PCR实验室(新冠核酸检测实验室)SOP文件

XXX医院检验科基因扩增实验室标准操作规程适用部门：基因扩增实验室XX医院目 录第一部分工作制度及程序 1PCR实验室各区工作制度及程1PCR实验室人员配置及培训程4PCR实验室清洁程序 5PCR实验室废弃物处理程序 6PCR实验室生物安全防护程序 7抱怨的处理程序 8PCR实验室应急处理程序 9第二部分标准操作规程 11临床标本的采集及处理操作程11标本接收、拒收及保存程序 12实验室化学试剂的管理和配制标准操作程14标本前处核酸纯标准操作程序 16新型冠状病毒核酸检测标准操作程18人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）标准操作规24核酸扩增及产物分析检测的操作程30检测结果分析的标准操作程序 31检测结果报告程序 34实验记录管理程序 35第三部分设备SOP文件 36AU1001-96全自动核酸提取仪通道）操作流程、校准及维护保养程36乐普Lepgen-96全自动医用PCR分析系统操作流程、校准及维护保养程41净化工作台SW-CJ系列操作流程及维护保养程48博科生物安全柜操作流程及维护保养程49多恒DHG-9053BS-III电热恒温鼓风干燥箱操作流程及维护保养程54多恒HH-100干式恒温器（金属浴）操作流程、校准及维护保养程56多恒TD4Z低速离心机操作流程及维护保养程60多恒DH18R台式高速冷冻离心机操作流程及维护保养程66多恒MINI10K迷你离心机操作流程及维护保养程74多恒MIX-2500微型旋涡混/匀器操作流程及维护保养程76多恒2-96板式离心机操作流程及维护保养程78威高MSL.NC80高压灭菌器操作流程及维护保养程80紫外线消毒车操作规程操作流程及维护保养程91澳柯玛药品冷藏柜操作流程及维护保养程93澳柯玛普通冰箱操作维护规程 95移液器操作流程、校准及维护保养程97传递窗操作流程、校准及维护保养程101第四部分实验室质量控制 102实验室试剂、耗材购买管理程102试剂的质检标准操作程序 104实验耗材质检的标准操作程序 105室内质控标准操作程序 107室间质评管理程序 111责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE1111111111第PAGE1/第一部分工作制度及程序PCR实验室各区工作制度及程序目的：实现PCR实验室日常专人负责，确保实验室操作的规范性。实验室分区设置本院在检验科设置临床基因扩增实验室。按国家卫生部《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》以及《医疗机构临床基因扩剂准备、贮存区（第一区、标本制备区（第二区）及扩增和产物分析区（第三区）三个独立区域。—→第三区的扩增及产物分析区。严禁误入和逆向进入各工作区。各区的实验物品（含移液器、试管架、吸头盒、记录本、笔等签予以区别。各区配有不同颜色工作服：第一区试剂准备、贮存区为白色，第二区标本制备区为蓝色，各分区工作制度试剂贮存、准备区工作制度区进行。实验人员进入该区须穿本区专用蓝色工作服。实验中须戴一次性手套。记录实验室温湿度和冰箱的温度。收好放回冰箱内。实验中所使用的离心管、吸头等需经高压灭菌处理，应在消毒有效期内使用。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE2111111111第PAGE2/试剂准备工作完成后，将使用过的离心管、吸头置于盛2000mg/L中，消毒清洁实验台面。将准备好的试剂放入一区到二区的传递窗（注：传递窗的两扇门不能同时开启；其他区的用品不得带入本区。作好每次实验记录，书写工整详细，使用本室专用的、带有本室标识的记录本和笔。30～60分钟，记录紫外灯使用情况。标本制备区工作制度RNA逆转录合成cDNA\实验人员进入该区须穿本室专用白色工作服。实验中须使用一次性手套，手套需常更换。从传递窗中取出试剂放入冰箱冷冻室试剂存放专区暂存。记录实验室温湿度和冰箱的温度。核对标本的编号、类型和标本数量。（注：传递窗的两扇门不能同时开启；使用带有本室专用标志的加样器以及经过消毒处理的离心管和带滤芯的一次性吸头。2000mg/L有效氯消毒液的废物盒中。污染的处理：实验中若在操作台面上发生液体外泄，应立即用浸有2000mg/L的滤纸覆盖发生污染处半小时，然后用酒精擦洗，并开启紫外灯消毒。作好每次实验记录，书写工整详细，使用本室专用的、带有本室标识的记录本和笔。标本处理完成后，关闭所有仪器，记录仪器使用时间和运行状态。其他区的用品不得带入本室。30～60分钟，记录紫外灯使用情况。扩增及产物分析区工作制度cDNA的扩增、实时荧光PCR记录结果和生成检测报告等；其它操作不得在此区进行。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE3111111111第PAGE3/记录实验室温湿度。将从传递窗接收来的加好样离心后的反应管上机扩增。扩增结束后，关掉扩增仪。记录仪器使用时间和运行状态。扩增结果分析完后，在工作清单中填入检测结果。得到当天室内质控结果后，输入质控软件。作好每次实验记录，书写工整详细，使用本室专用的、带有本室标识的记录本和笔。30～60分钟，记录紫外灯使用情况。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE4111111111第PAGE4/PCR实验室人员配置及培训程序目的：保证实验室有足够数量的合格的具备开展该类实验能力的实验人员。适用范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。细则：人员要求历。实验室工作人员应参加ft东省临床检验中心举办的PCR技术培训术上岗证。PCR人员配置实验室应根据工作需要配备足够的工作人员。各级技术人员履行相应的工作职责。人员培训及考核1～21PCR术交流会议。安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。PCR实验室人员每年进行本小组内核酸扩增方面的相关培训，提升自身的理论学习水平。本实验室工作人员每年至少进行考核一次。人员管理实验室建立所有工作人员的技术档案，包括：学历、任职资格、发表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE5111111111第PAGE5/PCR实验室清洁程序目的：等的清洁消毒工作。实验室地面必须平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。范围：实验室相关人员及医院清洁工人。细则：常用的物品要容易寻找到。抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。实验结束后清洁台面，并用移动紫外灯进行消毒。每周对使用过的移液器用75%75%15分钟左右。实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用浸有2000mg/L然后用酒精擦洗，并用移动紫外灯消毒。每天实验前开启各区的通风系统，各区实验结束后，分别打开传递窗紫外灯、移动紫外灯（对实验台面消毒30～60分钟。待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。方向流程的原则来进行清洁。处理好各区废弃物，交医院集中处理。每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区的工作服隔开洗涤。