氨苄青霉素）阿莫西林

（羟氨苄青霉素）228普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素229头孢氨苄头孢氨苄230头孢拉定头孢拉定231头孢羟氨苄头孢羟氨苄232头孢噻吩钠头孢噻吩钠233酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐

（一）羧基易溶于水

酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐（一）234与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素235（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液–18～–24°)头孢菌素类C6C7青霉素类C3C5C6

旋光性﹡﹡﹡﹡﹡（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液236

（三）共轭体系头孢菌素类母核有共轭体系

青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基

UV（三）共轭体系头孢菌素类237青霉素钠UV7-20青霉素钠UV7-20238最新抗生素类药物分析课件239（四）β–内酰胺环水溶液不稳定干燥纯净稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解（四）β–内酰胺环水溶液240（某些金属离子）（温度）某些氧化剂（某些金属离子）某些氧化剂241例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉242最新抗生素类药物分析课件243二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄色+醋酸氧铀锌→↓黄

Na+

焰色→紫色+0.1%四苯硼钠+Ac→↓白

K+二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄244（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色Fe3+/3H+（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色245H+Fe3+/3（红、棕、褐）H+Fe3+/3（红、棕、褐）2462、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类2、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类2473.茚三酮反应△α-氨基3.茚三酮反应△α-氨基248α-氨基、伯胺某些羟基胺类酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色α-氨基、伯胺酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色2494.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键4.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键250蓝紫色蓝紫色2515.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素阿莫西林氨苄西林△（分解）变色酸显色5.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素△（分解）252150℃（缩合）150℃（缩合）253（缩合）（缩合）2546.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮6.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮255（偶合）（偶合）256最新抗生素类药物分析课件2577.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应7.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应258（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或有机溶剂中溶解（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或2592.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化-偶合反应芳伯氨基2.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化260普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素261最新抗生素类药物分析课件262（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺263mp三硝基苯酚mp三硝基苯酚264光谱法（四）1、UV法样品、分解产物Cu2+头孢氨苄λmax=262nm青霉素V钠A280nm/A264nm=1.30～1.50光谱法（四）1、UV法样品、分解产物Cu2+头孢氨苄265Cu2+pH3.8△Cu2+pH3.8△266最新抗生素类药物分析课件267氯唑青霉素3410.682双氯青霉素3420.653苯唑青霉素3391.328(nm)氯唑青霉素3410.2682、IR法β-内酰胺环酰胺2、IR法β-内酰胺环酰胺2693、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有不同的NMR光谱进行鉴别JP以吸收峰频率对峰强度进行作图主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律3、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有270硫酸庆大霉素NMR谱7-08硫酸庆大霉素NMR硫酸庆大霉素NMR谱7-08硫酸庆大霉素NMR271色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法272精密称取样品0.1009g，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)25.0ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处静置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.09863mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液(0.09863mol/L)13.80ml，并将滴定结果用空白试验校正，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液（0.09863mol/L）21.64ml。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。精密称取样品0.1009g，置250ml碘瓶中，273酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐

（一）羧基易溶于水

酸性结构与性质一、Na与碱金属(Na+、K+)成盐（一）274与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水普鲁卡因青霉素275（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液–18～–24°)头孢菌素类C6C7青霉素类C3C5C6

旋光性（二）手性C(5%头孢唑啉钠溶液276

（三）共轭体系头孢菌素类母核有共轭体系

青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基

UV（三）共轭体系头孢菌素类277青霉素钠UV7-20青霉素钠UV7-20278最新抗生素类药物分析课件279（四）β–内酰胺环水溶液不稳定干燥纯净稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解（四）β–内酰胺环水溶液280（某些金属离子）（温度）某些氧化剂（某些金属离子）某些氧化剂281例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2例青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉282(头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%)(头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%)283二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄色+醋酸氧铀锌→↓黄

