吸收光谱吸光度A波长课件

第二章光学分析法导论概述基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。比色法紫外—可见吸光光度法红外光谱法分类主要讨论可见吸光光度法，测定对象以金属离子为主。特点第二章光学分析法导论概述基于物质对光的选择性吸收而建立1第一节物质对光的选择性吸收一、光的基本性质二、物质对光的选择性吸收（一）物质对光产生吸收的原因（二）物质的颜色与光吸收的关系（三）吸收曲线第一节物质对光的选择性吸收一、光的基本性质二、物质对光的2一、光的基本性质光的波粒二象性波动性光按波动形式传播光的干涉衍射折射偏振光的波长λ、频率v、速度c的关系λv＝

cλ:cmv:Hz(s-1)c为光速c＝3×1010cm/s一、光的基本性质光的波粒二象性波动性光按波动形式传播光的干涉3粒子性如光电效应就表现出粒子性。光量子的能量E与波长λ、频率v、速度c的关系λv＝

c光是由“光微粒子”或光量子组成。E＝h

vE＝h

v＝h

c/λ粒子性如光电效应就表现出粒子性。光量子的能量E与波长λ、频4电磁波谱按照波长的长短顺序应用广泛比色法光度法人的眼睛所能感觉到的电磁波。电磁波谱按照波长的长短顺序应用广泛比色法人的眼睛所能感觉到5光的互补色示意图白光红橙黄绿青蓝紫青蓝图中处于直线关系的两种光为互补光，它们按照一定的强度混合可形成白光。400～450450～480480～490490～500500～580580～600600～650650～750单一波长的光---单色光。由不同波长组成的光---复合光。光的互补色示意图白光红橙黄绿青蓝紫青蓝图中处于直线关系的两种6二、物质对光的选择性吸收（一）物质对光产生吸收的原因原子吸收光谱：原子的外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波引起。分子吸收光谱：电子能级振动能级转动能级量子化的特征能级二、物质对光的选择性吸收（一）物质对光产生吸收的原因原子吸收7基态电子能级的跃迁激发态△EE＝△E物质只能吸收与它们分子内部能级差相当的光辐射。不同的物质对不同波长光的吸收具有选择性。基态电子能级的跃迁激发态△EE＝△E物质只能吸收与它们分子8（二）物质的颜色与光吸收的关系物质为什么具有不同的颜色物质的颜色与它所吸收光颜色（波长）有何关系，颜色的深浅由什么决定CuSO4吸收黄色光呈现出互补色：蓝色KMnO4吸收绿青色光呈现出互补色：紫红色白光白光（二）物质的颜色与光吸收的关系物质为什么具有不同的颜色物质的9（三）吸收曲线（吸收光谱）吸光度（A）波长（λ）波长为横坐标，吸光度（对光吸收程度的大小）为纵坐标。能准确地描述物质对各种不同波长光的吸收情况。最大吸收波长λmax＝525nm对于同一物质c不同，曲线的形状和λmax不变在同一波长下，A随c的增大而增大。吸收曲线是吸光光度法选择测量波长的依据。（三）吸收曲线（吸收光谱）吸光度（A）波长（λ）波长为横10第二节光吸收的基本定律一、朗伯-比尔定律二、引起偏离朗伯-比尔定律的因素（一）朗伯-比尔定律（二）吸收系数和桑德尔灵敏度（三）标准曲线的绘制及其应用物理因素化学因素第二节光吸收的基本定律一、朗伯-比尔定律二、引起偏离朗伯11第二节光吸收的基本定律I0Itb朗伯---光的吸收与溶液层的厚度关系。比尔---光的吸收与溶液浓度的定量关系。二者结合称为朗伯-比尔定律，也称光的吸收定律。光的吸收示意图（一）朗伯-比尔定律第二节光吸收的基本定律I0Itb朗伯---光的吸收与溶液12I0ItbA＝lgI0It吸光度透光度T＝ItI0＝lgT1I0＝ItT＝1A＝0It＝0T＝0A∞T：0～1A：∞～０取值范围：I0ItbA＝lgI0It吸光度透光度T＝ItI0＝lgT13A＝Kbcb:液层的厚度c：浓度K：吸收系数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关。

