天然药物活性成分的

天然药物活性成分研究

1活性成分：是指植物、动物、微生物以及矿物等各种天然药物体内存在的对人体生理活性有影响的物质。如：植物中的黄酮、皂苷、生物碱等，动物体内的多肽、激素等。2第一节天然药物的研究开发程序开发新药包括5种形式：1.经过文献资料或民间用药的调研并通过现代药理学的筛选研究，发现某种天然药物具有药用价值，然后将其开发成新药。32.已知某种成分或某类成分具有药用价值或已成为新药，根据动植物的亲缘关系，寻找含有这种或这类成分的动植物，将其开发成新药。43.在不明确有效成分的基础上，将临床疗效明确的经典方、经验方或经药效学研究具有开发价值的复方中药开发成新药，或将现有的新药改变剂型。54.在基本搞清了有效成分和有效部位的基础上，将有效部位开发成新药，采用这种方法开发的新药具有药品的均一性较易控制、临床疗效稳定、质量得到保证等优点。65.通过天然药物中的有效成分或生物活性成分的研究，从中发现有药用价值的活性单体或潜在药用价值的活性单体，这些单体往往具有一定的生物活性，但因其活性不够显著或毒副作用大，无法将其开发成新药，但他们具有潜在的药用价值，称为先导化合物。通过先导化合物的研究进而发现有药用价值的化合物。7第二节天然药物中活性成分的研究方法一、调查研究1.临床调查2.药材调查3.文献查阅8中药创新药物的发现与研发中药作为我国的传统医药，不仅为我国人民的健康事业做出了巨大贡献，而且也是我国医药产业的三大支柱之一，在经济发展中发挥了重要的作用。自从我国加入WTO以后，长期依赖于仿制的化学药物的发展受到了很大的冲击，而具有我国自主知识产权的中药迎来了新的发展机遇，特别是近年来西方国家包括美国、加拿大、欧盟、澳大利亚等对传统药物和植物药的普遍重视和注册政策的调整，给中药进入国际市场提供了一个良好的契机。

9因此，中药将成为我国医药产业新的增长点，中药新药研发也将成为我国创新药物研发的重要方向。自1985年实施《药品管理法》以来，中药新药的研发一直是新药研发中最活跃的领域，至今已有近3000个中药新药获准上市。在这些品种中，以中药复方为主，占近60％；改变剂型约占35％；有效成分、有效部位新药不到5％。分析目前中药新药研发的现状，主要存在着以下问题：10(1)低低水水平平和和高高水水平平重重复复现现象象严严重重，，缺缺少少具具有有独独立立知知识识产产权权的的高高水水平平中中药药新新药药：：目目前前我我国国药药品品法法定定标标准准包包括括《《中中华华人人民民共共和和国国药药典典》》、、《《中中华华人人民民共共和和国国卫卫生生部部药药品品标标准准》》、、国国家家食食品品药药品品监监督督管管理理局局对对地地方方标标准准和和保保健健药药品品整整顿顿后后发发布布的的《《国国家家中中成成药药标标准准汇汇编编》》以以及及《《国国家家药药品品标标准准》》等等收收载载的的中中成成药药品品种种达达一一万万多多种种，，几几乎乎覆覆盖盖了了各各种种疾疾病病用用药药。。而而目目前前申申报报的的中中药药复复方方新新药药即即中中药药、、天天然然药药物物注注册册分分类类的的第第六六类类新新药药，，几几乎乎都都在在原原来来处处方方的的基基础础上上进进行行加加减减，，其其疗疗效效、、制制剂剂和和质质量量控控制制水水平平都都没没有有明明显显的的提提高高，，被被业业内内人人士士称称为为低低水水平平重重复复。。11所谓高高水平平重复复，即即新药药的研研发水水平很很高，，如有有效成成分新新药或或有效效部位位新药药，但但每个个新药药的申申报单单位有有很多多家，，如丹丹参总总酚酸酸及其其制剂剂、红红花总总黄色色素及及其制制剂、、羟基基红花花黄色色素A及其其制剂剂等，，每个个新药药都有有多家家申报报，有有些甚甚至有有十多多家申申报；；人参参中主主要有有效成成为皂皂苷类类，人人参皂皂苷Rg3是第第一个个开发发成为为一类类新药药的皂皂苷，，其他他单位位开发发了Rh、、Re等皂苷苷，目目前还还有一一些其其他皂皂苷正正在开开发中中。12诸如此类类例子很很多，造造成这种种现象的的主要原原因是缺缺乏创新新，研究究单位都都从文献献上找新新药的选选题，发发现文献献报道某某个中药药的成分分能够纯纯化到有有效部位位或有效效成分，，而且有有一定的的药效，，很多机机构都同同时立项项进行研研发，造造成大量量资源的的浪费，，结果都都没有知知识产权权保护，，这是目目前严重重缺乏真真正创新新的、具具有独立立知识产产权的高高水平中中药新药药的重要要原因。。(2)疗效差差、剂型型落后、、质量难难以有效效控制：：目前申申报的大大部分新新药，由由于没有有经过筛筛选过程程，其疗疗效很差差，或者者与上市市的中成成药没有有明显的的差别。。大部分分新药研研发单位位不重视视药物的的疗效，，只重视视新药证证书和生生产文号号，所以以进入新新药研发发的品种种，不管管疗效如如何，最最终都取取得新药药证书和和生产文文号。13这固然然与我我国目目前药药品销销售不不重视视疗效效，只只重视视手段段有关关，但但低水水平重重复也也是造造成这这种现现象的的重要要原因因。目目前中中药的的制剂剂水平平从剂剂型到到制剂剂研发发水平平均非非常落落后，，既使使是一一些先先进的的剂型型，其其研发发水平平也很很落后后。