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE6111111111第PAGE6/PCR实验室废弃物处理程序目的：保证实验室、实验人员和外部环境的安全。适用范围：核酸扩增荧光检测实验室常用化学试剂、、乙醇、生理盐水等室废弃物的处理；细则：性，并要求严格执行。实验室所有垃圾，装入专用污物袋内，各区备有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黄色。()，置于盛2000mg/L黄色垃圾袋内交医院集中处理。理，污染的纸集中收集焚毁，污染的布可进行高压灭菌。污水和标本不能直接流入下水道，必须经过污水处理后再流入下水道。对各种有毒化学试剂应用后，要做相应的无害化处理，防止污染环境。日常生活垃圾如纸屑等按一般垃圾交医院处理。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE7111111111第PAGE7/PCR实验室生物安全防护程序或污染。适用范围：和外部环境的生物防护程序：工作人员在实验过程中应严格遵守相应的操作规程。感染途径：空气传播：如气溶胶直接接种：工作中偶然的针刺、碎玻璃划伤直接引起传染。皮肤、粘膜接触：临床标本中的感染源通过破损皮肤，粘膜接触造成感染。预防措施：容器应完好无泄漏。标本以及试剂，应立即冲洗干净。在实验过程中，病人标本（血液、体液）或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。尽量挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施（如HBVDNA阳性时可及时注射高效价的HBV特异性免疫球蛋白。在实验过程中病人标本（血液、体液）4%84洁桌面及地面，然后用清水擦净。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE8111111111第PAGE8/抱怨的处理程序（括家属等）的返馈意见的重视，往往从中能发现实验室存在的问题或漏洞。有利于提高检验和服务质量，减少医疗差错和事故，巩固和有效改进实验室质量体系，范围：质量和实验室管理等问题的投诉或抱怨。职责：通常由实验室负责人负责抱怨的处理，必要时应会同科主任一起处理。作记录并及时报告负责人。工作流程：地址、联系方式、抱怨内容（首先注意稳定抱怨者情绪。抱怨的处理：能及时处理的抱怨应给予及时解决，记录处理结果。求妥善的处理方法，尽快答复抱怨者。抱怨的处理一般步骤：接受、安抚、倾听、回应、致歉、解释、处理、回复原则，医疗行为规范的基础上，争取抱怨者最大程度的理解。抱怨处理的善后执行人对报怨作两份记录：保留一份，上交检验科一份。对抱怨的审核遵照科内部审核安排执行。人员及时分析存在的问题，提出有效的纠正措施，并由试验室负责人负责组织执行。4.4．4实验室工作人员在向实验室负责人报怨得不到满意解决时，有权向科主任提出报怨。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE9111111111第PAGE9/PCR实验室应急处理程序目的：及时，应正确采取应急措施，最大程度上避免或减轻不利影响。适用于满足核酸扩增荧光检测实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设细则：求、维护和保养、常见故障的排除、尤其要严格按照操作规程操作。况。核实应急措施的有效性。仪器设备故障现象或确属不能立即排除的故障。用红牌故障标志标示故障仪器，以防被错误使用。有满足要求的替用设备的，启用替用设备（准用仪器联系借用并核实该设备的使用状态。替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。方技术支持人员将在规定的时间内随身携带备用设备到达现场。故障标示（暂停使用，换上绿色正常标示（正常使用。室主任须检查并随时跟踪所采取措施的有效性。得到ft东省临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检验，以满足患者和临床需求。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE10111111111第PAGE10/ 量检测，合格后方可使用。 本送至其它已得到上海市临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检查；如已影响到报告的及时发出，应在门诊取报告处向病人公告或向相关病区公告，取得病人的谅解。影响到检测报告发出的情况，应在应急处理记录表作记录。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE11111111111第PAGE11/第二部分标准操作规程临床标本的采集及处理操作程序目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。适用范围：基因扩增检验实验室的所有临床检测标本。职责：所有采集标本的人员均需按本SOP人宣教。操作程序本实验室检测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。血液标本：用真空采集管采集血液标本，病区标本由护士采集，门诊标本由门诊抽血处专人采集，血标本采集后在2足、严重溶血、采样时间过长（特别是进行RNA检测时）或出现其它不合要求的情况，应拒收标本，登记并告知相关科室。痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检（45100g/LNaCl）标本在室2424%NaOH301ml1.5ml15000r/min10min，弃上清，在沉淀中加TE1ml（自备）混匀，15000r/min10min弃上清，重复上述洗涤步骤一次。沉淀中加入50ulTBDNA提取液，震荡混匀后100摄氏度沸水浴1515000r/min10生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集生殖道拭子标本，要求病人在采样有2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2—3cm，转动一周以获得上皮细胞。将取样后的棉拭子放入含1ml无菌生理盐水离10min，弃上清，保留沉淀。1ml13000rpm离心弃上清，保留沉淀。脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。取1ml于无菌离心管中，13000rpm10min-20℃保存。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE12111111111第PAGE12/标本接收、拒收及保存程序目的：关，实验室工作人员必须重视标本的采集、处理、贮存、安全处置等全过程。范围：PCR责任向临床医护人员进行宣传培训如PCR项目选择、标本采集、运用、处理等技术要求和注意事项。标本的唯一性标识：标识由三部分构成：检测项目、标本采集日期、该检测批次的标本序号，三部分间无间隔符号，例如：B111210001分别表示实验项目、年、月、日、序号，序号（001-99，整个标识为10-11位；1-9HBV用BHCVTBTB、CTCTUUUU标本种类用中文表示：全血、血清、血浆、痰、尿、分泌物、各种穿刺物、组织等。更改后应保持旧标识可辨识。标本的接收:作人员须注意保持并随时检查容器的完整和无标本外泄发生。标识不清的标本。检验申请有不清晰情况时，应即时与临床科室或相关人员联系核实。记录本上记录拒收原因。