朗伯-比尔定律物理意义成立条件多组分存在时总吸光度A＝A1＋A2＋A3＋…An各组分不存在相互作用A＝Kbcb:液层的厚度c：浓度K：吸收系数K与吸14（二）吸收系数和桑德尔灵敏度吸收系数ab：cmc：g·L－1a：L·

g－1

cm－1摩尔吸光系数κb：cmc：mol·L－1A＝κbcA＝abcκ

：

L·

mol－1

cm－1应用广泛（二）吸收系数和桑德尔灵敏度吸收系数ab：cmc：g·15摩尔吸光系数κ物理意义影响因素对于同一物质，在一定条件下，κ的大小取决于λ，最大吸收波长λmax对应的κmax用来衡量光度法的灵敏度。κmax越大表示测定该物质的灵敏度越高。表示c＝lmol·L-1，b＝lcm时溶液的吸光度。摩尔吸光系数κ物理意义影响因素对于同一物质，在一定条件下，16桑德尔灵敏度(S)指当仪器的检测极限A=0.001时，单位截面积光程内所能检测出来的吸光物质的最低含量，其单位为μg·cm-2。S与κ的关系定义S=M/κ(μg·cm-2)M：吸光物质的摩尔质量（g·mol-1）κ越大，其S值越小，测定方法的灵敏度越高。桑德尔灵敏度(S)指当仪器的检测极限A=0.001时，单位截17（三）标准曲线的绘制及其应用绘制应用A＝κbcλ与b一定，测标准溶液不同c的吸光度A。测未知浓度cx的A值，直接从标准线上查得cx或由Cx=Ax／κ计算得出。0AccxAx（三）标准曲线的绘制及其应用绘制应用A＝κbcλ与b一定，18二、引起偏离朗伯-比尔定律的因素1、非单色光引起的偏离(一）物理因素入射光实际上都是具有某一波段的复合光。由于物质对不同波长光的吸收程度的不同，因而导致对朗伯－比尔定律的偏离。原因二、引起偏离朗伯-比尔定律的因素1、非单色光引起的偏离(一192、非平行光引起的偏离解决办法使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的“单色光”，使标准曲线有较宽的线性范围。人射光波长选择在被测物质的最大吸收处，此处的吸收曲线较为平坦（吸光度随波长的变化较小）。3、介质不均匀引起的偏离如果被测溶液是胶体溶液、乳浊液或悬浮液时，入射光有一部分因散射现象而损失，T减少，A增加。2、非平行光引起的偏离解决办法使用比较好的单色器，从而获得纯20(一）化学因素1、溶液浓度过高引起的偏离2、化学反应引起的偏离溶液浓度过高，吸光质点相互作用会改变κ。一般只使用于稀溶液。溶液中的吸光物质常因解离、缔合、形成新化合物或互变异构等化学变化而改变其浓度，因而导致偏离朗伯—比尔定律。(一）化学因素1、溶液浓度过高引起的偏离2、化学反应引起的偏21某有色溶液当用1cm吸收池时，其透过率为T，若改用2cm的吸收池，则透过率应为：A:2TB:2lgTC:T1/2D:T2A＝KbcA＝－lgT解：T＝10－AT＝10－KbcT1＝10－Kcb1＝1cmT2＝10－2Kcb2＝2cmT2＝(10－Kc)2＝

T12例题某有色溶液当用1cm吸收池时，其透过率为T，若改用2c22第三节吸光光度法仪器一、基本部件二、测量原理三、分光光度计的原理第三节吸光光度法仪器一、基本部件二、测量原理三、分光光度23SP-2102UVPC722型S22PCNV202SP-2102UVPC722型S22PCNV20224一、基本部件单色器吸收池检测系统信号显示系统光源常用：低压钨丝灯（400～2500nm)分光系统（一）光源近紫外区：氢灯或氘灯（185～375nm)。(二)单色器单包器是从光源辐射的复合光中分出单色光的光学装置。由入口狭缝、准直镜、色散元件（棱镜和光栅）、聚焦镜和出口狭缝组成。棱镜通常用玻璃，石英等制成一、基本部件单色吸收检测信号显光常用：低压钨丝灯（400～225（三）吸收池玻璃质石英质可见光区紫外、可见区（四）检测系统检测光信号，并将它转换成电信号，又称光电转换器。光电管和光电倍增管是应用较广泛的一种检测器。（五）信号显示系统将检测器的信号放大，并以一定的方式显示或记录下来。（三）吸收池玻璃质石英质可见光区紫外、可见区（四）检26A＝－lgTT/%因A＝－lgT吸光度的刻度是不均匀的二、吸光度的测量原理A＝－lgTT/%因A＝－lgT吸光度的刻度是不27三、分光光度计的类型（一）单光束分光光度计光源单色器吸收池检测器显示器从光源到检测器只有一条光路，需要作空白调零操作。参比A＝０试样三、分光光度计的类型（一）单光束分光光度计光源单色器吸收池检28（二）双光束分光光度计RSM1透射，