Na+

焰色→紫色+0.1%四苯硼钠+Acˉ→↓白

K+二、K+、Na+反应（一）鉴别焰色→鲜黄284（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色Fe3+/3H+（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应β-内酰胺类NaOH呈色285H+Fe3+/3（红、棕、褐）H+Fe3+/3（红、棕、褐）286例：ChP(2000)头孢哌酮[鉴别]取本品10mg，加水2ml与盐酸羟胺溶液[取34.8%盐酸羟胺溶液1份，醋酸钠-氢氧化钠溶液1份，乙醇4份]3ml，振摇溶解后，放置5min，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。例：ChP(2000)头孢哌酮2872、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类2、与H2SO4-HNO3反应头孢菌素类2883.茚三酮反应△3.茚三酮反应△289α-氨基、伯胺某些羟基胺类酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色α-氨基、伯胺酮式烯醇式茚三酮茚三酮缩合蓝紫色2904.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键4.双缩脲反应β-内酰胺类（开环分解）似肽键291蓝紫色蓝紫色2925.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素阿莫西林氨苄西林△（分解）变色酸显色5.与变色酸-硫酸反应活泼“-CH2-”青霉素△（分解）293150℃（缩合）150℃（缩合）294（缩合）（缩合）2956.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮6.与重氮苯磺酸反应（偶合）酚羟基头孢哌酮296（偶合）（偶合）297最新抗生素类药物分析课件2987.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应7.与铜盐反应橄榄绿色NaOH专属反应299（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或有机溶剂中溶解（三）沉淀反应1.遇酸→↓在过量HCl或3002.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化-偶合反应芳伯氨基2.有机胺盐反应（1）重氮化-偶合反应重氮化301普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素302最新抗生素类药物分析课件303（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺（2）与三硝基苯酚反应△二苄基乙二胺304mp三硝基苯酚mp三硝基苯酚305光谱法（四）1、UV法样品、分解产物头孢氨苄λmax=262nm青霉素V钠A280nm/A264nm=1.30～1.50Cu2+光谱法（四）1、UV法样品、分解产物头孢氨苄λmax306Cu2+pH3.8△Cu2+pH3.8△307最新抗生素类药物分析课件308氯唑青霉素3410.682双氯青霉素3420.653苯唑青霉素3391.328(nm)氯唑青霉素3410.63092、IR法β-内酰胺环酰胺2、IR法β-内酰胺环酰胺3103、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有不同的NMR光谱进行鉴别JP主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律3、NMR法利用不同结构的原子核在D2O中有311色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法色谱法（五）1、TLC法对照品对照法2、HPLC法312三、含量测定三、含量测定313（水解）碘量法（一）1.原理水解产物定量过量剩余β-内酰胺类ChP（水解）碘量法（一）1.原理水解产物定量过量剩余β-内酰胺类314反应分两步进行：1.水解反应(按化学计算量进行)2.氧化-还原反应(无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)反应分两步进行：315第一步第二步第一步第二步316例注射用普鲁卡因青霉素含量测定取装量差异项下的内容物，精密称取约0.12g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml放置20分钟，再加1mol/L盐酸溶液1ml与醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)5ml，精密加入碘滴定液(0.01mol/L)15ml，密塞，摇匀，在20～25℃暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，例注射用普鲁卡因青霉素含量测定取317至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并318V样空V样对照液+缓冲液+碘液+回滴+碱+酸+缓冲液+碘液+回滴V对空V对2.方法供试液+缓冲液+碘液+回滴+碱+酸+缓冲液+碘液+回滴V样空V样对照液+缓冲液+碘液+回滴V对空V对2.方法供试液319空白试验A、消除样品已降解产物的干扰B、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰C、消除碘挥发造成的误差以未经水解的样品作空白测定空白试验A、消除样品已降解产物的干扰以未经水解的样品作320空白样品I2Na2S2O3I-I2空白样品I2Na2S2O3I-I2321采用标准品平行对照测定A、可消除温度、pH、操作、环境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定法一致采用标准品平行对照测定A、可消除温度、pH、操作、环3223.条件（1）弱酸性pH4.5碱↑I2→IO3-+I-酸↑普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀（2）温度24～26℃温度＞38℃未水解的供试品亦消耗碘3.条件（1）弱酸性pH4.5碱↑I2323（3）水解时间以水解20分钟后的耗碘量最大（4）反应时间反应20分钟后，耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误差。（3）水解时间以水解20分钟后的耗碘量最大（4）反应时间反应324最新抗生素类药物分析课件3254.特点（1）灵敏度高样品:碘=1:8（2）反应条件、实验操作要求高V对、V对空V样、V样空1份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I2→8I-4.特点（1）灵敏度高样品:碘=1:8（2）3265.计算原料5.计算原料327汞量法（二）1.原理（水解）青霉素族ChP汞量法（二）1.原理（水解）青霉素族ChP3282.方法醋酸盐缓冲液pH4.6滴定水解pH4.6滴定样品以未经水解的样品作空白测定2.方法醋酸盐缓冲液pH4.6滴定水解pH4.6滴定样以未329例青霉素钠含量测定取本品约50mg，精密称定，加水5ml溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置15分钟，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸盐缓冲液(pH4.6)20ml及水20ml，摇匀，照电位滴定法(附录ⅦA),用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极为参比电极，在35～40℃，用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)缓慢滴定，例青霉素钠含量测定取本品330（控制滴定过程约为15分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相当于7.128mg的总青霉素(按C16H17N2NaO4S计算)。另取本品约0.5g，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上.（控制滴定过程约为15分钟），不计第331每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg的降解物（按C16H17N2NaO4S计算）。总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当3323、讨论（1）以第二次滴定突跃为终点电位法指示终点（2）反应摩尔比