目目前中中药制制剂学学的研研究基基本上上只停停留在在能够够做成成某种种剂型型的水水平，，很少少研究究其溶溶出度度、体体内的的药代代动力力学。。但近近年来来的研研究表表明，，大部部分中中药的的成分分特别别是传传统认认为生生物利利用度度较好好的水水溶性性成分分，如如大部部分苷苷类成成分，，其生生物利利用度度非常常低，，既使使在复复方中中也一一样。。因此此，进进行中中药新新药的的制剂剂学研研究包包括主主要成成分溶溶出度度、药药代动动力学学研究究，对对于提提高中中成药药的疗疗效非非常重重要。。目前前中药药新药药的申申报，，对其其质量量标准准基本本上要要求有有1味味药物物成分分的含含量测测定和和1／／3药药味的的定性性鉴别别，所所以新新药研研发基基本上上都是是按照照这个个原则则进行行，这这对于于中药药复方方制剂剂特别别是处处方较较大的的复方方制剂剂是远远远不不够的的，其其他没没有定定性鉴鉴别的的药味味，可可加可可不加，造成市场场上出现劣质质药品的局面面。因此，目目前大部分中中药复方制剂剂的质量标准准难以有效地地控制药品的的质量。14(3)仿制药药充斥市场：：专利到期后后药品的仿制制是世界各国国都允许的，，是降低药品品价格的主要要途径，我国国放开药品仿仿制，本身无无可非议，但但在管理和实实施上存在着着很大的问题题，促使药品品生产企业不不重视创新，，只重视眼前前利益，导致致仿制药品充充斥市场，严严重影响了创创新药物的发发展。15(4)大部分分新药品种未未产业化，少少数产业化，，极少数形成成“重磅炸弹弹”：我国1985年以以来上市的近近3000个中药新药药大部分未产产业化，仅少少数产业化，，极少数形成成产值过亿的的所谓中国的的“重磅炸弹弹”，如丹参参滴丸、地奥奥心血康、步步长脑心通、、通心络胶囊囊等。主要原原因为：其一一，研发的新新药品种大部部分为低水平平重复，没有有特色，缺乏乏市场竞争力力；16其二，企业研研发或转让新新药缺乏市场场调研，很多多新药取得文文号后，就搁搁置在档案室室里。药品作作为预防、治治疗和诊断疾疾病的物质基基础，直接关关系到人民的的身体健康，，追求更好、、追求完美是是药品发展的的必然趋势。。国际大型制制药集团每年年投入巨额资资金进行新药药研发，每个个新药的上市市都给企业带带来巨额的利利润，药品知知识产权是各各国知识产权权谈判的重要要内容之一，，这些都说明明创新药物对对医药产业发发展的重要性性。因此，创创新药物的研研发今后也必必将成为我国国药品研发的的主要方向。。171．2中药药创新药物的的定义创新药物在国国际上一般是是指新的化学学实体或者生生物制品中新新的物质。中中药是我国的的特色，对于于中药创新药药物的定义至至今没有定论论，但国家科科技部、发改改委在创新药药物项目评审审中基本上有有一个概念，，主要是指有有效成分新药药和有效部位位新药，SFDA药品审审评中心在新新药审评中也也有一个创新新药物概念，，也是指一类类新药和五类类新药。因此此，我们认为为中药创新药药物是指首次次上市的从中中药和天然药药物中提取的的有效物质，，包括有效成成分和有效部部位及其组成成的复方制剂剂。按照现行行《药品注册册管理办法》》，即首次在在我国上市的的中药、天然然药物中提取取的有效成分分及其制剂(一类新药)、首次在我我国上市的中中药、天然药药物中提取的的有效部位及及其制剂(五五类新药)。。182中药创新新药物的发现现“安全、有效效、稳定、可可控”是药品品的四大要素素。药品的研研发首先必须须针对某种疾疾病，从大量量的化学物质质、中药、天天然药物中筛筛选出具备上上述四大要素素的物质，才才能进人新药药研发。中药药尽管有两千千多年的临床床使用历史，，但临床上基基本都是以复复方配伍使用用，各种中药药的疗效包括括复方的疗效效如何，没有有确切的数据据，作为药品品进行开发，，仍需要进行行大量的筛选选。因此，新新药的发现是是中药创新药药物研发的必必需过程。而而我国目前中中药新药的研研发极少经过过发现过程，，这也是我国国缺少疗效独独特的中药创创新药物的重重要原因。192．1新药药发现的过程程根据国内外新新药发现过程程结合我国中中药新药研发发的特点，总总结新药发现现过程见图1。其发现过过程详细介绍绍如下：2．1．1样样品的选择择与制备新药药的发现从样样品的收集开开始。为了提提高目标的命命中率，可根根据文献古籍籍调研，从民民族、民间药药物、临床名名方、老药和和国外天然药药物中选择筛筛选样品，收收集样品，进进行基原鉴定定，也可选择择天然产物进进行大规模筛筛选。样品收收集后进行提提取，或采用用溶剂粗分成成几个部位，，得到粗提物物。202．1．2活活性筛选根根据拟开发药药物的适应症症，采用体外外或体内的方方法对提取物物进行活性筛筛选，如果提提取物有明显显的活性，即即进入下一程程序；如果提提取物没有明明显的活性，，先贮存在样样品库中，供供其他活性筛筛选。2．1．3活活性跟踪的的化合物分离离、结构鉴定定以及有效部部位、有效成成分、活性先先导化合物的的发现采用溶溶剂方法或色色谱方法对粗粗提物进行进进一步分离，，最好能够按按化合物类型型进行分离，，有利于有效效部位新药的的发现；21对分离后的各各个部分进行行进一步的活活性筛选，发发现活性部位位；采用色谱谱方法对活性性部位进行化化合物的分离离和结构鉴定定；对分离的的化合物进行行活性筛选。。