M4反射时I0M1M4M2M3M1反射，M4透射时It从光源到检测器有两条光路，仪器可自动消除空白吸收，不需作空白调零操作，一次即可测得试液和参比之差。检测器单色器M1、M4半反射半投射旋转镜（二）双光束分光光度计RSM1透射，M4反射时I0M129吸收光谱吸光度A波长课件30第四节吸光光度法分析的条件选择一、显色反应及其条件的选择二、测量条件的选择第四节吸光光度法分析的条件选择一、显色反应及其条件的选择31一、显色反应及其条件的选择1、显色反应待测物质是无色或很浅的颜色，需要进行显色反应，所用的试剂称为显色剂。待测物质本身有较深的颜色，直接测定。显色反应主要分为：氧化还原反应、络合反应。一、显色反应及其条件的选择1、显色反应待测物质是无色或很浅的32

选择性好

对比度要大：显色剂对光的吸收与络合物的吸收有明显区别，要求Δλ(称为对比度)大于60nm。有色化合物要稳定：至少保证在测量过程中溶液的吸光度基本恒定。注意

灵敏度高：κ应大于104L·

mol－1

cm－1。

显色反应条件要易于控制。2、显色剂采用无机显色剂和有机显色剂选择性好对比度要大：显色剂对光的吸收与络合物的吸收有明33（二）显色反应条件的控制1、显色剂的用量abc对a和b一般不采用c的显色体系。在平台区选择适当的浓度进行测定。（二）显色反应条件的控制1、显色剂的用量abc对a和342、溶液的酸度影响被测金属离子的存在状态；影响显色剂的平衡浓度和颜色；影响络合物的组成。通过pH与吸光度关系曲线确定pH范围。HR＝R+H+确定pH范围的方法pHA765432、溶液的酸度影响被测金属离子的存在状态；影响显色剂353、时间和温度4、有机溶剂和表面活性剂5、干扰及消除t(min)A2520151053、时间和温度4、有机溶剂36二、测量条件的选择（1）测量波长的选择

应选择被测物质的最大吸收波长的光作为入射光，这称为“最大吸收原则”（maximumabsorption）。

（2）吸光度范围的选择

应控制吸光度在0.15~0.8范围内。控制溶液的浓度或选择不同厚度的吸收池来达到目的。(3)参比溶液的选择

二、测量条件的选择（1）测量波长的选择应选择被测物质的最大37吸收光谱吸光度A波长课件38第五节吸光光度法的应用一、定量分析（一）单组分的测定0AccxAx1、标准曲线法第五节吸光光度法的应用一、定量分析（一）单组分的测定0A392、示差分光光度法（高含量组分的测定）用浓度为cs（cs＜cx）的标准溶液作参比，调节A＝０,再测定试液吸光度Af。As＝κbcsAx＝κbcxAf＝Ax－

As＝κb(cx－cs)＝κb△c用标准溶液作Af～

△c曲线。cx＝

cs＋△c原理方法Af与△c成正比测出未知液的Af，从Af可查出△c。2、示差分光光度法（高含量组分的测定）用浓度为cs（c40二、络和物组成的测定摩尔比法M+nR＝MRn