标本的拒收:标本在下列情况下，视为不合格，工作人员有权拒收标本；①无被检标本基本信息或与申请单不符合（姓名、年龄、性别、住院号、检验项目等）②使用不适当的容器；责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGPAGE13/③容器有破损；④标本外泄污染；⑤标本溶血；⑥标本量不足⑦其它如后续处理过程中发现的不合格，应记录其状态并通知临床重新送检。对拒检的不合格标本应登记在拒收标本记录本上。填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检科室。必要时电话告之相关科室医生或护士。标本的保存:处理前的标本保存：）HB：全血样本可℃下短期2周）保存，或分离出血清（血浆-2℃下。b）HCV1200µl，-20℃。尽可能快的提取RNA。-20℃下。处理后的痰或胸腹水、脑脊液、脓液用于TB检测的标本可置于4℃下短期保存。长期保存于-20℃下。d）CT和UU：处理后的沉淀标本可置于－20℃下短期保存。报告发出后的标本保存：a）提取的核酸标本当天检测可置4℃保存，如当天不检测应置-20℃保存。报告发出后丢弃。b）原始血清/血浆样本在报告发出后放入低温冰箱-20℃保存3个月，以备查。超过3个月保存期的标本由室负责人酌情处理，一般按生物传染性物品交医院统一处理。c）血清/血浆标本放置低温冰箱保存时须有记录，按检测项目分类存放，并由专人负责管理。|责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGPAGE14/实验室化学试剂的管理和配制标准操作程序1目的：保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。％NaOH74%84有效氯溶液等。管理程序：发现有试剂过期或明显变质时要立即报废，并将报废试剂妥善处理。用到的一些化学试剂则根据要求保存于不同环境（如预冷乙醇保存于4℃。PCR试剂一律贮存于-20℃。注意分类、分区保存、关注失效日期和使用后的及时清洁等。配制用具1000ml架，250ml、1000ml配制步骤4%NaOH4NaOH200ml100mlNaOH摇荡三角烧瓶使NaOH250ml4%8450ml40ml841000ml960ml842000mg/L本室采用片剂配制有效氯溶液，根据实际配制液体体积加入适当数量片剂。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGPAGE15/1%-2%甲基橙溶液2200ml100mlc.摇荡三角烧瓶使甲基橙固体充分溶解。d.然后缓缓倾倒入250ml广口瓶中密封保存备用。75％酒精溶液75％酒精由医院库房提供。RNA75％酒精的配制，试剂盒提供DEPCc.根据当天的标本数量配制。注意事项：每份配制好的溶液保质期为14天。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE16111111111第PAGE16/标本前处理(核酸纯化)标准操作程序目的规定DNA和RNA核酸样本提取和纯化实验应遵守的操作。适用范围从人体体液、细胞、组织等标本大批量提取和纯化DNA和RNA定义和术语DNADeoxyribonucleicAcid即脱氧核糖核酸,是遗传信息储存及传递者。3.1RNARibonucleicAcid由脱氧核糖核酸（DNA）为模板转录合成的核糖核酸的片断。职责实验技术员负责从不同样本中提取和纯化DNARNA。见正文内容6.正文实验室设置不同工作区内的设备物品如加样器、试剂等的移出移进造成不同的工作区间发生交叉污染。→标本保存区。时，应假定样本可能含有病原微生物，样本DNA提取工作应参考P2级实验室操作规范进行。工作区域功能和设备试剂贮存和准备区该工作区用于贮存溶液的制备、溶液的分装。本工作区仪器设备配置应包括如下：4-20（覆盖1～1000μl各个容量的加样器（紫外灯；专用办公用品、专用工作服和工作鞋；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头等。提取区责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGPAGE17/该工作区用于标本贮存、核酸提取。本工作区仪器设备配置应包括如下：420（1～1000μl各个容量的加样器、核酸提取仪、可移动紫外灯（近工作台面；超净工作台和超声波水浴（处理大分子DNA）,专用办公用品、专用工作服和工作鞋；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头等。质量分析区该工作区用于核酸浓度和纯度测定。本工作区仪器设备配置应包括如下：核酸分析仪；微量加加样器若干支（覆盖～10μ；专用办公用品、专用工作服和工作鞋；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、离心管和加样器吸头等。标本保存区该工作区用于标本贮存。本区仪器设备配置应包括-80℃冰柜。RNA酶污染源及预防实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA1808长时间（玻璃器皿。对于塑料制品等不适合高温烘烤的材料，使用RNA酶的抑制剂焦碳酸二乙酯0.1%DEPC水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。灌满DEPC的玻璃或37212115分钟。预防研究人员造成的污染RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时，主要涉及RNA“”就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。防止溶液的污染用高压灭菌的水和RNARNA0.1%DEPC3712100℃加热1515lbf/in2（1.034x105Pa）15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因此不能用来处理含有Tris一类的缓冲液。核酸标本保存质检完毕后，打印条码贴于样品冻存管外壁，置于-80℃保存，可保存5年以上。做好标本贮存登记。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGPAGE18/新型冠状病毒核酸检测标准操作程序目的在当前新型冠状病毒肺炎疫情期间，规范PCR结果的正确可靠。范围适合于检验科PCR实验室。职责检验人员负责按照本检测细则对被检样本进行检测；复核人员负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；专业组负责人负责对专业组综合管理和检测报告的审核。检测流程核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护的穿戴）穿戴流程：在基因扩增实验室的清洁区（更衣区）或者普通实验室的洁净区，工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医用N95进入样本处理工作区域或实验室。要点提示：选择在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。需佩戴医用N95口罩，若无医用N95口罩，可以考虑用普通N95/KN95的组合方式，但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。佩戴N95正确。衣，穿衣时需由他人协助。入普通实验区域或办公区域。