在此筛选过过程中，有时时会发现某一一部位活性很很强，但进一一步分离成单单体化合物后后活性没有提提高，甚至降降低的现象，，这可能是由由于中药的各各成分之间存存在着协同作作用导致的。。这时可以把把相应的活性性部位研发成成为新药，即即有效部位新新药。如果发发现某一单体体化合物活性性很强，具有有临床应用前前景，就可以以把单体化合合物研发成为为新药，即有有效成分新药药。但在活性性成分研究中中，大部分情情况是分离的的化合物具有有一定活性，，但活性不太太强，或毒性性很大，没有有临床使用价价值，这类化化合物被称为为活性先导化化合物，可进进人结构改造造程序。对于于没有活性的的化合物，将将其贮存在样样品库中，供供其他活性筛筛选。222．1．．4先先导化合合物的结结构改造造、构效效关系研研究与新新化学药药物的发发现如如前所述述，天然然产物中中发现的的大部分分化合物物没有直直接临床床应用价价值，但但为创新新药物发发现中先先导化合合物的主主要来源源。对于于活性筛筛选发现现的活性性先导化化合物，，必须进进行结构构改造和和构效关关系研究究。通过过系统的的构效关关系分析析，进一一步设计计并优化化活性化化合物，，再通过过活性筛筛选，直直至发现现具有临临床应用用价值的的化合物物，从而而进人新新药研发发阶段，，最后成成为化学学药的一一类新药药。23目前国际际上多数数创新药药物都是是通过这这一途径径发现的的，从国国际上申申请的专专利也可可以看出出，一般般一个活活性化合合物，其其合成的的衍生物物都在数数十个，，甚至上上百个。。而在我我国，天天然产物物研究与与合成是是基本脱脱节的，，从事天天然产物物研究的的人员大大多不懂懂合成，，从事合合成的人人员对结结构改造造也不感感兴趣，，这也是是我国极极少发现现新的化化学实体体药物的的主要原原因之一一。另外外，近年年来的大大量研究究表明，，中药或或天然药药物的成成分在体体内极易易产生代代谢，从从其代谢谢产物中中发现活活性成分分，也是是创新药药物发现现的一个个重要途途径。242．2中中药创创新药物物发现的的新方法法、新技技术中药药创新药药物发现现的新方方法、新新技术包包括“基基于细胞胞、靶酶酶、亲和和色谱、、分子烙烙印技术术、生物物芯片等等的高通通量筛选选技术””、“多多维液相相色谱一一高通量量筛选一一LC．．MS／／NMR联用技技术”、、“LC．MS．DS／HLPC／／HTS联合技技术”等等。252．3中中药创创新药物物发现的的新领域域、新途途径大部部分传统统中药是是我们的的祖先在在寻找食食物的过过程中发发现的，，因此有有“医食食同源””或“药药食同源源”之说说。从《《中国药药典》收收载的常常用中药药可以看看出，大大部分中中药为草草本植物物，少数数为灌木木，极少少数为乔乔木。近近百年的的中药活活性成分分研究，，从这些些草本植植物中发发现了不不少具有有临床应应用价值值的化合合物，如如麻黄碱碱、小檗檗碱、青青蒿素等等，为现现代药物物的发展展做出了了巨大贡贡献。但但大量研研究表明明，这些些草本植植物所含含化学成成分结构构简单，，基本上上都属于于《天然然药物化化学》或或《中药药化学》》等教科科书上介介绍的结结构类型型，发现现新的结结构类型型、新的的活性化化合物的的难度越越来越大大。寻找找发现创创新药物物的新领领域、新新途径是是天然药药物学家家们面临临的新课课题。根根据近二二十年来来中药、、天然药药物的研研究进展展，以下下方面将将是今后后创新药药物发现现的新途途径和新新领域。。262．3．．1乔木木类植物物高大大乔木在在传统中中药中很很少使用用，较常常用的仅仅黄柏、、杜仲、、厚朴、、肉桂等等lO多多种中药药，因此此其活性性成分研研究以前前开展得得很少。。近二十十年的研研究表明明，高大大乔木中中除了含含有一些些常见结结构类型型的植物物化学成成分外，，尚含有有一些结结构类型型较新颖颖、生理理活性较较强的成成分，发发现活性性成分的的机率较较高，如如紫杉醇醇、三尖尖杉酯碱碱、喜树树碱、番番荔枝内内酯等都都来源于于高大的的乔木。。我国有有着丰富富的乔木木资源，，特别是是热带、、亚热带带地区的的乔木种种类非常常丰富，，这些乔乔木大部部分未进进行过活活性成分分的研究究，为新新药发现现提供了了一个很很大的空空间。272．3．2海海洋生物海海洋面积约占占地球表面积积的7l％，，海洋生物资资源非常丰富富，但由于受受样品采集、、提取、分离离和结构鉴定定等技术的限限制，对海洋洋生物进行有有组织的研究究和开发开展展得较晚。六六十年代以来来，随着科学学技术的发展展，新的分离离技术和分析析仪器的采用用，使海洋生生物的研究成成为可能。近近二十年来的的研究表明，，海洋生物中中所含化学成成分结构新颖颖、复杂，常常具有很强的的生物活性，，具有很好的的新药开发前前景。282．3．3低低等生物和和植物共生菌菌低等生物同同样存在着样样品采集和分分类鉴定的困困难，因此对对其活性成分分研究也很少少。但大部分分低等生物具具有很强的生生物活性，特特别是一些真真菌类，很小小的剂量就能能够产生很强强的生理作用用。对低等生生物进行研究究，发现活性性成分的机率率很高。同时时，低等生物物还具有易于于通过发酵生生产的优势，，产业化前景景看好。因此此，低等生物物的活性成分分研究也是新新药发现的一一个新领域。。当务之急是是要加强分类类学家与药物物学家的配合合，解决样品品的收集与分分类鉴定问题题。