求n值[R]/[M]A[M]固定，改变[R]，制成一系列的[R]/[M]比值不同的溶液，测定A。M未被完全络和，[MRn]的量随[R]的增大而增加，A逐渐升高。M被络和完全，A最大n二、络和物组成的测定摩尔比法M+nR＝MR41三、酸碱解离常数的测定HB＝H+＋B－Ka＝[H+][B－][HB]当[HB]＝[B－]Ka＝H+或pKa＝pHpH＝pKa＋lg测定不同pH下B－吸光度变化，即可说明[HB]与[B－]浓度的变化，从而找出[HB]＝[B－]之点，此时溶液的pKa＝

pH。[B－][HB]原理方法三、酸碱解离常数的测定HB＝H+＋B－Ka＝[H+][B－42吸收光谱吸光度A波长课件43摩尔吸光系数的单位是（）透光率与吸光度的关系是（）分光光度法的种类很多，但分光光度计都有下列主要部件组成（）、（）、（）、（）、（）。按照比尔定律，浓度c和吸光度A之间的关系应该是通过原点的直线，事实上容易发生线性偏离，导致片里的原因有（）和（）两大因素。摩尔吸收系数的物理意义是吸光物质在（）浓度及（）厚度时的吸光度。在给定条件下（单色光波长、溶剂、温度等），摩尔吸收系数是物质的特性常数。摩尔吸光系数的单位是（）44简述引起比尔定律偏离线性的原因。以邻二氮菲分光光度法测定二价铁离子，称取试样0.5g，经处理后，加入显色剂，最后定容为50mL。用1.0cm的吸收池，在510nm波长下测得吸光度A=0.43.计算试样中铁的质量分数；当溶液稀释一倍后，其T将是多少？（E510=1.1×104L·mol-1·cm-1）简述引起比尔定律偏离线性的原因。45第二章光学分析法导论概述基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。比色法紫外—可见吸光光度法红外光谱法分类主要讨论可见吸光光度法，测定对象以金属离子为主。特点第二章光学分析法导论概述基于物质对光的选择性吸收而建立46第一节物质对光的选择性吸收一、光的基本性质二、物质对光的选择性吸收（一）物质对光产生吸收的原因（二）物质的颜色与光吸收的关系（三）吸收曲线第一节物质对光的选择性吸收一、光的基本性质二、物质对光的47一、光的基本性质光的波粒二象性波动性光按波动形式传播光的干涉衍射折射偏振光的波长λ、频率v、速度c的关系λv＝

cλ:cmv:Hz(s-1)c为光速c＝3×1010cm/s一、光的基本性质光的波粒二象性波动性光按波动形式传播光的干涉48粒子性如光电效应就表现出粒子性。光量子的能量E与波长λ、频率v、速度c的关系λv＝

c光是由“光微粒子”或光量子组成。E＝h

vE＝h

v＝h

c/λ粒子性如光电效应就表现出粒子性。光量子的能量E与波长λ、频49电磁波谱按照波长的长短顺序应用广泛比色法光度法人的眼睛所能感觉到的电磁波。电磁波谱按照波长的长短顺序应用广泛比色法人的眼睛所能感觉到50光的互补色示意图白光红橙黄绿青蓝紫青蓝图中处于直线关系的两种光为互补光，它们按照一定的强度混合可形成白光。400～450450～480480～490490～500500～580580～600600～650650～750单一波长的光---单色光。由不同波长组成的光---复合光。光的互补色示意图白光红橙黄绿青蓝紫青蓝图中处于直线关系的两种51二、物质对光的选择性吸收（一）物质对光产生吸收的原因原子吸收光谱：原子的外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波引起。分子吸收光谱：电子能级振动能级转动能级量子化的特征能级二、物质对光的选择性吸收（一）物质对光产生吸收的原因原子吸收52基态电子能级的跃迁激发态△EE＝△E物质只能吸收与它们分子内部能级差相当的光辐射。不同的物质对不同波长光的吸收具有选择性。基态电子能级的跃迁激发态△EE＝△E物质只能吸收与它们分子53（二）物质的颜色与光吸收的关系物质为什么具有不同的颜色物质的颜色与它所吸收光颜色（波长）有何关系，颜色的深浅由什么决定CuSO4吸收黄色光呈现出互补色：蓝色KMnO4吸收绿青色光呈现出互补色：紫红色白光白光（二）物质的颜色与光吸收的关系物质为什么具有不同的颜色物质的54（三）吸收曲线（吸收光谱）吸光度（A）波长（λ）波长为横坐标，吸光度（对光吸收程度的大小）为纵坐标。能准确地描述物质对各种不同波长光的吸收情况。最大吸收波长λmax＝525nm对于同一物质c不同，曲线的形状和λmax不变在同一波长下，A随c的增大而增大。吸收曲线是吸光光度法选择测量波长的依据。（三）吸收曲线（吸收光谱）吸光度（A）波长（λ）波长为横55第二节光吸收的基本定律一、朗伯-比尔定律二、引起偏离朗伯-比尔定律的因素（一）朗伯-比尔定律（二）吸收系数和桑德尔灵敏度（三）标准曲线的绘制及其应用物理因素化学因素第二节光吸收的基本定律一、朗伯-比尔定律二、引起偏离朗伯56第二节光吸收的基本定律I0Itb朗伯---光的吸收与溶液层的厚度关系。比尔---光的吸收与溶液浓度的定量关系。二者结合称为朗伯-比尔定律，也称光的吸收定律。光的吸收示意图（一）朗伯-比尔定律第二节光吸收的基本定律I0Itb朗伯---光的吸收与溶液57I0ItbA＝lgI0It吸光度透光度T＝ItI0＝lgT1I0＝ItT＝1A＝0It＝0T＝0A∞T：0～1A：∞～０取值范围：I0ItbA＝lgI0It吸光度透光度T＝ItI0＝lgT58A＝Kbcb:液层的厚度c：浓度K：吸收系数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关。