1:1（3）空白试验消除已降解产物干扰（4）优点

不需标准品3、讨论（1）以第二次滴定突跃为终点（2）反应摩尔比3334、计算4、计算334精密称取含水量为0.5%的青霉素钠0.0502g，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。例青霉素钠含量测定精密称取含水量为0.5%的青霉素例青霉素335最新抗生素类药物分析课件336酸碱滴定法（三）1、原理△（钠盐）β-内酰胺类ChP酸碱滴定法（三）1、原理△（钠盐）β-内酰胺类ChP337△△3382、方法△中和中和2、方法△中和中和339例苯唑西林钠含量测定取本品约0.5g，精密称定，加新沸过的并用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和至酚酞指示液刚显红色的水20ml，使溶解,再用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和后，精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml，摇匀，置水浴中加热20分钟，注意避免吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚酞指示液1～2滴，用盐酸滴定液例苯唑西林钠含量测定取本340（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于40.14mgC19H19N3O5S。（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空3413、讨论（1）水解前先中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收CO2△不能使酚酞变红（3）空白试验校正(消除Na2CO3干扰)（4）特点简便快速不适用于有残留酯的产品3、讨论（1）水解前先中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收CO342最新抗生素类药物分析课件343（水解）可见-紫外分光光度法（四）1、酸水解法（铜盐法）（1）原理稳定剂JP青霉素族（水解）可见-紫外分光光度法（四）1、酸水解法（铜盐法）（1344最新抗生素类药物分析课件345（2）方法△（3）特点实验条件随各药物稳定性不同而定标准品对照法（2）方法△（3）特点实验条件随各药物稳定性不同而定标准品对346（4）计算（4）计算3472、硫醇汞盐法（1）原理（咪唑）青霉素族ChP2、硫醇汞盐法（1）原理（咪唑）青霉素族ChP348咪唑咪唑349（2）方法对照品法计算pH9（2）方法对照品法计算pH9350例氨苄西林钠含量测定取本品约60mg置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置另一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加硼酸缓冲液2.5ml与醋酐的乙腈溶液（1→50）0.25ml，放置5min后，加咪唑溶液至刻度，摇匀，置60℃水浴例氨苄西林钠含量测定取本品351中，加热30min，取出冷却，照分光光度法（附录ⅣA），在325nm的波长处测定吸收度；另取氨苄西林三水合物标准品，按同法测定，计算，即得。

中，加热30min，取出冷却，照分光光度法（附录ⅣA），352（3）讨论a.咪唑催化的水解产率高，硫醇汞盐稳定（≥3h）b.侧链有-NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应（3）讨论a.咪唑催化的水解产率高，硫b.