植物共生生菌的研究是是近十年来才才开始的新研研究领域，尽尽管时间很短短，但已发现现了大量新化化合物骨架和和新的活性化化合物。植物物共生菌种类类很多，而且且易于发酵和和调控，也是是创新药物发发现的一个重重要领域。292．3．4鲜鲜活动物的的内源性物质质动物药作为为中药使用有有着悠久的历历史，《神农农本草经》收收载动物药67种。对动动物药进行系系统的活性成成分研究开展展较晚。近二二十年的研究究表明，动物物药特别是鲜鲜活动物含有有大量的活性性物质，其活活性成分具有有生理活性强强、疗效确切切、副作用小小等特点，如如蛇毒、蚯蚓蚓纤溶酶、水水蛭素、斑蝥蝥素、蜂毒等等都是活性很很强的天然产产物。我国有有动物药2000多种种，目前已进进行过较系统统研究的不到到1％，因因此对动物药药，特别是鲜鲜活动物进行行系统的活性性成分研究，，有望开发出出疗效显著、、作用专一、、副作用小的的新药。302．．3．．5中中药药复复方方中中药药复复方方是是中中医医临临床床用用药药的的主主要要形形式式。。由由于于分分离离技技术术的的限限制制，，中中药药复复方方的的活活性性成成分分研研究究以以前前开开展展较较少少。。近近年年来来，，随随着着分分离离技技术术的的快快速速发发展展，，各各种种高高性性能能色色谱谱填填料料和和高高效效色色谱谱分分离离技技术术已已逐逐渐渐在在我我国国普普及及，，使使中中药药复复方方的的活活性性成成分分研研究究成成为为可可能能。。近近年年来来的的研研究究表表明明，，中中药药复复方方的的化化学学成成分分确确实实有有别别于于单单味味中中药药，，这这并并非非完完全全是是中中药药复复方方共共煎煎产产生生新新的的成成分分，，而而是是通通过过成成分分之之间间的的增增溶溶作作用用，，使使一一些些在在单单味味中中药药研研究究中中没没有有发发现现的的成成分分在在复复方方研研究究中中被被发发现现，，如如我我们们在在补补阳阳还还五五汤汤的的化化学学成成分分研研究究中中发发现现4个个新新的的生生物物碱碱_2J，，为为创创新新药药物物的的发发现现提提供供新新的的结结构构化化合合物物。。另另外外，，中中药药复复方方的的活活性性成成分分研研究究是是发发现现具具有有临临床床使使用用价价值值的的中中药药成成分分的的组组合合或或有有效效部部位位组组合合的的最最有有效效途途径径。。312．3．6中中药成分的体体内代谢产物物从代谢产物物中发现新药药一直是国际际上非常重视视的领域，特特别是近十年年来随着新药药研发成本的的快速增长，，国际上一些些较小的制药药企业和新药药研发公司难难以承受新药药发现的巨大大成本，纷纷纷将研究重点点转向代谢产产物的研究，，一旦大公司司发现新药，，小公司马上上研究其代谢谢产物，这样样可以大大提提高新药发现现的几率，降降低研发成本本。中药和天天然药物中的的成分，由于于其具有比化化学药更好的的生物顺应性性，在体内更更易发生代谢谢，其代谢产产物往往是其其真正的活性性成分，如黄黄芩苷、番泻泻苷等。因此此，对体内代代谢产物进行行生物活性研研究，从代谢谢产物中发现现新药也是一一个很好的途途径。323中药创新新药物的研发发3．1中药药创新药物选选题的原则3．1．1突突出中医药药特点、优势势原则“辩辩证施治，调调节阴阳”是是中医药理论论的精髓。中中医治病多从从整体观念人人手，以调节节整体功能为为主，如扶正正祛邪、调整整阴阳、调整整脏腑功能及及调理气血等等，都是中医医重要的治疗疗法则。长期期的临床使用用表明，中医医药在生理功功能的调节、、病毒性感染染、免疫性疾疾病、各种慢慢性病、养生生保健、抗衰衰老等方面具具有明显的优优势。因此，，在中药创新新药物研发的的选题时必须须充分考虑中中医药治疗的的优势病种，，发挥中医药药的特色与优优势，切忌选选择目前化学学药治疗效果果很好的疾病病。333．1．2医医疗需要(社会效益)原则医疗疗需要即社会会效益。作为为药物，其主主要功能是预预防、治疗、、诊断人的疾疾病，为人民民的健康事业业提供保障。。因此，新药药的选题必须须针对当前社社会的人口谱谱、健康谱和和疾病谱，研研制治疗常见见病、多发病病和疑难病的的药物。具体体来说，当今今社会急需治治疗下列几类类疾病的药物物：①常见病病：感冒、肝肝炎、消化道道疾病、呼吸吸系统疾病等等；②现代社社会流行病：：心脑血管疾疾病、癌症、、肺病、糖尿尿病等；③老老年病：老老年痴呆症、、老年糖尿病病、骨质疏松松、各种器质质性疾病、白白内障等；④④疑难病：艾艾滋病、各种种免疫性疾病病等。343．1．3市市场需求(经济效益)原则市场需需求即经济效效益。药品作作为一种商品品，除了疗效效外，必须还还有市场效益益，否则，该该新药获得证证书后只能存存在档案室。。因此，在新新药选题时必必须进行充分分的市场调研研，分析所选选病种的发病病率、当前上上市药物的品品种、临床用用药状况、各各个品种的特特点和目前市市场占有率，，根据拟选新新药的优势和和特点，预测测新药上市后后可能的市场场占有率和市市场前景。对对于这一点，，国内的企业业和科研单位位做得不够充充分，较少有有新药研究单单位在立项时时能够拿出一一套详细的市市场调研报告告，这也是为为什么报批的的新药大部分分不能很好地地开发市场的的重要原因。。353．1．