朗伯-比尔定律物理意义成立条件多组分存在时总吸光度A＝A1＋A2＋A3＋…An各组分不存在相互作用A＝Kbcb:液层的厚度c：浓度K：吸收系数K与吸59（二）吸收系数和桑德尔灵敏度吸收系数ab：cmc：g·L－1a：L·

g－1

cm－1摩尔吸光系数κb：cmc：mol·L－1A＝κbcA＝abcκ

：

L·

mol－1

cm－1应用广泛（二）吸收系数和桑德尔灵敏度吸收系数ab：cmc：g·60摩尔吸光系数κ物理意义影响因素对于同一物质，在一定条件下，κ的大小取决于λ，最大吸收波长λmax对应的κmax用来衡量光度法的灵敏度。κmax越大表示测定该物质的灵敏度越高。表示c＝lmol·L-1，b＝lcm时溶液的吸光度。摩尔吸光系数κ物理意义影响因素对于同一物质，在一定条件下，61桑德尔灵敏度(S)指当仪器的检测极限A=0.001时，单位截面积光程内所能检测出来的吸光物质的最低含量，其单位为μg·cm-2。S与κ的关系定义S=M/κ(μg·cm-2)M：吸光物质的摩尔质量（g·mol-1）κ越大，其S值越小，测定方法的灵敏度越高。桑德尔灵敏度(S)指当仪器的检测极限A=0.001时，单位截62（三）标准曲线的绘制及其应用绘制应用A＝κbcλ与b一定，测标准溶液不同c的吸光度A。测未知浓度cx的A值，直接从标准线上查得cx或由Cx=Ax／κ计算得出。0AccxAx（三）标准曲线的绘制及其应用绘制应用A＝κbcλ与b一定，63二、引起偏离朗伯-比尔定律的因素1、非单色光引起的偏离(一）物理因素入射光实际上都是具有某一波段的复合光。由于物质对不同波长光的吸收程度的不同，因而导致对朗伯－比尔定律的偏离。原因二、引起偏离朗伯-比尔定律的因素1、非单色光引起的偏离(一642、非平行光引起的偏离解决办法使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的“单色光”，使标准曲线有较宽的线性范围。人射光波长选择在被测物质的最大吸收处，此处的吸收曲线较为平坦（吸光度随波长的变化较小）。3、介质不均匀引起的偏离如果被测溶液是胶体溶液、乳浊液或悬浮液时，入射光有一部分因散射现象而损失，T减少，A增加。2、非平行光引起的偏离解决办法使用比较好的单色器，从而获得纯65(一）化学因素1、溶液浓度过高引起的偏离2、化学反应引起的偏离溶液浓度过高，吸光质点相互作用会改变κ。一般只使用于稀溶液。溶液中的吸光物质常因解离、缔合、形成新化合物或互变异构等化学变化而改变其浓度，因而导致偏离朗伯—比尔定律。(一）化学因素1、溶液浓度过高引起的偏离2、化学反应引起的偏66某有色溶液当用1cm吸收池时，其透过率为T，若改用2cm的吸收池，则透过率应为：A:2TB:2lgTC:T1/2D:T2A＝KbcA＝－lgT解：T＝10－AT＝10－KbcT1＝10－Kcb1＝1cmT2＝10－2Kcb2＝2cmT2＝(10－Kc)2＝