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE19111111111第PAGE19/样本的灭活处理操作流程：两名完成三级防护的工作人员，进入样本处理区或样本处理专用实验室，将接收到的样本二级包装56℃下30分装和用于核酸提取。要点提示：人提供必要的协助。主操作者应避免反复多次进出安全柜。全柜外打开和操作。应特别检查采样管是否拧紧、有无样本溢漏等情况。样本管每次进出安全柜均需对外表面进行消毒。在安全柜内配备一次性吸水台布。样本的核酸提取A、手工核酸提取操作流程、洗液和carrier。按照要求，分别向洗液12中加入分子生物学级别的130ml和160ml的无水乙醇并及时做好标记l（AV溶解支的Carrier样本裂解：560μlAVL1.5ml无菌EP5.6μl配制好的CarrierRNA，140μl样本（例如咽拭子、血浆等），混匀振荡1510分钟，充分裂解样本中的核酸。将EP560μl无水乙醇，充分混匀15630μl6000g）1分钟，转移离心柱责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE20111111111第PAGE20/630μl（630μl裂解产物过滤收集在一个离心柱上）。500μl6000g）1分钟；换新500μl2（AW2）6000g）1分钟；换新收集管14000rpm（20000g）32（AW2）；最大转速（20000g）12（AW2）。1.5ml无菌EP18000rpm1分钟回收核酸，以备PCR检测使用。要点提示：新鲜裂解液的配制应尽可能在专门的洁净区域或单独的实验室进行。要用分子生物学级别的无水乙醇试剂进行配制。切忌出现溢洒后污染到离心柱的密封圈，这可能会导致乙醇残留，抑制后续PCR反应。从离心机中取出离心柱时应小心操作，避免离心柱下缘被收集管中的滤过残液污染。2残液，确保洗脱核酸的纯度。的产量。剂。样本处理过程中，工作人员觉得有必要时，应随时更换新的外层乳胶手套。B、采用核酸提取仪提取核酸的操作流程根据核酸提取仪和试剂的说明书准备好提取试剂，取200μl样本上机提取核酸，并按照要求回收提取好的核酸备用。要点提示：不同的提取仪器和试剂的提取效率可能存在差异取操作。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE21111111111第PAGE21/在安全柜外的核酸提取仪，则一定要做好生物安全防护及样本的防污染保护。PCR体系的配制和模板加样操作流程：在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的专用实验室，配制PCR将试剂盒的不同组分（一般包括反应液、酶、引物等）按照各自必须的体积量进行配制混合，充分混匀并离心后，通过传递窗传递到核酸提取和加样区，或由专人从试剂配制实验室送至核酸提取和加样专用实验室。在加样专用生物安全柜内，根据检测样本例数分装体系到每个反应管中，逐一将PCR3个阴性对照。要点提示：污染的可能。试剂配制时要根据检测样本数量进行合理配制，每批次检测均需要包括3个阴性对照和1对照的试剂，同时还需要考虑试剂分配过程中的正常损耗等消耗。/或至少使用专用安全柜进行加样。体系分装建议每次更换新的吸头，避免反复使用带来体积误差和交叉污染。应配置体系加样登记表，确保加样过程准确无误。●PCR密闭管盖应特别谨慎，建议更换新的手套，防止手套等接触管盖内部带入污染的风险。上机检测及结果分析操作流程：在扩增区或专用扩增实验室，由专人取出配制好的PCR照试剂盒说明书设置扩增参数并分析判读结果。进行结果分析时，应认真阅读试剂盒说明书，在了解该试剂盒的灵敏度、检测方法和局限性等技术特点的基础上，结合该批次阴性质控的结果，综合PCR管严禁开盖或带离责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE22111111111第PAGE22/理。要点提示：提取、试剂配制区域有严格的物理分割。使用。熟悉检测用PCR仪器的基本性能和特点，能客观分析判断检测结果。检测后的消毒处理操作流程：在完成样本核酸提取后，应在安全柜内用75%消毒酒精对外层手套进行消毒0.5%~1%75%酒精擦拭安全柜台面、移液器等安全柜内全部仪器的表面。将安全柜内产生的新型冠状病毒相关医疗垃圾经3层包装后，转移至实验室的专用医疗垃圾桶中。开启紫外灯照射生物安全柜，时间应大于30分钟。0.5%~1%75%压处理。0.5%~1%75%30分钟的空间消毒。在缓冲区戴新的外层手套，摘护目镜置于75%酒精浸泡消毒，从头于新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。所有新型冠状病毒相关医疗垃圾均需经湿热高压灭菌后再作为责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE23111111111第PAGE23/格区分，在高压灭菌专用区域对新型冠状病毒医疗垃圾进行湿热高压灭菌处理，高压参数为格区分，在高压灭菌专用区域对新型冠状病毒医疗垃圾进行湿热高压灭菌处理，高压参数为121℃、30分钟。高压要做物理、生物指示，以确保高压灭菌的效果。4.6.2要点提示：生物安全柜内是风险最高区域，操作者的外层手套经消毒后必须脱在安全柜内。理，特别是实验后的手卫生环节。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE25111111111第PAGE25/人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）标准操作规程1.0目的规范人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）操作程序。2.0范围临床基因扩增实验室对HPV样本进行基因分型检测的操作。3.0职责取得临床基因扩增检验上岗证的实验室人员负责本规程的实施。内容样本收集标本类型生殖道脱落细胞（如宫颈口、尿道口等部位脱落细胞。采样方法对可疑生殖道HPV将棉拭子（或宫颈刷）3～4将采样棉拭子（或宫颈刷）浸入盛有1ml无菌生理盐水的样本管中，充分漂洗。将棉拭子（或宫颈刷）贴壁挤干后丢弃，立即送检。标本保存4℃246-70℃保存，避免多次冻融。样本处理标本预处理13,000rpm5留沉淀物。（注意：-20℃保存的标本，应置室温自然解冻后再使用）DNA25μl。1.150μlHPVDNA匀；然后沸水浴（或干浴）10将上述样本管置离心机中，13,000rpm10（DNA品，备用。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE26111111111第PAGE26/DNA建议DNA样品立即用于PCR检测，否则4℃保存；当天不检测的样品，-20℃保存。PCRPCR根据待检测总样本数（包括对照品和临床标本）和表1，配制PCR反应混合液。（注意：实际计算用量时应计入损耗量。PCR28μlPCR组份单份用量(μl)HPVPCR27.6Taq/UNG组份单份用量(μl)HPVPCR27.6Taq/UNG0.4加样2μlDNAPCR立即用于检测。（-20℃保存的DNArpm离心1）PCR将待检测反应管小心置于PCR扩增仪中，按表2要求设置PCR扩增参数。步骤循环数温度时间11步骤循环数温度时间1150℃2min2195℃10min95℃30sec34052℃45sec65℃30sec4.44DNA杂交165℃5min4.4.1准备B55℃预热。准备湿盒：责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE27111111111第PAGE27/建议制作方法：用适当大小（不小于20cm×15cm×10cm）的带盖塑料盒，内置吸水纸，加水浸湿，以无流动水为宜，55℃预热。