4立立足创新原原则作为创创新药物必须须立足于“新新”字，中药药创新药物的的创新可以从从三方面实现现：①新物质质，包括新化化合物和新有有效部位；②②新药用，一一个已知化合合物或已知提提取物，发现现其药用价值值，将其开发发成为新药，，也是非常有有价值的，如如砒霜，发现现其可以治疗疗白血病，曾曾引起国际上上的轰动；③③名优中成药药的二次开发发，对名优中中成药进行深深入研究，阐阐明其有效部部位，将其研研制成为新的的有效部位复复方制剂，从从而降低服用用剂量、提高高疗效、建立立有效的质量量标准，对中中成药来说，，也是很好的的创新。363．1．5可可行性原则则在创新药药物研发时必必须注意生产产工艺和质量量标准的可行行性。因为，，其一，生产产工艺和质量量标准将伴随随着药品的终终生，一个无无法工业化或或高成本的生生产工艺将使使新药无法投投产，一个难难以重现的质质量标准将无无法控制药品品的质量；其其二，有效成成分新药要求求有效成分的的含量达到提提取物的90％以上，有有效部位的新新药要求有效效部位含量达达到提取物的的50％以上上，在选择药药材时就必须须考虑是否能能够纯化到相相应的含量，，是否能够测测出这些成分分的含量。根根据我们的经经验，创新药药物的研发必必须考虑以下下二点：37(1)生产产工艺艺可行行性：：研制制有效效成分分的新新药，，应选选择有有效成成分含含量高高、主主成分分明显显、易易于分分离的的植物物，如如果该该成分分是针针对某某种重重大疾疾病的的特效效药物物，则则另当当别论论；研研制有有效部部位的的新药药，应应选择择有效效部位位集中中，化化学成成分类类别较较少的的植物物；研研制复复方有有效部部位的的新药药，应应选择择药味味较少少，方方中各各味药药的有有效部部位较较明确确的中中药复复方。。38(2)质量量标准准可行行性：：质量量标准准可行行性主主要是是在有有效部部位新新药研研发中中存在在的问问题，，因为为有效效部位位新药药要求求对各各类成成分进进行含含量测测定，，且所所测各各类成成分的的含量量之和和必须须大于于50％。。因此此，在在有效效部位位新药药研发发时首首先必必须考考虑各各类成成分是是否能能够测测定、、相互互之间间是否否存在在干扰扰。在在定量量方法法建立立时可可考虑虑采用用以下下措施施：a．选选择适适当的的方法法，将将各类类成分分进行行分离离，分分别测测定；；b．．选择择各类类成分分专属属的紫紫外一一可见见吸收收波长长分别别进行行测定定；e．采采用各各类成成分专专属性性强、、且稳稳定的的显色色方法法，排排除成成分之之间的的干扰扰。393．2各各类中中药创新新药物的的研究思思路3．2．．1有有效成分分新药有有效成成分新药药实际上上与化学学药没有有本质性性的区别别，研发发有效成成分的新新药应该该与上市市的适应应症相同同或相似似的化学学药进行行比较，，分析拟拟开发新新药在疗疗效、安安全性、、生产成成本等方方面的优优势或特特色，如如果没有有优势或或特色，，则该新新药的开开发意义义就不大大。由于于中药中中的成分分多数情情况下存存在着协协同作用用，单体体化合物物的活性性往往不不是很强强，难以以与化学学药相比比，从近近几年申申报的中中药一一一类新药药也可以以看出这这一点，，所以开开发有效效成分新新药必须须慎重。。403．．2．．2有有效效部部位位新新药药中中药药有有效效部部位位是是经经过过筛筛选选确确定定的的某某一一中中药药或或复复方方中中的的各各类类有有效效成成分分的的组组合合，，仍仍然然是是个个混混合合物物，，只只不不过过把把无无效效成成分分去去除除，，使使疗疗效效更更强强、、作作用用更更专专一一，，所所以以有有效效部部位位新新药药仍仍然然具具有有中中药药多多成成分分、、多多靶靶点点的的作作用用特特点点，，符符合合中中医医药药理理论论。。同同时时，，经经过过精精制制，，除除去去无无效效成成分分，，提提高高疗疗效效，，降降低低服服用用剂剂量量，，达达到到化化学学成成分分清清楚楚、、质质量量易易控控的的目目的的，，符符合合中中药药现现代代化化的的发发展展趋趋势势。。因因此此，，有有效效部部位位新新药药将将是是中中药药创创新新药药物物研研发发的的主主要要方方向向，，特特别别是是根根据据中中医医药药配配伍伍理理论论结结合合现现代代药药效效学学筛筛选选组组成成的的中中药药有有效效部部位位复复方方制制剂剂，，能能够够更更好好地地发发挥挥中中医医药药的的特特色色与与优优势势，，将将是是今今后后有有效效部部位位新新药药研研发发的的主主要要方方向向。。在在开开发发有有效效部部位位的的新新药药中中，，单单味味药药的的有有效效部部位位是是研研发发的的基基础础。。如如果果一一个个单单位位要要进进行行系系列列有有效效部部位位新新药药的的研研发发，，应应该该先先进进行行一一些些常常用用中中药药的的有有效效部部位位研研究究，，申申请请专专利利。。如如果果单单味味药药的的有有效效部部位位能能够够开开发发成成为为新新药药，，先先进进行行单单味味药药的的开开发发，，在在此此基基础础上上，，再再进进行行有有效效部部位位复复方方制制剂剂的的开开发发，，达达到到多多快快好好省省的的目目的的。。否否则则，，常常用用中中药药的的有有效效部部位位的的工工艺艺和和用用途途都都被被专专利利保保护护后后，，即即使使有有很很好好的的处处方方或或思思路路，，也也无无法法进进行行研研发发。。413．2．