白色念珠菌菌液制备

白色念珠菌菌液制备：接种白色念珠菌的颖培育物至10ml0.9%无菌氯化钠溶液9ml10-6～10-71ml50～100cfu的孢子悬浮液。黑曲菌菌液制备：接种黑曲菌的颖培育物至改进马丁琼脂斜面培育基中，5～73～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸至1ml9ml10倍递增稀释法，稀释10-4～10-6，1ml50～100cfu供试液的制备 性的供试品供试液的制备PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液液体供试品：供试品10ml90ml〔1：10〕固体、半固体、粘稠性供试品：称取供试品10g100ml，混匀后，作为供试液〔1：10〕。具有抑菌活性的供试品试液的制备当供试品具有抑菌活性时，须先消退抑菌活性，其方法如下：0.1ml注一皿；或取供试液1ml0.5ml15ml1ml1ml数。把握菌检查时可加大增菌液的用量。离心沉淀集菌法：取肯定量的供试液，3000/分别心20〔供试液如有500/52ml，加稀释液补至原量。薄膜过滤法：取规定量试验可能用的最低稀释剂供试液，过滤，冲洗吗，按薄膜过滤法测定其菌落数。菌液组：测定所加的试验菌数。取试验用的1ml菌液〔约50～100cfu〕分别注入平皿中，马上倾入培育基，每株试验菌平行制备2落数。1.5试验组平皿法：取试验可能用的最低稀释级1ml供试液和50～100cfu分别注入平皿中，马上倾入培育基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌落数。1.5.2培育基稀释法〔平皿法〕：取试验可能用的最低稀释级1ml供试液分别注入N个平皿中，每个平皿再注入50～100cfu试验菌平均制备2个平皿，按平皿法测定其菌落数。1.5.3薄膜过滤法：取规定量试验可能用的最低级供试液，过滤，冲洗，在最终一次的冲洗液中参加50～100cfu膜。1.5.4离心沉淀集菌法：取规定量试验可能用的最低稀释剂供试液，如供试液含很多500转/分钟离心3～53000转/分别心201ml液体，将洗涤液与1ml滤法计数。1.6供试品比照组〔方法和试验组一样〕稀释剂比照组组。参加试验菌。最终浓度为每1ml供试液含50～100cfu，回收率计算试验组回收率计算100%稀释剂比照组回收率计算试验组的菌回收率=数落×100%计数方法验证至少应进展3次独立平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。1.9.在3〔稀释剂比照组的平均菌落数减去供试品比照组的平均菌落数占菌液组的品均菌落数的百分率〕70%，应承受自些方法消退供试品的抑菌活性，并重进展方法验证，是试验组菌回收率大于70%把握菌检验方法与验证应进展把握菌检查方法的验证，以确认所承受的方法适合于该药品的把握菌检查方法测定。假设药品的组分或原检验条件发生转变可能影响检同时进展。验证用菌株传代次数不得超过5菌液制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的颖培育物至10ml35～37℃18～241ml0.91010-5～10-710～100cfu阴性菌比照组设立阴性菌比照组是为了验证该把握菌检查方法的专属性。承受大肠埃希菌。阴性比照菌不得检出。试验组常规法大肠埃希菌：取相当于1g1ml100ml胆盐乳糖培育基中，阳

性 菌 对 照

组 加 入

大 肠 埃 希菌 葡 萄 球 菌

阴 性10～

菌 对 照

加 入 金 黄 色100cfu，35～37℃培育18～24大肠埃希菌项下规定检查。2.4.1.2大肠菌群：取含适量〔不少于10ml〕的胆盐乳酸发酵培育基管31g或1ml、0.1g或0.1ml、含供试品0.001g或0.001ml的供试液，阳性菌10～100cfu，阴性菌比照计入近换色葡萄球菌10～100cfu，35～37℃培育18～24小时，按《微生物限度检测标准操作规程》大肠菌群项下规定检查。2.4.1.310g或10ml〔不少于200ml〕的养分肉汤培育基中，阳性菌比照加沙门菌10～100cfu，10～100cfu，35～37℃培育18～24小时。按《微生物湖南金旺稀贵药业GMP治理文件限度检测标准操作规程》沙门菌项下规定检查。2.4.1.4取相当于1g或1ml供试品的供试液至100ml胆盐乳糖培育基中 ， 阳 性 菌 对 照 加 入 铜 绿 假 单 菌10～100cfu， 阴 性 菌 对 照 加 入 大 肠 埃 希 菌10～100cfu35～37℃培育18～24定检查。2.4.1.5取相当于1g或1ml供试品的供试液至100ml胆盐乳糖培育基中，阳性菌对照加入铜绿假单胞菌10～100cfu，阴性菌对照加入大肠埃希菌10～100cfu35～37℃培育18～24菌项下规定检查。2.4.2培育基稀释法：供试品有抑菌作用，放大培育基量由1：100放大到1：300、1：500或1：1000，由于容器提及限制，一般放大到500ml或1000ml用不签的样品。2.4.3薄膜过滤法：承受薄膜过滤法时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最终一次冲洗液中，取全部上清液，再以3000转/分别心20分钟取下面液体，并将培育，用的样品。2.4.4中和法：在供试品溶液中参加相应的中和剂一减除供试品中抑菌成份的作用，中和剂应对微生物无毒性，或有毒性但不影响待检菌的检出。2.5结果推断至少进展3次独立平行试验。假设试验组检出试验菌，假设试验组未检出试法或联合使用这些方法消退供试品的抑菌活性，并重进展方法验证。3.验证的实施3.1细菌、霉菌、酵