注意：在基因芯片的温育操作中必须用湿盒保湿，切忌湿盒干燥！基因芯片定位96（黑色定位点面朝上，定位点正对孔内左下角。芯片孔指已定位芯片的孔位。注意：转移芯片时应避免器械接触芯片中心区及污损芯片！预杂交：100μlB，55℃15变性：30μlPCR10中和与杂交：100μlPCR（60μl摇动混匀。55℃30清洗150μlB，3次。注意：应使芯片孔内温度不低于20℃，否则影响清洗效果！显色准备试剂AB37℃预热。配制酶标工作液4A3注意：实际计算用量时应计入损耗量。表3配制酶标工作液用用量1份检测用量24酶标原液1μl24μl洗液A100μl2.4ml酶标100μl3.5，37℃30体。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE28111111111第PAGE28/清洗150μlA，31150μlC，3注意：应使芯片孔内温度不低于20℃，否则影响清洗效果！显色50μlA50μlB，5150μlC，1风干45℃风干。注意：请确认风干后检测检测与分析检查确认芯片孔内基因芯片均为正位，用HPV分型基因芯片检测阅读系统对基因芯片检测并分析。检验结果的解释质量控制基因芯片点阵说明基因芯片的探针点阵共包括35个点。基因芯片点阵说明见表4。表4基因芯片点阵说明符号符号名称数量功能+VE阳性定位点3-VE阴性定位点1HB内对照点216、1829种HPV检测点29质控点，杂交显色后显色质控点，杂交显色后不显色质控点，对人DNA显色对29HPVDNA显色质控品检测结果+VE，-VE，HBHPV（2）HPV16（3）责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE29111111111第PAGE29/如果检测结果不符合上述要求，则本次检测结果无效。质控品异常分析及处理1）3个阳性定位点中一个或多个缺失或者不显色，检测结果无效，应重新检测。HBHPVPCRDNA阴性对照或阳性对照结果不符合质控要求，应检查操作或试剂是否正常。结果判断HPVINS如下：INS＜11.0：HPVHPV（本试剂盒检测29HPV多种。注意事项操作前应详细阅读本操作规程，严格遵守操作要求，以免影响结果判断。使用前将-20℃2-8℃温。所有试剂应混匀后使用。各试剂启用后，应按要求的储存条件和效期储存和使用。A、洗液B、杂交中和液和显色液B前应按要求预热充分溶解结晶。96（探针点阵在吸干操作中，应尽量吸净孔内残留液体，避免残留液体对后续过程的影响。检测芯片前应确认芯片已风干。湿盒应有较好的密封性，以防盒内干燥。准备专用废液缸（0.1N，用于处理杂交过程中产生的废液。样本采集保存和运输必须遵守国家相关法规。式处理，不可与其它废物混杂。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE30111111111第PAGE30/专用设备和物品，不可交叉使用，使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服。70%责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE31111111111第PAGE31/核酸扩增及产物分析检测的操作程序一、目的：规范PCR准确性。二、适用范围：临床基因扩增检验实验室的检测标本。三、职责：四、程序：1、本实验室所用核酸扩增方法为PCR法。2、核酸的提取，按“标本的处理标准操作程序”进行。3、PCR试剂的准备，按所用试剂说明配制，同时做试剂空白对照。4、在加样区将模板加入反应管中，同时做阴、阳性及空白对照，在PCR扩增区扩增，PCR仪按“仪器设备的标本操作程序”操作。5、产物分析方法为实时荧光定量，所用仪器为乐普Lepgen-96，扩增完成后进入分析窗口分析结果。6、基线的确定：取3～8或3～9个循环的荧光信号。7、阈值的设定：原则以基线刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点为准8、质控标准：、四个阳性参控品的Ct值都应小于28。标准曲线的拟和度应大于等于0.990，否则视为定、阴性对照、空白对照的扩增曲线应平坦，否则结果无效。9、结果判断：、检测标本中核酸阳性时，按实际结果报告。<试剂最底检出下限。、对可疑结果应待查，需要时与临床联系。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE32111111111第PAGE32/检测结果分析的标准操作程序目的因，加强实验的可靠程度。适用范围本规则适用于实验结果判定标准2002试剂使用说明书职责由经培训合格的临床基因扩增实验室技术人员负责操作。结果分析标准程序性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）——量结果——登记，发报告。整体曲线的观察将所有曲线选中进行整体观察①观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染，特别应注意大量曲线在同一Ct的情况。②观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。空白对照的分析空白对照：仅含扩增反应混合液的管作用：监测扩增试剂是否发生污染阴性对照的分析阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。阳性对照的分析阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。阳性室内质控品的分析阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知浓度的阳性室内质控血清。作用：用以监控日常实验的精密度。阳性标准品的分析实验中存在较大人为误差。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE33111111111第PAGE33/观察各曲线的Ct①若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（过期或保存条件不合格。②出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。103标准品，用作以下三方面监控：是否存在操作误差，如加样量过少等原因导致103标准品未能检出；是否存在稀释后的梯度放置过久，低拷贝标准品降解的情况；是若高拷贝标准品出现Ct单个曲线的判断（27个循环后Ct值出现上涨且平台趋势不明显或上涨幅度比较低的标本。可疑标本要第二天重做，两次结果一致则报阳性，否则结果报阴性）得出定量结果标本因荧光曲线假性上扬而得出的假阳性结果和某些弱阳性标本因终末荧光值过低而显示的假阴性。6.同批同次实验结果的判断程序品4个梯度17、16、1、10。实验结果无效的判断标准阴性对照扩增增长。阳性对照没有扩增增长。大批甚至所有的标本都扩增增长了。室内质控血清检测结果出现失控情况，实验失控的具体标准详见《室内质控标准操作程序出现上述四种情况中的任何一种或多种，当日实验结果不可发报告，查找原因，重做实验，并做好记录。实验结果有效的判断标准阴性对照没有扩增增长，阳性对照扩增增长。阳性标准品梯度曲线平滑均匀，斜率、截距和相关系数三个参数的数值均在范围内。室内质控血清检测结果处于在控状态，具体标准详见《室内质控标准操作程序责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE34111111111第PAGE34/准均达到要求后，当日实验有效，可以发放检验报告。