3中成药二二次开发如如前所述，，名优中成成药的二次次开发是中中药创新药药物研发的的重要组成成部分。名名优中成药药的二次开开发不是简简单的改变变剂型或改改变工艺，，名优中成成药的二次次开发应该该在“精、、新、效、、优”四个个字上做文文章。“精精”，是指指精制，提提高有效成成分的含量量，降低服服用剂量，，尽可能地地将其研制制成为有效效部位的新新药，达到到质的飞跃跃，如果可可测性成分分含量难以以达到50％以上，，也尽量往往高含量研研究。“新新”，是指指剂型新，，根据疾病病治疗的需需要，从制制剂学上做做文章，提提高中药的的制剂水平平。“效””，是指疗疗效，通过过二次开发发应提高药药物的疗效效，起码与与原制剂达达到等效，，如果二次次开发，其其他工作做做得很好，，但疗效却却降低了，，这样的开开发也是不不成功的开开发。“优优”，是指指质量优，，主要表现现在：①质质量标准准有了很大大的提高，，所建立的的质量标准准能够有效效地控制产产品的质量量；②药品品稳定性和和批次间的的一致性均均有了很大大的提高。。如果能够够实现这几几点，二次次开发就是是一个很成成功的开发发。42二、、天天然然药药物物化化学学成成分分预预实实验验（一一））预预试试验验的的目目的的和和要要求求中药药化化学学成成分分预预试试验验是是指指通通过过简简单单的的提提取取分分离离和和定定性性反反应应，，初初步步检检验验某某中中药药中中可可能能含含有有哪哪些些化化学学成成分分，，然然后后按按照照所所含含化化学学成成分分的的性性质质，，设设计计有有效效成成分分提提取取、、分分离离的的具具体体方方法法。。对对预预试试验验的的要要求求是是简简便便、、快快捷捷而而正正确确。。一一般般采采用用试试管管实实验验，，由由于于植植物物提提取取液液大大多多颜颜色色较较深深，，颜颜色色变变化化在在试试管管内内观观察察易易产产生生干干扰扰，，可可另另采采用用纸纸片片法法，，把把试试样样和和试试剂剂点点在在滤滤纸纸上上，，观观察察其其化化学学反反应应后后的的颜颜色色变变化化。。如如果果还还难难以以肯肯定定，，可可进进一一步步采采用用纸纸色色谱谱及及薄薄层层色色谱谱方方法法，，把把各各类类成成分分初初步步分分开开后后喷喷洒洒各各类类显显色色剂剂，，再再加加以以判判断断，，灵灵敏敏度度也也可可提提高高。。薄薄层层色色谱谱比比纸纸色色谱谱展展开开时时间间短短，，操操作作方方便便，，更更适适用用于于预预试试验验工工作作。。43预试试验验往往往往只只能能提提供供初初步步线线索索，，其其准准确确性性受受多多种种因因素素影影响响，，主主要要表表现现在在：：共共存存成成分分相相互互干干扰扰；；提提取取分分离离方方案案不不很很完完善善；；提提取取液液中中杂杂质质多多，，颜颜色色深深，，影影响响定定性性反反应应的的观观察察；；定定性性检检出出试试剂剂不不够够专专一一；；成成分分含含量量低低，，与与检检出出试试剂剂反反应应不不灵灵敏敏；；成成分分在在植植物物体体中中的的存存在在状状态态等等。。为为提提高高预预试试验验检检出出的的准准确确性性，，可可从从以以下下几几方方面面考考虑虑：：441．预预试验验前对对药材材的性性状特特征进进行认认真观观察，，以引引起提提取检检识时时的注注意。。如黄黄色药药材可可能含含有黄黄酮、、蒽醌醌等；；红色色药材材可能能含有有蒽醌醌或其其他醌醌类、、酮类类化合合物；；具苦苦味的的可能能含生生物碱碱、强强心苷苷；具具酸味味的可可能含含有机机酸；；具甜甜味的的常含含糖类类成分分；具具涩味味的可可能含含鞣质质等。。2．制备供供试液时，，应尽量除除去杂质，，以减少成成分间的相相互干扰。。如检查生生物碱时，，可利用生生物碱溶于于酸水而与与香豆素、、中性内酯酯分离，再再用生物碱碱沉淀试剂剂检出生物物碱。453．在化学学反应检识识时，尽量量采用专属属性强的检检出试剂，，并选用几几种不同试试剂同时检检查，根据据反应结果果综合分析析。如强心心苷首选αα-去氧糖糖反应，再再配合liebermann-burchard和Beljet反应等。。在检识方方法上，可可配合TLC或PC检识，往往往可提高高检出的准准确度。4．反应颜颜色判断不不准确时，，可同时作作对照试验验和空白试试验。5．成分含含量太低时时，可配合合生物测定定方法。预试验结果果只能提供供药材中可可能含有哪哪些类型的的化学成分分，要完全全肯定某类类化学成分分，则需提提取分离得得到后再进进一步检识识。46（二）预试试验的方法法天然药物化化学成分预预试验的方方法可以分分为两类。。一类是单单项预试验验，即根据据工作的需需要有重点点的检查某某一类成分分。另一类类是系统预预试验，即即用简便、、快速的方方法，对中中药中存在在的各类化化学成分进进行全面定定性检查。。47（三）预试试验溶液的的制备1．单项预预试验溶液液的制备通常将中药药材分别用用石油醚、、95％乙乙醇和水提提取，便可可以将绝大大部分化学学成分提取取出来。（1）水提提取液：取取药材粉末末10g，，加100ml蒸馏馏水，室温温浸泡24小时，滤滤过，取少少量滤液检检查蛋白质质、氨基酸酸，剩余滤滤液和滤渣渣水浴加热热（55～～60℃））1小时，，滤过，滤滤液检查糖糖、皂苷、、有机酸、、鞣质、生生物碱盐。。48（2）乙乙醇提取液液49（3）石油油醚提取液液：取药材材粉末1g，加10ml石油油醚（沸程程：60～～90℃）），浸渍24小时，，滤过，滤滤液进行萜萜类、挥发发油、甾体体、油脂等等亲脂性成成分检查。。