T12例题某有色溶液当用1cm吸收池时，其透过率为T，若改用2c67第三节吸光光度法仪器一、基本部件二、测量原理三、分光光度计的原理第三节吸光光度法仪器一、基本部件二、测量原理三、分光光度68SP-2102UVPC722型S22PCNV202SP-2102UVPC722型S22PCNV20269一、基本部件单色器吸收池检测系统信号显示系统光源常用：低压钨丝灯（400～2500nm)分光系统（一）光源近紫外区：氢灯或氘灯（185～375nm)。(二)单色器单包器是从光源辐射的复合光中分出单色光的光学装置。由入口狭缝、准直镜、色散元件（棱镜和光栅）、聚焦镜和出口狭缝组成。棱镜通常用玻璃，石英等制成一、基本部件单色吸收检测信号显光常用：低压钨丝灯（400～270（三）吸收池玻璃质石英质可见光区紫外、可见区（四）检测系统检测光信号，并将它转换成电信号，又称光电转换器。光电管和光电倍增管是应用较广泛的一种检测器。（五）信号显示系统将检测器的信号放大，并以一定的方式显示或记录下来。（三）吸收池玻璃质石英质可见光区紫外、可见区（四）检71A＝－lgTT/%因A＝－lgT吸光度的刻度是不均匀的二、吸光度的测量原理A＝－lgTT/%因A＝－lgT吸光度的刻度是不72三、分光光度计的类型（一）单光束分光光度计光源单色器吸收池检测器显示器从光源到检测器只有一条光路，需要作空白调零操作。参比A＝０试样三、分光光度计的类型（一）单光束分光光度计光源单色器吸收池检73（二）双光束分光光度计RSM1透射，

M4反射时I0M1M4M2M3M1反射，M4透射时It从光源到检测器有两条光路，仪器可自动消除空白吸收，不需作空白调零操作，一次即可测得试液和参比之差。检测器单色器M1、M4半反射半投射旋转镜（二）双光束分光光度计RSM1透射，M4反射时I0M174吸收光谱吸光度A波长课件75第四节吸光光度法分析的条件选择一、显色反应及其条件的选择二、测量条件的选择第四节吸光光度法分析的条件选择一、显色反应及其条件的选择76一、显色反应及其条件的选择1、显色反应待测物质是无色或很浅的颜色，需要进行显色反应，所用的试剂称为显色剂。待测物质本身有较深的颜色，直接测定。显色反应主要分为：氧化还原反应、络合反应。一、显色反应及其条件的选择1、显色反应待测物质是无色或很浅的77

选择性好

对比度要大：显色剂对光的吸收与络合物的吸收有明显区别，要求Δλ(称为对比度)大于60nm。有色化合物要稳定：至少保证在测量过程中溶液的吸光度基本恒定。注意

灵敏度高：κ应大于104L·

mol－1

cm－1。

显色反应条件要易于控制。2、显色剂采用无机显色剂和有机显色剂选择性好对比度要大：显色剂对光的吸收与络合物的吸收有明78（二）显色反应条件的控制1、显色剂的用量abc对a和b一般不采用c的显色体系。在平台区选择适当的浓度进行测定。（二）显色反应条件的控制1、显色剂的用量abc对a和792、溶液的酸度影响被测金属离子的存在状态；影响显色剂的平衡浓度和颜色；影响络合物的组成。通过pH与吸光度关系曲线确定pH范围。HR＝R+H+确定pH范围的方法pHA765432、溶液的酸度影响被测金属离子的存在状态；影响显色剂803、时间和温度4、有机溶剂和表面活性剂5、干扰及消除t(min)A2520151053、时间和温度4、有机溶剂81二、测量条件的选择（1）测量波长的选择

应选择被测物质的最大吸收波长的光作为入射光，这称为“最大吸收原则”（maximumabsorption）。

（2）吸光度范围的选择