7.7.1.失控情况处理如发现质控数据违背了控制规则，操作员应填写失控记录或失控报告单，上交专业室主管，由专业主管做出是否发出与失控质控品相关的那批患者标本检测报告的决定。7.2.失控原因分析后再签发字发出。当得到失控信号时，考虑采用如下步骤去寻找原因：立即重测定同一质控品 此步骤是用以查明是否为人误差或偶然误差如是偶然误差则重测结果应在允许范围(在)。如果重测结果仍不在允许范围，应进行下一步操作。打开一瓶新质控品，重测失控项目 如果新开的质控血清结果正常，那麽原因的质控血清可过期或在室温放置时间过长而变质，或被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步骤。检查仪器状态、清洁扩增槽。如不行，进行下一步。检查试剂此时可更换试剂以查明原因，如不是试剂问题，进行下一步。仪器厂家联系请求他们的技术支援。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE35111111111第PAGE35/检测结果报告程序目的清晰。适用范围：本程序适用于本基因扩增检验实验室所有临床检测项目的结果报告。职责PCR工作程序：检测结果的报告应准确、清晰、明确、客观和及时，杜绝虚假报告。PCR质控品判断PCRSOP才可发出报告，否则应重新测定。/ml，如结果高于测定方法线性范围上限，则对样本稀释后能报告为“0”假报告单。人送至各病区。当临床科室要求电话报告结果时，应先确认对方身份，核对其所查询的病人姓名、ID及邮政编码等，并作记录。实验室工作人员应为患者的检测结果保密，不得提供给非相关人员（查询或复印。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE36111111111第PAGE36/实验记录管理程序目的保存状态在控，特制订本文件。适用范围验记录包括电子记录和文本记录。职责4.工作程序：病人和标本信息：接收标本后，在“标本接收记录本表”中记录病人和标本信息，包括：送检日期、病人姓名、性别、年龄、病人收人姓名等，对不符合检测要求的标本在“标本拒收登记本”上记录，并及时通知病人。备查找。（如保存路径要清晰、便捷、易查找。一整年的实验结果均保存在一个年度文件夹里，如“2005”文件夹；每个年度文件夹又包含129“14等情况，每个月的实验结果记录文件都要用移动存储设备（如软盘、USB硬盘等）PCCD标本原始检测申请单最后保存于扩增区，至少11实验记录要真实，不得随意涂改，如确需更改，应在原更改内容上划双线，填上新内容。实验记录须妥善保存，不得给他人借阅或复印（涉及医疗纠纷处理除外。超过保存期限的实验记录，由室负责人交科里统一保存。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE37111111111第PAGE37/第三部分设备SOP文件AU1001-96全自动核酸提取仪通道操作流程、校准及维护保养程序仪器型号:百泰克AU1001-96全自动核酸提取仪通道）目的:保证全自动核酸提取仪的正确和正常使用。适用范围制定依据:全自动核酸提取仪器操作使用说明书职责:由经培训合格的临床基因扩增实验室技术人员操作仪器。仪器操作程序：主菜单仪器上电开机后，进行自检，进入主菜单操作界面。该界面主要包括仪器功能及文件快捷方式：运行程序”紫外灯程序编辑”“用户权限、“注销”、“回归原点”；下面的一行是所设定文件的快捷方式：运行程序准备工作将深孔板放入对应板位，缺口一侧朝向圆周外侧，转盘位置可通过点击设备旋转按钮，左旋和右旋进行调整。★96孔深孔板缺口朝外★磁棒套推入到底运行文件在主界面轻触“运行程序”，或者通过左右箭头选择程序后点击“进入”也可以直接点击快捷方式中的程序进入程序运行界面。通过“上一页”和“下一页”按键切换页面。1 点击下载载入已经设定好的程序。XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第37页共111页2 点击 开始运行程序。在运行过程中,当前运行步骤会变为绿色。暂停运行文件

会变成 ,表示程序正在运行。在文件运行状态下，轻触按键 ，程序暂停至当前步骤，同时按键 变为按键 ；若要继续运行此程序，轻触按键停止运行文件并复位

，程序则由此步骤继续运行，同时按键变为按键 。在文件运行状态下，首先轻触按键 ，程序暂停至当前步骤，同时按键 变为按键 .然后轻触按键 ,磁力架回到初始位置。文件运行结束,板定位坐上取下。紫外灯设置在主菜单中，轻触“紫外灯”，进入紫外灯控制界面，设置紫外灯好杀菌时间后，轻触“打开”按键，打开紫外灯进行消毒；同时开始倒计时。轻触“关闭”按键，关闭紫外灯。当所设置的杀菌时间到后，紫外灯自动关闭.轻触按键注意：请勿直视紫外光！程序编辑在主菜单中，轻触“程序编辑”，即进入程序编辑界面。新建程序

,返回主界面。轻触空白位置,会弹出键盘,输入新程序名称(字母或者数字,最多可输入十个字符)第37/111页XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第38页共111页输入完成,点击 确定,然后点击程序更新后保存。点击 ,进入新建的界面。根据需要运行的程序进行参数设定：工位可选1-6；等待时间和混合时间为0～999min，混合速度为一~五,一最慢,五最快；磁吸速度为快、中、慢；参数设置完成后，轻触 进入温度设置界面根据需要运行的程序进行参数设定。温度设定好后，点击关闭，使其变为打开。当机器温度超过设定值时，散热器开始工作。温度设置完成以后，点击下载，保存，以保存新设置好的程序。修改程序在程序编辑界面修改打开程序编辑界面，点击进入需要修改的程序，进行修改，修改完毕后点击下载，保存，以保存修好的程序。在程序运行时修改在程序运行时，点击需要修改的参数，进行修改，修改完毕后点击下载，程序将会继续按照修改后的程序运行。6.5关闭按电源总开关关闭仪器。电源总开关在仪器的后背板左侧上方（见图3）。品来处理。用软布或纸巾蘸取70~75%酒精，擦拭转盘和邻近的仪器表面。一旦将污染试剂滴到转盘上，用70~75%酒精消毒。第38/111页XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第39页共111页维护保养程序定期保养和维护日常维护，时刻保持仪器无灰尘和液体残留。建议不要使用烈性清洁剂，会导致仪器表面涂层的破坏。70~75%酒精的湿布或者温和的清洁剂即可。若仪器上沾有盐溶液，有机溶剂，酸碱溶液，要立即擦拭掉，以保护仪器免受损坏。仪器涂层表面用实验室常规的清洁剂就可清洗，只要按照试剂的使用说明稀释适当比例即可。千万不要将涂层表面长期暴露于强酸以及高纯度乙醇！仪器触摸屏用温和的实验室净化剂清洗。塑料实验舱门和表面用乙醇或者温和的实验室清洁剂清洗。高压消毒仪器的任何部分。如何清洗磁棒磁棒的清洗可以用SDS，肥皂水或者乙醇浸泡过的软布或纸巾。如何清洗实验舱实验舱的清洗可以用SDS，肥皂水或者乙醇浸泡过的软布或纸巾。一次性耗材使用后处理对污染性耗材的丢弃应遵循当地相应法律法规。样品可能具有潜在污染性。所有使用过的深孔板，试剂条，移液器的枪头，一次性手套，磁棒套，口罩等，作为生物危害类废品丢弃。消毒方法如果存在任何生物污染性物质污染的风险，必须遵照如下或相应的程序进行操作。我们强烈建议当仪器从一个实验室搬到另外一个实验室前进行彻底的消毒处理。消毒处理对于仪器的正常运行不是必须的。