502．系统预预试验供试试液制备利用各类成成分极性大大小的不同同，用极性性由小到大大的溶剂连连续抽提，，将各类成成分分开。。常用的溶溶剂梯度顺顺序为：石石油醚、苯苯、乙醚、、氯仿、醋醋酸乙酯、、正丁醇、、丙酮、乙乙醇、水。。每级提取取液，可进进一步结合合化合物的的酸碱性不不同，采用用酸、碱液液处理，使使其分为酸酸性、碱性性和中性部部分。51（四）供供试液中中化学成成分的检检识各类化学学的检识识反应一一般在试试管、滤滤纸片或或薄层板板上进行行。检识识时应尽尽量采用用对寻查查成分专专属性强强的反应应，如蒽蒽醌首选选碱液反反应；强强心苷首首选Keller-Kiliani反应；；皂苷首首选泡沫沫试验等等。另外外还可结结合仪器器分析的的方法，，如利用用甾体皂皂苷的特特征红外外光谱，，可迅速速准确的的辨认甾甾体皂苷苷。521．水溶溶性成分分的检识识取中药粗粗粉5g，加50ml蒸馏水水，浸泡泡过夜，，或于50～60℃水水浴中温温浸1小小时，滤滤过，滤滤液供检检识下列列各类成成分：53（1）糖糖、多糖糖和苷类类1）Molish反应应：取1ml供供试液于于试管中中，加入入1～2滴10％α-萘酚乙乙醇试剂剂摇匀，，倾斜试试管45°，沿沿管壁滴滴加1ml浓硫硫酸，分分成两层层。如在在两液层层交界面面出现紫紫红色环环，表明明可能含含有糖、、多糖或或苷类。。2）斐林林反应：：取1ml供试试液于试试管中，，加入新新配制的的4～5滴斐林林试剂，，在沸水水浴中加加热数分分钟，如如产生砖砖红色氧氧化亚铜铜沉淀，，表明含含有还原原糖。将上述溶溶液中沉沉淀滤过过除去，，滤液加加1ml10％盐酸酸溶液，，置沸水水浴中加加热水解解数分钟钟，放冷冷后，滴滴加10％氢氧氧化钠溶溶液调pH至中中性，重重复上述述斐林反反应，如如仍产生生砖红色色氧化亚亚铜沉淀淀，表明明可能含含有多糖糖或苷类类。54（2）氨氨基酸、、多肽和和蛋白质质类1）茚三三酮反应应：取供供试液点点于滤纸纸片上，，喷雾茚茚三酮试试剂后，，吹热风风数分钟钟，如呈呈紫红色色或蓝色色，表明明可能含含氨基酸酸、多肽肽或蛋白白质。2）双缩缩脲反应应：取1ml供供试液于于试管中中，加1滴10％氢氧氧化钠试试剂，摇摇匀，再再加0.5％硫硫酸铜溶溶液，边边加边摇摇匀，如如溶液呈呈现紫色色、红紫紫色或蓝蓝紫色，，表明可可能含有有多肽或或蛋白质质。3）酸性性蒽醌紫紫反应：：取供试试液点于于滤纸片片上，喷喷洒酸性性蒽醌紫紫试剂，，如呈现现紫色，，表明可可能含有有蛋白质质。55（3）酚酚类、鞣鞣质类化化合物1）三氯氯化铁反反应：取取1ml供试液液于试管管中，加加醋酸酸酸化后，，加数滴滴1％三三氯化铁铁试剂，，溶液如如呈显绿绿、蓝绿绿、蓝黑黑或紫色色，表明明可能含含有酚性性成分或或鞣质。。2）三氯氯化铁-铁氰化化钾反应应：取供供试液点点于滤纸纸片上，，干燥后后，喷洒洒三氯化化铁-铁铁氰化钾钾试剂，，如立即即呈现蓝蓝色，表表明可能能含有鞣鞣质。喷喷试剂后后应立即即观察，，若放置置一段时时间，背背景也能能逐渐呈呈蓝色。。如欲使使纸上的的斑点保保存下来来，在纸纸片仍湿湿润时，，用稀盐盐酸洗涤涤，再用用水洗至至中性，，置室温温干燥即即可。563）香草草醛-盐盐酸反应应：取供供试液点点于滤纸纸片上，，干燥后后，喷洒洒香草醛醛-盐酸酸试剂，，如立即即呈不同同程度的的红色，，表明含含有间苯苯二酚和和间苯三三酚结构构的化合合物。4）明胶-氯氯化钠反应：：取1ml供供试液于试管管中，加入1～2滴明胶胶-氯化钠试试剂，如产生生白色混浊或或沉淀，表明明可能含有鞣鞣质。5）咖啡碱反反应：取1ml供试液于于试管中，加加入数滴0.1％咖啡碱碱溶液，如产产生棕色沉淀淀，表明可能能含有鞣质。。57（4）有机酸酸类1）pH试纸纸反应：取供供试液，以广广泛pH试纸纸测试，如呈呈酸性，表明明可能含有有有机酸或酚类类成分。2）溴酚蓝反反应：取供试试液点于滤纸纸片上，喷洒洒0.1％溴溴酚蓝试剂的的70％乙醇醇溶液，如在在蓝色背景上上产生黄色斑斑点，表明可可能含有有机机酸。如显色色不明显，可可再喷雾氨水水，然后暴露露于盐酸蒸气气中，背景逐逐渐由蓝色变变成黄色，而而有机酸的斑斑点仍为蓝色色。58（5））皂苷苷类1）泡泡沫反反应：：取2ml供试试液于于试管管中，，剧烈烈振摇摇2分分钟，，如产产生大大量持持久性性泡沫沫，再再把溶溶液加加热至至沸或或加入入乙醇醇，再再振摇摇，如如仍能能产生生多量量持久久性泡泡沫，，表明明可能能含有有皂苷苷。2）溶溶血反反应：：取供供试液液点于于滤纸纸片上上，干干燥后后，加加1滴滴2％％红细细胞试试液，，数分分钟后后，如如在红红色背背景中中出现现白色色或淡淡黄色色斑点点，表表明可可能含含有皂皂苷。。本实实验也也可在在试管管中进进行。。592.醇醇溶性性成分分的检检识取10g中中药粗粗粉，，加100ml乙醇醇，沸沸水浴浴中回回流提提取1小时时，滤滤过。。滤液液回收收乙醇醇至无无醇味味，取取1/2量量浓缩缩液，，加10ml乙乙醇溶溶解，，供甲甲项检检识。。剩余余的浓浓缩液液加10ml5％％盐酸酸，充充分搅搅拌，，滤过过，滤滤液部部分供供乙项项检识识。酸酸水不不溶部部分，，加10ml醋醋酸乙乙酯溶溶解，，醋酸酸乙酯酯液用用5％％氢氧氧化钠钠溶液液振摇摇洗涤涤2次次（每每次2～3ml），，弃去去碱水水层。。醋酸酸乙酯酯层再再用蒸蒸馏水水洗1～2次，，至水水洗液液呈中中性，，弃去去水洗洗液，，置于于水浴浴上蒸蒸发除除去醋醋酸乙乙酯，，残留留物用用15ml乙醇醇溶解解，供供丙项项检识识。60甲项检检识（1））鞣质类类：同水水溶性性成分分检识识（2））有机酸酸类：同水水溶性性成分分检识识（3））黄酮类类1）盐盐酸-镁粉粉反应应：取取1ml供供试液液于试试管中中，加加镁粉粉适量量，摇摇匀，，加2～5滴浓浓盐酸酸，即即产生生剧烈烈反应应，如如溶液液呈红红色或或紫红红色，，表明明可能能含有有黄酮酮类。。2）三三氯化化铝反反应：：取供供试液液点于于滤纸纸上，，晾干干，喷喷雾三三氯化化铝试试剂，，干燥燥后，，斑点点呈鲜鲜黄色色，如如在紫紫外灯灯下观观察，，斑点点有明明显的的黄绿绿色荧荧光，，表明明可能能含有有黄酮酮类。。3）氨氨熏反反应：：取供供试液液滴于于滤纸纸片上上或硅硅胶色色谱板板上，，置氨氨气中中熏片片刻，，斑点点呈亮亮黄色色，在在紫外外灯下下观察察，斑斑点呈呈黄色色荧光光，表表明可可能含含有黄黄酮类类。61（4））蒽醌醌类化化合物物1）碱碱液反反应：：取1ml供试试液于于试管管中，，加10％％苛性性碱试试剂呈呈红色色，如如加酸酸使成成酸性性，则则红色色褪去去，表表明可可能含含有蒽蒽醌类类。2）醋醋酸镁镁反应应：取取1ml供供试液液于试试管中中，加加数滴滴1％％醋酸酸镁甲甲醇溶溶液，，如溶溶液呈呈橙红红色、、紫色色等颜颜色，，表明明可能能含有有蒽醌醌类。。62（5））甾体体和三三萜类类1）醋醋酐-浓硫硫酸反反应：：取1ml供试试液，，置蒸蒸发皿皿中水水浴蒸蒸干，，加1ml冰醋醋酸使使残渣渣溶解解，再再加1ml醋酐酐，最最后加加1滴滴浓硫硫酸，，如溶溶液颜颜色由由黄→→红→→紫→→蓝→→墨绿绿，表表明可可能含含有甾甾体类类成分分。如如溶液液最终终呈现现红或或紫色色，表表明含含有三三萜类类成分分。2）三三氯醋醋酸反反应：：取供供试液液滴于于滤纸纸片上上，滴滴三氯氯醋酸酸试剂剂，加加热至至60℃，，产生生红色色，渐渐变为为紫色色，表表明含含甾体体类成成分。。加热热至100℃才才显红红色、、红紫紫色，，表明明含有有三萜萜类成成分。。3）氯氯仿-浓硫硫酸反反应：：取1ml供试试液，，置于于蒸发发皿中中水浴浴蒸干干，加加1ml氯氯仿使使残渣渣溶解解，将将氯仿仿液转转入试试管中中，加加1ml浓浓硫酸酸使其其分层层，如如氯仿仿层显显红色色或青青色，，硫酸酸层有有绿色色荧光光，表表明可可能含含有甾甾体或或三萜萜。63乙项检检识（1））生物碱碱类1）碘碘化铋铋钾反反应：：取1ml供试试液于于试管管中，，加1～2滴碘碘化铋铋钾试试剂，，如立立即有有棕黄黄色至至棕红红色沉沉淀产产生，，表明明可能能含有有生物物碱。。2）碘碘化汞汞钾反反应：：取1ml供试试液于于试管管中，，加2～3滴碘碘化汞汞钾试试剂，，如产产生白白色或或类白白色沉沉淀，，表明明可能能含有有生物物碱。。3）碘碘-碘碘化钾钾反应应：取取1ml供供试液液于试试管中中，加加2～～3滴滴碘-碘化化钾试试剂，，如产产生褐褐色或或暗褐褐色沉沉淀，，表明明可能能含有有生物物碱。。4）硅钨钨酸反应应：取1ml供供试液于于试管中中，加1～2滴滴硅钨酸酸试剂，，如产生生黄色沉沉淀或结结晶，表表明可能能含有生生物碱。。64丙项检识识（1）强心苷类类1）碱性性苦味酸酸反应：：取1ml供试试液于试试管中，，加数滴滴碱性苦苦味酸试试剂，如如溶液即即刻或15分钟钟内显红红色或橙橙红色，，表明可可能含有有强心苷苷类。2）间二二硝基苯苯反应：：取1ml供试试液于试试管中，，加数滴滴间二硝硝基苯试试剂，摇摇匀后再再加数滴滴20％％氢氧化化钠，如如产生紫紫红色，，表明可可能含有有强心苷苷类。653）冰醋醋酸-三三氯化铁铁反应：：取1ml供试试液于蒸蒸发皿中中，水浴浴上蒸干干，残留留物加0.5ml冰醋醋酸-三三氯化铁铁试剂溶溶解后，，置于试试管内，，沿管壁壁加入1ml浓浓硫酸，，使分成成二层，，如上层层为蓝绿绿色，界界面处为为紫色或或红色环环，表明明可能含含有2，，6-二二去氧糖糖的强心心苷类。。4）呫吨吨氢醇反应应：取1ml供试液液于蒸发皿皿中，水浴浴上蒸干，，加呫吨氢氢醇试剂，，置水浴上上加热2分分钟，如溶溶液显红色色，表明可可能含有2，6-二二去氧糖的的强心苷类类。本实验也可取取强心苷固体体样品少许，，加入1ml呫吨氢醇试试剂振摇，置置水浴上加热热3分钟，如如呈现红色，，表明可能含含有2，6-二去氧糖。。66（2）香豆素素、内酯类1）异羟肟酸酸铁反应：取取1ml供试试液于试管中中，加7％盐盐酸羟胺醇溶溶液及10％％氢氧化钠溶溶液各2～3滴，置沸水水浴上加热数数分钟至反应应完全，放冷冷，加1％盐盐酸调pH3～4，再加加1～2滴1％三氯化铁铁试剂，如溶溶液为红色或或紫色，表明明可能含有香香豆素或内酯酯类。2）开环-闭闭环反应：取取1ml供试试液于试管中中，加2～3滴1％氢氧氧化钠溶液，，于沸水浴上上加热3～4分钟，得澄澄清溶液，再再加3～5滴滴2％盐酸使使溶液酸化，，如溶液变为为混浊，表明明可能含有内内酯类化合物物。673）重氮化偶偶合反应：取取1ml供试试液于试管中中，加数滴