消毒剂甲醛溶液10%乙醇Virkon1-3%戊二醛溶液70%4%氯胺-T第39/111XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第40页共111页经常使用一次性手套，穿防护衣在通风良好处操作。消毒步骤：闭电源，取下电源线。070%的乙醇润湿过的布对仪器表面进行消毒。0仪器放置在一个大的塑料袋中，保持仪器实验舱门打开。m第一步准备的布放于袋中，不要和仪器接触。l紧袋子至少24小时。仪器从袋中取出。温和的清洗剂清洗仪器。70乙醇清楚污渍。成上述步骤后，在运输包装里外均贴上有日期编号消毒标示证明。4 返修包装要求准备将仪器运回维修，需注意：告知是否曾使用过生物危险品。事先对仪器进行消毒，并附上签有姓名和日期的消毒证明。仪器内部用泡沫内衬固定好。按照说明书包装仪器。使用原包装以确保运输中不会损坏，任何损坏将导致额外的人工费用和材料费用。2在与经销商或百泰克生物维修部门联系后，要注明仪器故障。0仪0程序：期联系百泰克厂家工程师对仪器进行校准操作。准合格后方能进行操作。4 条% 件戊为二：醛 -溶 4液 0（ ～或 + 第40/111页者 7当 0℃地责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE41111111111第PAGE41/Lepgen-96PCR操作流程、校准及维护保养程序1、目的Lepgen-96PCRLepgen-96全自动医用PCR分析系统的操作方法，制定本标准操作规程。2、范围本标准操作规程适用范围只限于北京乐普医疗科技有限责任公司生产的Lepgen-96全自动医用PCR分析系统使用单位及科室。3、预期用途Lepgen-96PCR测试剂盒荧光探针法）如ALDH2、CYP2C9CYP2C19、、VKORC1设备用于进行实时研究。4、设备工作原理全自动医用PCRDNA变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，NCt值，同时利用数个已知DNA模板浓度的标准品做出的DNA贝数。5、运行环境为保证仪器的正常运行，仪器必须在满足下列各条件和维持相应环境的情况下使用：5.1无强电磁场干扰源，干净、干燥、无腐蚀性气体的环境下使用。5.2环境温度：10℃-30℃,相对湿度：<85%2000m责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE42111111111第PAGE42/存储温度：-20℃~555.5大气压力：78.9kPa～101.3kPa适配器输入电压：AC220V～、50Hz6、使用操作规程测试前检查确认工作台水平且稳的，同时避免阳光直射，远离加热设备，远离粉尘220V电源连接。确认与电脑的连接线连接正确。操作环境过程能保证生物安全软件简介及操作首次使用本软件软件安装PCR分析系统软件安装包。双击软件安装包，弹出安装对话框，3) 点击“确定”点击“下一步”“”，出现如下安装界面，等待安装完成即可。完成PCR分析系统软件。驱动安装首先，串口线不连接电脑“全自动医用PCR\Drivers文件，3）“”“””，会出现驱动安装界面，完成即可软件主界面介绍将全自动医用PCR分析系统电源连接线连接220VCRXX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第43页共111页入Windows的LepuPCR标 界创建实验15uL。将样本放入仪器的样本池中。2“新建实验”，点击任意实验类型，自动跳转到新建的实验界面，该界面以流程化的方式指导用户进行实验设计。实验设计实验设计由实验信息、板孔设计、样本列表和加热程序组成，实验信息实验信息界面，主要用于编辑和显示实验的基本信息和仪器设置信息，(月日_时分秒)等。算法设置：可以设置为相对荧光值法和绝对荧光值法。实验设置：设置样本量，设置是否使用热盖，设置控温模式。数据设置：设置患者信息是否保存到数据库中。板孔设计板孔信息以及通道设置，在反应孔板中选择试剂对应的反应孔，被选中的反应孔背景变成深灰色。1Ctrl个反应孔，还可以用鼠标拖动选择反应孔板上对应的区域按方向键可以进行上下左右的移动。在项目信息选项卡中，选择要进行的检测项目。3.2自行进行项目的创建。在患者信息选项卡中，输入患者编号、姓名、性别、年龄等信息。在板孔信息选项卡中，用户可以修改板孔类型、样本编号、样本类型。样本列表点击“样本列表”选项卡进入样本列表界面，用于显示当前所有样本的各项信息，第43/111页XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第44页共111页加热程序点击“加热程序”选项卡，进入加热程序设置界面，加热程序可以进行导入和导出的操作。加热程序常用编辑点击““新骤。建

” “删除

以删除步双击步骤中的温度框 可以修改温度或者拖动温度横线也可修改温度双击时间框行可以修改时间，并在需要进行荧光测试的步骤勾选即可；双击循环数段（ 。”字段名描述有效值运行段字段名描述有效值运行段由1个或多个步骤组成的温1-9个度循环循环数当前运行段需要重复的次数1-99个步骤由目标温度及其保持时间组成。1-99个目标温度4℃-99℃性温度、延伸温度和退火温度保持时间温度到达目标温度后，需要维00:01-99:99持的时间。检测荧光运行到该步骤时需要收集荧光一个运行段中仅有信号一个步骤能选择检测荧光可以在所选程序段之前添加 熔解曲线是样品从一个温度值缓慢上升1个普 运行段 到另一个温度值，同时全程扫通 描荧光信号、实验运行恒实温验、设扩计增完等成

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责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第45页共111页实验运行界面可以查看原始曲线、板孔列表、实验状态、实时温度曲线和加热程序等信息。结果分析实验运行结束后，仪器会自动打开热盖，点击工具栏的“数据分析”或点击“结果分析”选项卡，将会跳转到结果分析界面，该界面可以查看扩增曲线、板孔列表、结果判定列表等信息。查看并分析实验结果上选择全部或部分样本后将分别显示已选定样本的数据信息和曲线信息强调显示，并且，用户将鼠标悬停在曲线上方时还将显示该曲线的详细信息。（BMP“复制图片”可使当前曲线形成图片并保存至剪切板，用于文档编辑等操作。可将曲线对应数据以Excel扩增曲线设置：点击“扩增曲线设置”数以及是否数字滤波，如下图：实验数据的导出及保存点击工具栏“导” ，可将当前实验文件数据导出Excel文件。用户可自定义配置导出哪些数据，下图显示了可导出的内容，不同的分析类型可导出项可能不同。点击工具栏“保” ，可以保存另存为当前实验也可以将当前实验保存模板。实验报告界面选择同一患者的实验数点击“模板编辑”，可以修改当前打印模板，点击“打印预览”可以查看当前报告预览，点击“打印”可以打印纸质报告。打开近期实验在主界面中，点击“近期实验”列表中的某个实验，可以直接打开该实验，点击“清空”可以清空近期实验列表，打开近期模板第45/111页责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE46111111111第PAGE46/在主界面中，点期模板，项目管理在主界面中，点击菜单栏设置项目管理界面中，点项目信息：项目名称：自定义项目名的输入；中文名称：自定义项目中文名称的输入；试管数量：单人份样本包含的试管数量；通道信息：设置该项目对应的通道、染料、曲线颜色和交叉干扰。交叉干扰用于校正多色实验（多通道实验通道间可能存在的交叉干扰，用户可参考试剂厂商提供的可通过设置各通道间的测试荧光值，从而消除通道之间的干扰，也称为颜色补偿校正。结果判定设置项目管理界面中，选择一个项目，再点击“结果判定设置”，会弹出该项目的结果判定设置界面，列表中，用户可以修改样本类型、判断对象、参考范围以及结论，也可以点击“新增”来增加多个结果判定。染料管理检测通道激发-发射波长检测通道激发-发射波长适用染料通道1470nm-510nmFAM，SYBR-Green通道2530nm-565nmHEX，JOE，VIC，TET通道3585nm-620nmROX，Texas-Red通道4630nm-665nmCY5在主界面中理系统中的所有染料，如查看、编辑、新建染料等。用户选择某行染料，点击“编辑”可以设置设置染料名称、通道以及备注。6.3软件应用PCR分析系统软件支持绝对定/了前面部分内容后，可按本部分的指导进行具体的实验操作。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE47111111111第PAGE47/7、质量控制目的为保证检测结果准确性、可靠性良好，并规范全自动医用PCR分析系统及试剂检测的操作方法。适用范围本操作法适用于北京乐普医疗科技有限责任公司生产的全自动医用PCR分析系统（Lepgen-96）操作。操作规程:每次实验时都应添加一个阴阳性质控。质控规程，按照试剂中的质控品要求操作8、全自动医用PCR分析系统清洁及保养为保证设备的正常使用以及长期的稳定，在设备使用前后进行设备常规保养维护：设备表面清洁75%擦拭进行清洁。请用无尘布清洁设备的边角，设备周围的废屑、杂物、脏物要清扫干净；反应孔清洁PCR3个月一次，可用吹尘球轻轻吹拭。为了防止灰尘进入反应孔，仪器不使用时，必须关闭滑板，并套上防尘罩。75%酒精擦拭干净。请勿打开设备进行清洁。9、仪器校准程序：每年定期联系百泰克厂家工程师对仪器进行校准操作。仪器校准合格后方能进行操作。责任部门：检验科XX医院SOP责任部门：检验科XX医院SOP文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页码：第PAGE48111111111第PAGE48/净化工作台SW-CJ系列操作流程及维护保养程序目的:为洁净工作台的使用，操作与保养建立标准操作规程。为洁净工作台的使用，操作与保养建立标准操作规程。2.安装要求：电源：AC220V50HZ插座10A有效接地30CM作业前准备:首先检查电源插头是否可靠地插入插座中。新仪器使用前应先用70-7530操作步骤：送风：接上电源，即进入上电状态照明键20-25CM4.5结束作业：作业结束时，请保持风机运行十分钟，按动“4.5结束作业：作业结束时，请保持风机运行十分钟，按动“送风”停止风机运行；再按动“照明／紫外开关”关闭紫外灯和荧光灯，拔出插座。操作注意事项：带移门的超净工作台操作时，移门开启高度虽无明确规定，一般不宜开启过高（宜拉至顶端）工作台面上禁止存放无关的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免明显扰动气流的动作。禁止在预过滤器进风口部位放置物品，以免挡住进风口造成进风量减少，降低净化能力。其它必要措施。XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第49页共111页博科生物安全柜操作流程及维护保养程序一.仪器型号:BSC-1500IIB2-X二.目的:保证生物安全柜的正确和正常使用。三.适用范围:本规程适用于生物安全柜的所有使用过程。四.制定依据:生物安全柜使用说明书五.职责:由经培训合格的实验室技术人员操作仪器。六、生物安全柜操作流程：220V、50HZ入执行；按下电源键，以下功能键才能实现：照明、消毒、风机、消音、插座、电动门升降、定时；玻璃门开启时或有其它键按下时均无法选中消毒功能。使用前，将电动门底边降至底端，打开紫外灯，消毒半小时以上；（1）消毒时，人应离开房间，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害；（2）紫外灯管的强度按厂家的规格说明定期检测，建议每季度一次，不合格则更换；将电动门底边升降至距操作台面高200mm操作；为了保证操作的安全性，请提前将实验用品放置在安全柜内，并在实验操作时保持电动门底边距台面高200mm的位置处。6、使用完毕后，将电动门底边降至底端，打开紫外灯，消毒半小时以上后再关闭设备。7、遥控器的使用：预约a、插上电源，打开电源锁，按下预约键SU；b(CONFIRM10分位、10c、时间确定后，通过选择各功能键(例如UV)，相应的显示点亮；第49/111页XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第50页共111页d、再按下电源键，预约功能启动。预约时间开始倒计时，当计为零时对应的功能启动。定时（INSTALLa、插上电源，打开电源锁，按下电源键POWEUV启动；b、按下定时键(INSTALLTIMER)，通过+、-键调整时间的分位，按确定键(CONFIRM)确认；接着以同样的方式调整时间的10分位、小时位及10小时位；c、时间确定后，定时功能启动。当倒计为零时，关闭所有功能，设备处于待机状态。七、面板显示及各按键功能：2.3.4.5.玻璃门上移按键6.玻璃门下移按键、7.消音键、8.电源键、9.报警状态显示、10.静音状态显示、11.更换过滤器提示、12.13.14.15.16.玻璃门上移状态18.19.20.21.风机工作状态22.23.24.25.28.时间八、维护保养及常见故障分析份操作时间的详细记录以备参考和查询！第50/111页XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第51页共111页柜体表面清洁1.1.1或毛巾将皂沫擦净，后用干布或毛巾迅速擦干。被污染或者有痕迹的工作表面、积液槽等，使用医用酒精或其他消毒剂擦净即可。所用的消毒剂不能对304不锈钢产生损坏。1.1.2外部表面及玻璃门清洁任一种非研磨的家庭用清洁剂，使用柔软的棉布或者毛巾擦净。全面保养的周期建议全面保养的周期为一年或1000个工作时。保养方法每日或每周的维护a、操作区消毒和清洗（参照7.1.1说明；b、操作区周边外部表面及玻璃门清洁（参照7.1.2说明cd、将本次维护记录在案；1.3.2每月维护a、外部表面及玻璃门清洁（参照7.1.2说明；b、对设备的工作台面、操作区内壁表面（不含操作区顶部匀风网、玻璃门内面，应以70﹪医用酒精或稀释的家用漂白剂（即0.05﹪的次氯酸钠）余的氯；c、对设备的各种功能进行检查是否异常；d、将本次维护记录在案。1.3.3每年维护a、检查前玻璃门驱动装置的两传送带松紧度保持一致。b、检查紫外灯管和日光灯管。c、每年申请对安全柜的整体性能进行检测，以确保安全柜性能安全。检测费用由使用方负责。第51/111页XX医院SOP

责任部门：检验科文件编号：XXYY-PCR—SOP-001页 码：第52页共111页d、将本次维护记录在案。常见故障分析故障现象故障现象检查部位灯座灯管镇流器排除办法更换灯管更换镇流器线路控制板紫外灯不亮微动开关检查线路更换控制板首先按照照明灯故障检查，然后再进行以下判断检查门关微动开关是否损坏前窗、照明灯、检查前窗、照明灯、风机是否关闭风机控制板更换控制板按键不灵控制板风机不转微动开关确定电源接好，保险管完好确定按键未损坏确定连接线未接触不良更换控制板检查微动开关是否损坏及是否工作正常前窗风机线路控制板插座没电 插座线路控制板压力或风速显 气路示不正确 控制前窗是否开启，前窗开启时风机才能工作风机损坏，更换风机检查线路更换控制板检测插座是否坏检查插座保险管是否坏检查线路更换控制板更换控制板设备不通电传动部分玻璃门电机线路控制板电源检查传动连接及导轨检查玻璃门电机检查线路更换控制板电